高效液相色谱法测定养血生发胶囊中羌活醇和异欧前胡素的含量*

刘庆焕，傅 予，王文彤

（天津市医药科学研究所，天津 300020）

高效液相色谱法测定养血生发胶囊中羌活醇和异欧前胡素的含量*

刘庆焕，傅 予，王文彤

（天津市医药科学研究所，天津 300020）

[目的]建立高效液相色谱法（HPLC）测定养血生发胶囊中羌活醇和异欧前胡素的含量测定方法。[方法]色谱柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液（45∶55），流速：1 mL/min，检测波长：310 nm，柱温：25℃。[结果]羌活醇和异欧前胡素分别在0.204～1.224 μg（r=0.999 7）和0.103～0.616 μg（r= 0．999 8）线性关系良好，平均回收率分别为99.24%（RSD=0.74%）和99.86%（RSD=1.36%）。[结论]该方法简便易行、重复性好，可用于养血生发胶囊中羌活醇和异欧前胡素的质量控制。

养血生发胶囊；羌活醇；异欧前胡素；高效液相色谱法

养血生发胶囊收载于《中国药典》2010年版一部，由制何首乌、熟地黄、羌活、当归等9味中药组成，具有养血补肾、祛风生发的功效[1]。药理研究表明，养血生发胶囊对碳酸铊引起的脱毛与体质量减轻具有明显的保护作用[2]，并能增加C57BL/6脱发模型小鼠毛囊组织中血管内皮生长因子（VEGF）表达、毛囊血管数及毛囊数，促进毛发生长[3]。目前《中国药典》标准中仅对君药何首乌2，3，5，4′－四羟基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖进行了含量测定。为了更加全面地评价养血生发胶囊的质量，本研究建立了养血生发胶囊中羌活醇和异欧前胡素的含量测定方法，为全面控制其质量提供参考依据。

1 仪器与试药

仪器与色谱柱：岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪，二极管阵列检测器。

试剂：甲醇（分析纯，天津市化学试剂批发公司），磷酸（分析纯，天津市化学试剂批发公司），乙腈（色谱纯，迪马科技有限公司），水为娃哈哈纯净水。

对照品：羌活醇（中国药品生物制品检定所购置，批号：111820-201001），异欧前胡素（中国药品生物制品检定所购置，批号：110827-200407）。

试验药品：养血生发胶囊（药厂中试样品，批号：J01094，J01095，J01096）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液（45∶55），流速：1 mL/min，检测波长：310 nm，柱温：25℃。理论塔板数以羌活醇计应不低于4 500，以异欧前胡素计应不低于7 000。对照品、供试品及阴性溶液色谱见图1～3。

图1 对照品溶液色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of standard substance

图2 供试品溶液色谱图Fig.2 HPLC chromatogram of sample

图3 阴性溶液色谱图Fig.3 HPLC chromatogram of negative control

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品溶液的制备 取羌活醇与异欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含羌活醇60 μg、异欧前胡素30 μg的混合溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品约10 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，称定质量，超声处理（250 W，40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方配比，取除羌活外其他药材，按2010版《中国药典》[制法]项下的工艺制成胶囊剂[1]，再按“2.2.2”供试品溶液制备方法，制得阴性样品溶液。

2.3 线性关系考察 取羌活醇和异欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含羌活醇10.2、20.4、30.6、40.8、51.0、61.2 μg的系列溶液。加甲醇制成每 1 mL含异欧前胡素为 5.13、10.26、15.39、20.52、24.65、30.78 μg的系列溶液，分别精密吸取上述溶液各20 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”色谱条件分析，分别测定各自峰面积，以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积值为纵坐标，进行线性回归，得羌活醇和异欧前胡素回归方程分别为Y^=3×106X－53 562（r=0．999 7），Y^=4×106X－61 058（r=0．999 8）。结果表明，羌活醇和异欧前胡素分别在0.204～1.224μg、0.103～0.616 μg范围内呈良好线性关系。

2.4 精密度实验 精密吸取对照品溶液20 μL，按“2.1”色谱条件分析，连续进样6次，对照品中羌活醇峰面积值的RSD为0.86%，异欧前胡素峰面积值的RSD为0.82%。

2.5 重复性实验 取同一批样品（批号J01094），研细，取6份，按照“2.2.2”供试品溶液制备操作，按“2.1”色谱条件分析，测定，计算含量。样品中羌活醇和异欧前胡素含量的RSD分别为0.41%和0.96%。

2.6 稳定性实验 取同一批样品（批号J01094），研细，取1份，按照“2.2.2”供试品溶液制备操作，按“2.1”色谱条件分析，精密吸取供试品溶液20 μL，分别于0、2、4、6、9、24 h进样，测定羌活醇的RSD为1.22%，异欧前胡素的RSD为1.90%，结果表明，供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.7 加样回收率实验 取同一批样品（批号J01094），研细，取9份，每份约5 g，精密称定，分别按照5 g样品中所含被测成分的50%、100%、150%精密加入羌活醇与异欧前胡素对照品溶液50 mL，每一个水平平行3份，按照“2.2.2”供试品溶液制备操作，制得供试品溶液，按“2.1”色谱条件分析，计算回收率，结果平均回收率分别为99.24%和99.86%，RSD分别为0.74%和1.36%，见表1和表2。

表1 羌活醇回收率实验结果Tab.1 Results of recovery tests of notopterol

表2 异欧前胡素回收率实验结果Tab.2 Results of recovery tests of isoimperatorin

2.8 样品测定 取3份不同批号制剂，按照“2.2.2”供试品溶液制备操作，按“2.1”色谱条件分析，测定，计算样品中羌活醇与异欧前胡素含量，结果见表3。

表3 养血生发胶囊中羌活醇与异欧前胡素的含量测定结果（n=3）Tab.3 Results of content determination of notopterol and isoimperatorin(n=3)

3 讨论

3.1 流动相的选择 参照《中国药典》2010年版一部羌活项下含量测定方法，考察了不同组成的流动相（乙腈-水、乙腈-磷酸水和乙腈-甲酸水）系统。结果发现两种酸水系统均能改善峰型，而乙腈-磷酸水系统较乙腈-醋酸水系统分离效果更好。

3.2 提取方法的优化 为使被测化合物提取效果最佳，考察了不同提取方法（超声、回流）、不同提取溶剂（甲醇、乙醇）和不同提取时间（15、30、45、60 min）等因素对提取效率的影响，最终确定甲醇超声30min提取效果最好。

羌活含有挥发油、香豆素、有机酸等活性成分[4]。目前多为针对羌活药材活性成分检测的研究[5-11]，而对其制剂的报导较少[12-13]，本实验建立了养血生发胶囊中羌活醇和异欧前胡素的含量测定方法，为全面控制其质量提供了参考依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京:化学工业出版社,2010:946.

[2]刘世明,边天羽.养血生发胶囊的药理实验研究[J].天津中医药, 1987,4(4):12-15.

[3] 陈芙蓉,岳 南,只德广,等.养血生发胶囊对C57BL/6小鼠毛发生长的影响及机制[J].现代药物与临床,2010,25(2):137-140. [4]金盼盼.药用植物羌活的研究进展 [J].安徽农业科学,2011,39 (2):815-816,903.

[5]高建邦,宋平顺,郁 霞.HPLC法同时测定羌活中异欧前胡素和阿魏酸含量[J].中药材,2010,33(2):231-233.

[6]周 毅,蒋舜媛,孙 辉,等.羌活中挥发油和异欧前胡素的含量测定[J].中国中药杂志,2007,32(7):566-569.

[7]古丽娜·沙比尔,郭洪祝,郭 慧,等.HPLC法测定羌活中阿魏酸、羌活醇、苯乙基阿魏酸醋和异欧前胡素[J].中草药,2006,37 (6):937-940.

[8]杨安东,马 艳,王 笳,等.人工栽培羌活中异欧前胡素的含量测定[J].中国药房,2006,17(15):1172-1173.

[9]朱美晓,陈 燕,易进海,等.羌活药材薄层色谱鉴别与含量测定[J].时珍国医国药,2011,22(1):116-117.

[10]李春丽,周玉碧,周国英,等.野生与栽培羌活药材挥发油含量及组分的比较分析[J].分析试验室,2012,31(1):29-34.

[11]刘卫根,王亮生,周国英,等.羌活不同部位有机酸和香豆素类化合物含量的比较研究[J].药物分析杂志,2012,32(11):1950-1956,1967.

[12]赵渤年,丁晓彦,刘 青.HPLC法测定九味羌活丸中异欧前胡素的含量[J].山东医药,2008,42(26):94-95.

[13]何 丹,杨 林,张景勍.超高效液相色谱法测定九味羌活颗粒中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].中国医院药学杂志,2013,33 (24):2053-2055.

Determination of notopterol and isoimperatorin in Yangxue Shengfa capsules by HPLC

LIU Qing-huan,FU Yu,WANG Wen-tong
（Tianjin Institute of Medical Science，Tianjin 300020,China）

[Objective]To establish the method for determining notopterol and isoimperatorin in Yangxue Shengfa capsules.[Methods] Chromatography column:Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18was used;the mobile phase consisted of acetonitrile-0.1%phosphoric acid(45∶55);the flow rate was 1.0 mL/min;the detection wavelength was 310 nm;the column temperature was set at 25℃.[Results]The calibration curve showed a good linear correlation in the range of 0.204～1.224 μg(r=0.999 7)for notopterol and 0.103～0.616 μg(r=0.999 8) for isoimperatorin.The average recoveries of notopterol and isoimperatorin were 99.24%(RSD=0.74%)and 99.86%(RSD=1.36%). [Conclusion]The method is simple,accurate and specific for the quality control of Yangxue Shengfa capsules.

Yangxue Shengfa capsule;notopterol;isoimperatorin;HPLC

R284

A

1672-1519（2014）11-0693-03

2014-06-16）

（本文编辑：高 杉，马晓辉）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.11.15

天津市中医药管理局中医、中西医结合科研课题资助项目（11083）。

刘庆焕（1984-），女，研究实习员，主要从事中药化学与质量标准研究。