Ⅲ型前列腺炎治疗前后前列腺液中B7-H3、IFN-γ、IL-10的表达及临床意义*

钟景琦屈平保钱海宁程曙杰宋爱莉

1. 山东中医药大学（济南 250355）; 2. 上海市长宁区中心医院

·临床经验·

Ⅲ型前列腺炎治疗前后前列腺液中B7-H3、IFN-γ、IL-10的表达及临床意义*

钟景琦1,2屈平保2钱海宁2程曙杰2宋爱莉1*

1. 山东中医药大学（济南 250355）; 2. 上海市长宁区中心医院

Ⅲ型前列腺炎（Chronic non-bacterial prostatitis/ chronic pelvic pain syndrome CP/CPPS）主要表现为长期、反复的骨盆区域疼痛或不适，可伴有不同程度的排尿症状，严重影响患者的生活质量，占前列腺炎疾病的90%左右[1]。传统的分类方法在治疗上并没有显示出明显的指导作用，近年来许多学者认为自身免疫因素在慢性前列腺炎中占有重要地位，但在众多的检测结果中，各家对免疫细胞因子的表述不一致，甚至存在互相矛盾的现象，因此，寻找更敏感的检测因子变得越发重要。近年来共刺激分子B7-H3的研究逐渐深入，其在子宫、胰腺、前列腺组织中含量丰富，在不同疾病的免疫过程中起到共刺激或共抑制的作用。Wei等[2]研究认为B7-H3在前列腺炎的发病过程中有明显变化，但对其相关的下游细胞因子的调节没有报道。因此本文旨在研究Ⅲ型前列腺炎治疗前后前列腺液中B7-H3的表达的基础上，进一步探索下游免疫反应的变化情况。

资料与方法

一、临床资料

选取2013年1月至2013年9月在泌尿外科门诊就诊的符合Ⅲ型前列腺炎诊断标准的患者56例。同时选取15例来院做婚前查体的健康男性作为对照组。

1. 纳入标准：按照参考文献[1]制定纳入标准：（1）年龄在18～50岁，平均34.7岁，病程3月至5年。（2）长期、反复的骨盆区域疼痛或不适；（3）伴尿频、尿急、尿不尽等排尿不适症状；（4）前列腺液（Expressed prostatic secretions, EPS）镜检：卵磷脂小体正常或减少，白细胞≥或＜10个/HP；（5）前列腺液或按摩后尿液细菌培养阴性。（6）美国国立卫生院前列腺炎症状指数评分（NIH-Chronic Prostatitis Symptom Index, NIH-CPSI）≥10分；（7）1周内未服用其他治疗慢性前列腺炎和影响排尿的药物；其中（2）、（3）、（5）项为必备。

2. 排除标准：（1）年龄＜18岁或＞50岁者；（2）前列腺液或按摩后尿液中细菌培养或支原体、衣原体等病原微生物检测阳性者；（3）由精索静脉曲张、附睾炎等其他疾病引起的疼痛不适者；（4）具有严重的肝肾功能不全者。

3. 给药方法：西乐葆加清热活血类中成药为主的综合治疗，共4周。

二、标本的收集和保存

治疗前及治疗4周后收集前列腺液，采集前禁欲3～5d，常规前列腺按摩获取，除少许行常规镜检外，剩余标本于2 h内放置-80℃保存，统一测定分析。

三、标本ELISA 法测定

采用 ELISA 法检测前列腺液中的B7-H3、IFN-γ、IL-10含量，ELISA 试剂盒购自上海蓝晶试剂公司，操作程序严格按照试剂盒所提供方法进行。所有标本复温至4℃，量少样本采用倍比稀释，用酶标仪在450 nm 波长下测定吸光度（A值），根据标准曲线计算样品浓度。

四、统计学分析

结 果

一、治疗前后B7-H3、IFN-γ、IL-10水平的变化

Ⅲ 型前列腺炎患者治疗前后B7-H3、IFN-γ、IL-10水平测定结果，见表1。治疗前后 EPS 中的B7-H3水平均低于正常对照组，治疗前B7-H3水平最低，治疗后浓度增加，有显著差异（P＜0.05）。IFN-γ、IL-10均出现治疗前升高，治疗后降低的结果，比较有统计学差异（P＜0.05），但均高于正常对照组。

表1 各组EPS中B7-H3、IFN-γ、IL-10的表达

二、B7-H3与IFN-γ、IL-10水平的相关性

慢性前列腺炎患者EPS中B7-H3水平与IFN-γ、IL-10水平进行相关性分析，结果示B7-H3与IFN-γ、IL-10无相关性，IFN-γ与IL-10呈明显正相关（r=0. 524，P＜0.01）。

讨 论

近年来对Ⅲ型前列腺炎的研究显示，炎症和自身免疫反应都参与了Ⅲ型前列腺炎的病理生理过程，说明该疾病存在免疫反应网络的功能失调。在众多的免疫细胞因子中，多数研究结果表明选择的观察指标有效，但能够应用于临床的较少，而对免疫反应的起始阶段的文献报道更少。因此，本研究选取了免疫反应中的上、下节点来探索前列腺炎局部免疫反应的变化。

在免疫反应过程中，T细胞的活化是第一步，必须有协同刺激分子或协同抑制分子提供的第二信号参与。B7-H3属于协同刺激或抑制分子，是近年来发现的一个B7家族新成员，它在免疫调节中起着重要作用[3]。研究发现，B7-H3是免疫调节开始的关键因子之一[4]，免疫应答的发生与其对下游细胞因子的调控关系密切。本研究中，我们发现Ⅲ型前列腺炎患者EPS 中的B7-H3水平明显低于正常对照组，治疗后浓度明显增加，接近正常对照组。这与Wei等[2]的研究结果相似，他们发现健康对照组高于慢性前列腺炎（chronic prostatitis，CP）组EPS中sB7-H3的水平，两者有显著性差异，但血清检测却发现两组之间无差别，提示局部的前列腺液更能反应出CP的变化过程。B7-H3mRNA在淋巴及非淋巴器官内均广泛表达，但蛋白仅表达于活化的淋巴细胞、DC细胞以及部分组织器官，如肺、肝脏、前列腺等[5]。我们推测B7-H3在Ⅲ型前列腺炎的发病过程中起到抑制作用。患者前列腺局部环境中的B7-H3浓度低，不能抑制T细胞的活化，从而导致T细胞免疫反应的继续发展。在临床应用中，我们可以将CP患者EPS中B7H3浓度作为诊断与疗效评价的指标之一，这样可将具有前列腺炎症状的患者进行区分，有效避免诊断的扩大化。

本研究进一步分析了B7-H3调控的下游促炎症细胞因子IFN-γ和抑炎性细胞因子IL-10的表达情况。结果发现，前列腺炎患者EPS液中促炎症细胞因子IFN-γ增高，与丁协刚[7]的研究结论一致，在前列腺炎症状明显阶段，局部的炎症及免疫反应明显，活化的T细胞增多，产生的INF-α随之增加。通过综合治疗， INF-α随之减少，患者症状减轻，达到正常治愈状态。本研究中抑炎性细胞因子IL-10在治疗前呈现出高表达状态，治疗后下降。我们认为前列腺炎患者 EPS中IFN-γ的高水平表达，造成组织炎症损伤，机体为了维持促炎性细胞因子与抑炎性细胞因子之间的平衡做出的自身调节，这与黄志洪[8]的观点相同，在治疗过程中，IL-10的发展趋势和IFN-γ的一致。

虽然最初的研究[9]认为，B7-H3刺激T细胞增殖并选择性地诱导INF-γ分泌。但近年来的报道更趋向认为B7-H3介导的信号可抑制T细胞的体外增殖,降低INF-γ的分泌[10,11]。因此，B7-H3对细胞因子的进一步调节，是揭开其导致免疫反应的重要途径。尽管本研究未发现治疗前后的EPS中B7-H3与INF-γ、IL-10的表达存在相关性，但治疗后B7-H3的表达升高，IFN-γ和IL-10表达下降，一定程度上反映出三者的潜在相互关系。进一步揭示B7-H3对下游因子IFN-γ和IL-10的调控作用对寻找B7-H3的发病机制具有重要的意义。本研究中B7-H3与INF-γ、IL-10表达无相关可能是受到检测标本量少的影响，抑或三者并非简单的线性对应关系。

综上所述，B7-H3为免疫调节的关键因子之一，在Ⅲ型前列腺炎的发生发展过程中发挥抑制作用，治疗后B7-H3的表达下降，以及IFN-γ、IL-10的升高，提示我们在临床治疗中，可将B7-H3并可作为了解病情、评价治疗效果的一个有价值的指标。

前列腺炎; B7-H3; 干扰素II型; 白细胞介素10

1 张凯主编. 前列腺炎诊治指南2011版. 北京:人民卫生出版社, 2011: 548-581

2 Wei X, Zhang G, Yuan H,et al. Detection and quantitation of soluble B7-H3 in expressed prostatic secretions: A novel marker in patients with chronic prostatitis.J Urol2011; 185(2): 532-537

3 Pardoll DM. Sponning molecular immunnology into successful immunal therapy.Nat Rev Immuno J2002; 2(4): 227-238

4 Sun WK, Gajewska Bu, Okada H,et al. The B7 familymember B7-H3 preferentially down-regulates T helper type-1-mediated immune responses.Nat Immunol2003; 4(9): 899-906

5 Suh WK, Wang SX, Jheon AH,et al. The immune regulatory protein B7-H3 promotes osteoblast differentiation and bone mineralization.Proc Natl Acad Sci USA2004; 101(35): 12969-12973

6 Miller LJ, Fischer KA, Goralnik SJ,et al.Interleukin-10 levels in seminal plasma: implications for chronic prostatitis-chronic pelvic pain syndrome.J Urol2002; 167(2 pt 1): 753-756

7 丁协刚, 李世文, 郑新民, 等. 慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛综合征患者前列腺液中IFN-γ、TGF-β1的检测. 中华男科学杂志 2006; 12(11): 982-984

8 黄志洪, 袁少英, 李慎果, 等. 检测前列腺液中 IL-8、IL-10 对于慢性非细菌性前列腺炎分型的临床意义. 中国医药导报 2009; 6(12): 25-27

9 Chapoval AL, Ni J, Lau JS,et al.B7-H3: a costimulatory molecule for T cell activation and INF-gamma production.Nat Immumol2001; 2(3): 269-274

10 Prasad DV, Nguyen T, Li Z,et al. Murine B7-H3 is a negative regulator of T cells.J Immunol2004; 173(4): 2500-2506

11 Xu J, Huang B, Xiong P,et al. Soluble mouse B7-H3 down-regulates dendritic cell stimulatory capacity to allogenic T cell proliferation and production of IL-2 and IFN-gamma.Cell Mol Immunol2006; 3(3): 235-240

（2013-12-09收稿）

10.3969/j.issn.1008-0848.2014.04.015

R 697.33

资助: 本课题受上海市长宁区科学基金（资助号CNKW2013J08）资助
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, E-mail:songaili218@126.com