抗炎合剂的定性定量方法研究

刘为民

（海安县中医院，江苏海安 226600）

抗炎合剂的定性定量方法研究

刘为民

（海安县中医院，江苏海安 226600）

目的：建立抗炎合剂的定性定量测定方法。方法：采用薄层色谱法对抗炎合剂中的黄芩、连翘进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定制剂中黄芩苷的含量。结果：薄层色谱斑点清晰，黄芩苷的含量鉴别方法专属性强，黄芩苷在0.84～8.4μg线性关系良好（r=0.9996），加样回收率为99.31%，RSD为0.31%（n=6）。结论：该方法可行，结果准确，可有效控制抗炎合剂的质量。

抗炎合剂 质量标准 黄芩 连翘

抗炎合剂是本院研制的纯中药制剂，方由黄芩、连翘、银花藤、皂角刺、蒲公英、野菊花、甘草组成，具有清热凉血、消肿排毒作用，用于痔疮、肛裂、肛窦炎、肛乳头炎及妇科炎症。多年临床研究表明，抗炎合剂疗效显著，无明显不良反应。为了保证药品质量和疗效，本研究采用薄层色谱法对抗炎合剂中的黄芩、连翘进行定性鉴定，采用高效液相色谱法测定抗炎合剂中黄芩苷的含量，制订了切实可行的质量控制标准，现报道如下。

1 仪器与试药

硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）；高效液相色谱仪；黄芩对照药材（中国药品生物制品检验研究所）；连翘对照药材（中国药品生物制品检验研究所）；甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯；抗炎合剂为本院制剂室制备。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别方法参考文献[1]。

2.1.1 黄芩的薄层鉴别取本品20mL，蒸干，残渣加乙醚80mL，冷浸4h，滤过，将滤液浓缩至干，残渣用1mL氯仿溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1g，同法制成对照品溶液。按处方量，取除黄芩外其余药味按工艺要求制成缺黄芩的样品，按供试品溶液的制备方法，制备阴性供试品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一氧化铝-CMC薄层板上，以石油醚-氯仿（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以碘化铋钾试剂显色。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品不显斑点，见图1-A。

2.1.2 连翘的薄层鉴别取本品20mL，蒸干，残渣用乙醚20mL超声提取10min，乙醚挥散至干，残渣溶于乙醇0.5mL中，作为供试品溶液。另取连翘对照药材1g，同法制成对照药材溶液。按处方量，取除连翘外其余药味按工艺要求制成缺连翘的样品，按供试品溶液的制备方法，制备阴性供试品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以氯仿-甲醇（20∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，10%硫酸喷雾后，于110℃加热10min。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品不显斑点，见图1-B。

图1 抗炎合剂中黄芩、连翘的薄层鉴别

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件色谱柱为Dikma Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）。流动相：乙腈（A）-0.02mol/L、磷酸二氢钾（B）作梯度洗脱——A：0～20min，25%；20～25min，50%；25～30min，25%。流速1.0mL/min；检测波长278nm；柱温：室温（25℃）。

2.2.2 样品溶液的制备方法参考文献[2]。对照品溶液的制备：称取黄芩苷对照品约10.01mg，精密称定，甲醇溶解并定容于25mL容量瓶中，即得黄芩对照品溶液。供试品溶液的制备：取抗炎合剂20mL，置三角烧瓶中，精密加入70%乙醇溶液50mL，回流提取1h，放冷，滤过，取滤液1mL，甲醇稀释定容于5mL容量瓶。阴性对照溶液的制备：取除黄芩外的处方量药材，按照制剂制备工艺同法制得阴性样品，取此阴性样品50mL，按供试品溶液方法制备，即得。

2.2.3 系统适用性试验在上述色谱条件下，分别吸取20μL对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液依次进样。在供试品中黄芩苷成分得到较好分离，黄芩苷色谱峰的保留时间与对照品溶液中黄芩苷的保留时间一致，缺黄芩药材的阴性对照溶液色谱图中未出现黄芩苷色谱峰[3]，见图2。

图2 各样品色谱峰

2.2.4 标准曲线的绘制精密吸取对照品2、4、6、8、10、20μL进样，按以上色谱条件测定。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为y=2653.72x+0.28，r=0.9996。结果表明，黄芩苷在进样量为0.84～8.4μg时线性关系良好。

2.2.5 稳定性试验取同一供试品溶液，在2、4、8、12、18、20、24h分别进样，黄芩苷的RSD为0.93%，说明供试品在24h内稳定。

2.2.6 精密度试验精密吸取供试品10μL进样，连续进样6次，进行测定。以峰面积计算黄芩苷的RSD为1.9%，结果表明精密度良好。

2.2.7 重复性试验按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备同一批号样品供试品溶液5份（n=5），按上述色谱条件，分别精密吸取20μL进样，平均峰面积为277221，RSD＝1.31%。表明重复性良好。

2.2.8 加样回收试验取已知含量的供试品约5g，精密称定，共6份，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入黄芩苷对照品溶液适量，依法测定。结果见表1。

表1 抗炎合剂黄芩苷加样回收率测定

2.2.9 样品含量测定按对照品方法，对抗炎合剂3个样品进行测定，并计算含量，结果见表2。

表2 3个批号抗炎合剂中黄芩苷含量测定

3 讨论

抗炎合剂方中黄芩性寒味苦，具清热燥湿、泻火解毒之效，为本方主要起效药物，故以黄芩中黄芩苷的含量作为本制剂的质量控制标准。

根据《中华人民共和国药典》2010年版规定，黄芩苷的含量不得低于9.0%，根据处方计算黄芩苷含量应不得低于0.72%，经测定三个样品的含量分别为1.53%、1.56%、1.51%，均符合此要求，故黄芩苷的含量可作为本制剂的质量标准控制。

经多批次检验，证明抗炎合剂质量稳定，本检验法快速简便，适合医院制剂生产。

[1]国家药典委员会.中国药典（一部）.北京：化学工业出版社，2010：282

[2]骆方莲.舒肝排石胶囊的制备与质控标准.时珍国医国药，2001，75（12）：1095

[3]苗仁华，许倩.HPLC法测定茵栀黄注射液中黄芩苷的含量.中国医药指南，2012，10（24）：447

编辑：吴宁

R289.5

A

1672-397X（2014）11-0056-02

刘为民（1962-），男，本科学历，副主任中药师，主要从事中药制剂、药品检验工作。haianzdm@163.com

2014-04-10