参苓白术散对乙酸诱导大鼠胃溃疡的保护作用

陈宇宁 曹辉琼 张 毅

（惠州市第三人民医院消化内科，广东 惠州 516002）

参苓白术散对乙酸诱导大鼠胃溃疡的保护作用

陈宇宁 曹辉琼 张 毅

（惠州市第三人民医院消化内科，广东 惠州 516002）

目的探讨参苓白术散对乙酸诱导大鼠胃溃疡的保护作用。方法雄性SD大鼠40只。随机分别为空白对照组、模型组、参苓白术散组、奥美拉唑组。100%冰醋酸诱导胃溃疡，参苓白术散连续灌胃10 d。病理切片观察参苓白术散对乙酸诱导大鼠胃溃疡的病理改变。以溃疡面积来评估胃黏膜损伤程度，Elisa检测胃溃疡组织匀浆液TNF-α的含量。结果参苓白术汤组减少溃疡面积，修复胃组织病理损伤。Elisa结果显示，参苓白术汤减少胃溃疡组织匀浆液TNF-α的含量，与模型组比较有明显的统计学差异（P＜0.05），与阳性对照奥美拉唑结果相当（P＞0.05）。结论参苓白术散能修复溃疡损伤，减少TNF-α含量，对乙酸诱导胃溃疡大鼠有一定的保护作用。

参苓白术；胃溃疡；奥美拉唑；TNF-α

1 材料与方法

1.1 材料：雄性SD大鼠40只，体质量200～220 g，随机分成4组，分别为空白对照组（n=10）、溃疡模型组（n=10）、参苓白术散组（n=10）和奥美拉唑组（n=10），由广东省实验动物中心提供。

1.2 主要试验药物：参苓白术散由本院中药房提供，水煎浓缩，200目滤膜过滤除渣。奥美拉唑肠溶胶囊（奥克）：规格20 mg（1粒），常州四药制药有限公司生产，批号200911224；总蛋白提取及定量试剂盒购于碧云天试剂有限公司，TNF-α的Elisa试剂盒购于武汉博士德生物技术有限公司。苏木素、伊红、PBS均购于中杉金桥生物试剂有限公司。多聚甲醛、石蜡、二甲苯、酒精购于广州东征试剂有限公司。

1.3 主要仪器：德国莱卡石蜡切片机；日本尼康Eoipse Ti-s荧光倒置显微镜及分析软件；美国Thermo全波段酶标仪。

1.4 实验方法

1.4.1 参照经典冰醋酸造模方法[2]。随机将40只SD大鼠随机分成4组，禁食不禁水24 h后，2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，开腹暴露胃，在胃前壁窦体交界同一部位（避开血管），用浸有100%冰醋酸、直径为5 mm的圆形滤纸接触1 min。然后还纳胃体逐层缝合切口。

1.4.2 分组与喂药：雄性SD大鼠40只，称重，标记，随机分为4组，造模1 d后开始灌胃参苓白术散3.5g/（kg·d），奥美拉唑组：3.5 mg/（kg·d）（按成年人等效剂量与大鼠换算的给药剂量），空白对照及模型组给予等体积0.9%的生理盐水，每天1次，连续10 d。处死前1 d禁食不禁水。麻醉大鼠后，剖腹，结扎贲门，摘取全胃，沿胃大弯剪一小口，倾出胃内容物于离心管中。将收集的胃液于低温离心机1500 r/min离心10 min，留取上清胃液，-80 ℃冻存。把胃溃疡组织剪下来分成两份，一份放置10%的甲醛溶液固定。另一份放置-80 ℃冻存。

1.5 观察内容及方法

1.5.1 计算创面愈合面积：采用格子法测定胃溃疡面积，即用透明方格纸描绘出溃疡损伤面积，剪下描绘的格子，以格子计算溃疡面积。

1.5.2 组织学检查：切取溃疡灶或溃疡瘢痕组织，用10%甲醛液固定，按照常规脱水，石蜡包埋，切片4 μm厚度，进行苏木精-伊红染色，每只大鼠组织制作2张切片，随机抽取1张在高倍显微镜下随机选取5个视野观察炎性细胞浸润、黏膜层厚度、纤维排列。应用Nikon Eoipse Ti-s倒置显微镜分析图像。

1.5.3 Elisa检测TNF-α含量：称取胃溃疡组织50 mg，生理盐水匀浆，制作10%的匀浆液，分装成3份，冻存于-80 ℃；BCA法蛋白定量，具体按说明书操作；TNF-α检测，滴加稀释样品50 μL，37 ℃孵育1.5 h，PBS洗板，3次，每次5 min，滴加HRP二抗孵育30 min，洗板，加显色液A，B孵育15 min，加终止液，酶标仪A450检测并分析结果。

2 结 果

2.1 空白对照组术后饮食、饮水活动均无异常，模型组术后出现食欲下降、活动减少、四肢无力、倦卧嗜睡、被毛蓬松。参苓白术散组对饮食、饮水、活动度均有改善。

2.2 参苓白术散对乙酸诱导胃溃疡大鼠溃疡面积的影响。空白对照组未见溃疡，模型组可见溃疡形成，并且面积增大，溃疡有肉芽组织形成。与模型组比较，给药各组大鼠溃疡较为表浅，面积较小，与模型组比较均有统计学差异（P＜0.05），见表1。

表1 参苓白术散对胃溃疡面积的影响（

表1 参苓白术散对胃溃疡面积的影响（

与模型比较 *P＜0.05

组别 n 溃疡面积（mm2）空白对照组 10 0模型组 10 8±2.1参苓白术散组 10 4.6±1.3*奥美拉唑组 10 4.2±1.5*

2.3 参苓白术散对实验性胃溃疡大鼠溃疡组织病理学的影响。正常对照组胃组织结构正常，模型组可见溃疡形成，并见大量炎性细胞浸润，溃疡床有肉芽组织形成，纤维排列紊乱；与模型组比较，给药各组大鼠溃疡较为表浅，黏膜层较厚，炎性细胞浸润少，纤维排列较整齐，与奥美拉唑组相当（图1）。

图1 为HE染色的病理结果（200X）（A：空白对照组；B：模型组；C：参苓白术散组；D：奥美拉唑组）

2.4 如图2显示，参苓白术散显著减低TNF-α的含量，奥美拉唑组与参苓白术散无统计学差异（P＞0.05）

3 讨 论

消化性溃疡（peptic ulcer，PU）是指消化道内受胃酸、胃液和胃蛋白酶浸浴范围的黏膜层、黏膜下层甚至肌层和浆膜层在多种因素影响下发生的局限性组织缺损性疾病[3，4]。现在研究认为其发生机制主要是由于“防御因子” 受损或（和）“攻击因子”作用增强所致。其中炎性因子属于损害胃黏膜的重要“攻击因子。TNF-α又名恶液质素，由单核、巨噬细胞产生，是可成组广泛损伤的促炎性因子TNF-α是引起溃疡形成的烈性介质，在胃黏膜损伤过程中发挥作用。TNF-α是重要的致炎因子，可促进其他细胞因子包括IL-1、IL-2、IL-8等的继发性释放，并引起中性粒细胞活化，急性期蛋白生成，影响黏膜血氧供给，加剧损伤，最终形成溃疡[5，6]。结果显示参苓白术散减少TNF-α的表达，与胃溃疡常用药奥美拉唑的作用相当，而且可以减少服用奥美拉唑带来的副作用，是临床中西医结合治疗胃溃疡的良方。

中医认为，消化性溃疡多因饮食不节，七情内伤，导致脾胃受损，肝脾不和，气滞血瘀。故选用健脾益气、和胃除满、清热解毒的中药组方，参苓白术散由人参、白术、茯苓、灸甘草、山药、扁豆、莲子、薏苡仁、砂仁、陈皮、桔梗组成，具有健脾益气、渗湿止泻之功能。方中人参、茯苓、白术、灸甘草、扁豆、薏苡仁，甘温益脾阳，莲子、山药之甘平滋脾阴，是以扶阳多于护阴，用以补脾元升清气。并以陈皮、砂仁、桔梗调理脾胃。重在补而辅以调，配伍合度，补通得当，有调中养胃之益[7]。临床应用治疗消化性溃疡病疗效显著。结果显示参苓白术散能够增强乙酸诱导胃溃疡大鼠的饮食及活动状态，减少炎性细胞的渗出，减低TNF-α的表达。

综上所述，参苓白术散能改善乙酸诱导的大鼠胃溃疡病理修复，减少溃疡面积，增加动物的饮食，增强动物的活动度，减少TNF-α表达，减少胃黏膜损伤的“攻击因子”，保护胃黏膜损伤，最终达到治疗胃溃疡的作用。

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[3] 李冀.大黄黄连泻心汤、理中丸对消炎痛型胃溃疡寒热证模型大鼠脑组织5-HT和NE含量的影响[J].辽宁中医杂志,2011,38(1):7-9.

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[6] Mei Q.Associations of the IL-1 and TNF gene polymorphisms in the susceptibility to duodenal μLcer disease in Chinese Han population[J]. Int J Immunogenet,2010,37(1):9-12.

[7] 沈仲贤.资生丸在治疗疑难病中的运用[J].河南中医,1999,19(3): 56-57.

R573.1

B

1671-8194（2014）16-0092-02参苓白术散出自《太平惠民和剂局方》，是宋代著名复方，由人参、白术、茯苓、灸甘草、山药、扁豆、莲子、薏苡仁、砂仁、陈皮、桔梗组成，具有健脾益气、和胃除满、渗湿止泻的功用，主治脾胃虚弱、纳呆腹胀、便溏脉虚等症[1]。临床应用治疗消化性溃疡病疗效显著。但对它的作用机制尚不清楚。现在通过对病理的修复，抗炎的疗效观察参苓白术散对大鼠胃溃疡的作用，旨在为临床应用参苓白术散治疗胃溃疡疾病提供实验依据，现报道如下。