癌—睾丸抗原SSX2在肝细胞癌中的表达研究

黎鹏　郑慧玲　韦立军

【摘要】 目的 检测癌-睾丸抗原SSX2在肝细胞癌组织中的表达。方法 应用RT-PCR技术， 对40例肝细胞癌的癌组织及相应癌旁组织进行SSX2基因的mRNA检测。结果 肝细胞癌组织中SSX2 mRNA表达阳性率为27.5%（11/40）， 而相应的癌旁组织无SSX2 mRNA表达阳性率为0（0/40）， 两组比较差异有统计学意义（P<0.001）。统计学分析显示SSX2表达与AFP阳性率、HbsAg阳性率、病理分级、肝细胞癌肿瘤大小、肝细胞癌是否伴有肝硬化的情况等相关的临床指标均无关 （P>0.05）。结论 SSX2在HCC中呈低频率的表达。

【关键词】 肝细胞癌；癌-睾丸抗原；SSX2；逆转录-聚合酶链反应

肝细胞癌 （hepatoc ellular carcinomas， HCC） 是我国常见的恶性肿瘤， 目前临床治疗已积累了丰富经验， 在肿瘤免疫治疗方面也有了一定的进展。目前已发现的肿瘤相关抗原较多， CT抗原（cancer testis antigen）是其中最有前景的一种。因为这类抗原只在睾丸及广泛的肿瘤组织有表达。在CT抗原中有一种SSX抗原的多基因家族[1]。其中SSX2在HCC的表达研究目前已有报道[2， 3]， 但在广东地区未见报道， 为了了解其在广东地区HCC的表达情况， 本研究应用RT-PCR技术检测HCC及相应癌旁组织， 初步探讨广东地区HCC中SSX2基因表达的意义。

1 材料与方法

1. 1 标本来源 40例HCC及相应癌旁肝组织标本取自附院， 所有病例均经病理查实。标本于外科手术切除后即液氮冻存备用。

1. 2 RT-PCR分析 总RNA提取采用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法， cDNA质量检测方法见参考文献[4]。取2 ?g总RNA进行cDNA合成 （逆转录试剂盒， MBI公司）， 取 1 ?l cDNA进行RT-PCR检测 （30 ?l反应体系）， 设睾丸cDNA为阳性对照， 不加模板为空白对照。基因序列，经计算机辅助设计，使用Omiga 2软件设计引物， SSX2引物（MWG Biotech公司）序列为：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense：TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G， 退火温度为58℃， 扩增产物大小为434 bp。PCR反应完毕进行1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。

1. 3 统计学方法 采用最新版本SPSS19.0统计软件包进行统计学分析。

2 结果

2. 1 SSX2在HCC组织中低表达 癌旁肝组织SSX2表达阳性率为0（0/40）， HCC组织SSX2表达阳性率为27.5%（11/40）， P值<0.01。

2. 2 SSX2的表达与临床指标无相关关系 SSX2与AFP阳性率、HBsAg阳性率、病理分级、HCC肿瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情况等相关的临床指标均无关 （P>0.05）， 结果见表1。

3 讨论

在SSX抗原基因家族中， 包括有SSX1～SSX5等5种基因， 其中SSX2属于肿瘤基因， 可以使滑膜肉瘤患者发生t（X， 18）易位。SSX2最早在血清检测法（SEREX）分析中发现， 被命名为HOM-MEL-40蛋白， 进一步通过Northern Blot技术证实其为SSX2[5]。在以往的研究中， SSX2在HCC的mRNA表达率在30%～46.7%之间。Chen等[2]检测30例肝细胞癌中SSX2呈较高的表达率为46.7%， 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低频率的表达率在30%～35.7%之间。

本研究RT-PCR检测结果为SSX2在HCC组织的mRNA表达率为27.5% （11/40）， 相应的癌旁肝组织均未检测到SSX2的mRNA， 两组比较差异有统计学意义（P<0.001）， 提示SSX2在HCC组织的表达高于癌旁肝组织。对HCC的SSX2检测与临床指标之间的关系进行分析， 发现在6项指标中， SSX2 在HBsAg阳性和阴性的HCC组织表达率分别是22.58%和44.44%， 有表达差异， 但是这个差异并无统计学意义（P>0.05）；在其余的5个指标中， 在AFP阳性和阴性， Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级的病理分级， 直径>5 cm和≤5 cm的肿瘤， 有无肝硬化及在患者>45岁和≤45岁的HCC组织中， SSX2的表达率都很接近， 统计学结果均无相关性（P>0.05）。本项目的研究结果显示癌-睾丸抗原SSX2在广东地区的HCC组织中表达率稍低于以往的研究结果， 是因为标本例数的原因还是不同地域组织的原因， 有待于进一步的研究发现；而SSX2的表达情况与患者年龄、性别、病理分级、肿瘤大小、HBsAg及AFP的水平等无关， 则与以往的报道一致。

参考文献

[1] Zahn M. Cancer/Testis （CT）Gene Database. Cancer Immunology online， 2006.

[2] Chen C H， Chen G J， Lee H S， et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett， 2001， 164（2）： 189.

[3] 肖瑞雪，农蔚霞，宋琼，等.癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义.中国医药导报， 2013， 10（05）： 4-6.

[4] Gure AO， Stockert E， Arden KC， et al . CT10： a new cancer-testis （CT） antigen homologous to CT7 and the MAGE family， identified by representational-difference analysis. Int J Cancer， 2000， 85（5）：726.

[5] Smith HA， Cronk RJ， Lang JM， et al.Expression and immunothera-peutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs， 2011，71（21）：6785-6795.endprint

【摘要】 目的 检测癌-睾丸抗原SSX2在肝细胞癌组织中的表达。方法 应用RT-PCR技术， 对40例肝细胞癌的癌组织及相应癌旁组织进行SSX2基因的mRNA检测。结果 肝细胞癌组织中SSX2 mRNA表达阳性率为27.5%（11/40）， 而相应的癌旁组织无SSX2 mRNA表达阳性率为0（0/40）， 两组比较差异有统计学意义（P<0.001）。统计学分析显示SSX2表达与AFP阳性率、HbsAg阳性率、病理分级、肝细胞癌肿瘤大小、肝细胞癌是否伴有肝硬化的情况等相关的临床指标均无关 （P>0.05）。结论 SSX2在HCC中呈低频率的表达。

【关键词】 肝细胞癌；癌-睾丸抗原；SSX2；逆转录-聚合酶链反应

肝细胞癌 （hepatoc ellular carcinomas， HCC） 是我国常见的恶性肿瘤， 目前临床治疗已积累了丰富经验， 在肿瘤免疫治疗方面也有了一定的进展。目前已发现的肿瘤相关抗原较多， CT抗原（cancer testis antigen）是其中最有前景的一种。因为这类抗原只在睾丸及广泛的肿瘤组织有表达。在CT抗原中有一种SSX抗原的多基因家族[1]。其中SSX2在HCC的表达研究目前已有报道[2， 3]， 但在广东地区未见报道， 为了了解其在广东地区HCC的表达情况， 本研究应用RT-PCR技术检测HCC及相应癌旁组织， 初步探讨广东地区HCC中SSX2基因表达的意义。

1 材料与方法

1. 1 标本来源 40例HCC及相应癌旁肝组织标本取自附院， 所有病例均经病理查实。标本于外科手术切除后即液氮冻存备用。

1. 2 RT-PCR分析 总RNA提取采用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法， cDNA质量检测方法见参考文献[4]。取2 ?g总RNA进行cDNA合成 （逆转录试剂盒， MBI公司）， 取 1 ?l cDNA进行RT-PCR检测 （30 ?l反应体系）， 设睾丸cDNA为阳性对照， 不加模板为空白对照。基因序列，经计算机辅助设计，使用Omiga 2软件设计引物， SSX2引物（MWG Biotech公司）序列为：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense：TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G， 退火温度为58℃， 扩增产物大小为434 bp。PCR反应完毕进行1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。

1. 3 统计学方法 采用最新版本SPSS19.0统计软件包进行统计学分析。

2 结果

2. 1 SSX2在HCC组织中低表达 癌旁肝组织SSX2表达阳性率为0（0/40）， HCC组织SSX2表达阳性率为27.5%（11/40）， P值<0.01。

2. 2 SSX2的表达与临床指标无相关关系 SSX2与AFP阳性率、HBsAg阳性率、病理分级、HCC肿瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情况等相关的临床指标均无关 （P>0.05）， 结果见表1。

3 讨论

在SSX抗原基因家族中， 包括有SSX1～SSX5等5种基因， 其中SSX2属于肿瘤基因， 可以使滑膜肉瘤患者发生t（X， 18）易位。SSX2最早在血清检测法（SEREX）分析中发现， 被命名为HOM-MEL-40蛋白， 进一步通过Northern Blot技术证实其为SSX2[5]。在以往的研究中， SSX2在HCC的mRNA表达率在30%～46.7%之间。Chen等[2]检测30例肝细胞癌中SSX2呈较高的表达率为46.7%， 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低频率的表达率在30%～35.7%之间。

本研究RT-PCR检测结果为SSX2在HCC组织的mRNA表达率为27.5% （11/40）， 相应的癌旁肝组织均未检测到SSX2的mRNA， 两组比较差异有统计学意义（P<0.001）， 提示SSX2在HCC组织的表达高于癌旁肝组织。对HCC的SSX2检测与临床指标之间的关系进行分析， 发现在6项指标中， SSX2 在HBsAg阳性和阴性的HCC组织表达率分别是22.58%和44.44%， 有表达差异， 但是这个差异并无统计学意义（P>0.05）；在其余的5个指标中， 在AFP阳性和阴性， Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级的病理分级， 直径>5 cm和≤5 cm的肿瘤， 有无肝硬化及在患者>45岁和≤45岁的HCC组织中， SSX2的表达率都很接近， 统计学结果均无相关性（P>0.05）。本项目的研究结果显示癌-睾丸抗原SSX2在广东地区的HCC组织中表达率稍低于以往的研究结果， 是因为标本例数的原因还是不同地域组织的原因， 有待于进一步的研究发现；而SSX2的表达情况与患者年龄、性别、病理分级、肿瘤大小、HBsAg及AFP的水平等无关， 则与以往的报道一致。

参考文献

[1] Zahn M. Cancer/Testis （CT）Gene Database. Cancer Immunology online， 2006.

[2] Chen C H， Chen G J， Lee H S， et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett， 2001， 164（2）： 189.

[3] 肖瑞雪，农蔚霞，宋琼，等.癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义.中国医药导报， 2013， 10（05）： 4-6.

[4] Gure AO， Stockert E， Arden KC， et al . CT10： a new cancer-testis （CT） antigen homologous to CT7 and the MAGE family， identified by representational-difference analysis. Int J Cancer， 2000， 85（5）：726.

[5] Smith HA， Cronk RJ， Lang JM， et al.Expression and immunothera-peutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs， 2011，71（21）：6785-6795.endprint

【摘要】 目的 检测癌-睾丸抗原SSX2在肝细胞癌组织中的表达。方法 应用RT-PCR技术， 对40例肝细胞癌的癌组织及相应癌旁组织进行SSX2基因的mRNA检测。结果 肝细胞癌组织中SSX2 mRNA表达阳性率为27.5%（11/40）， 而相应的癌旁组织无SSX2 mRNA表达阳性率为0（0/40）， 两组比较差异有统计学意义（P<0.001）。统计学分析显示SSX2表达与AFP阳性率、HbsAg阳性率、病理分级、肝细胞癌肿瘤大小、肝细胞癌是否伴有肝硬化的情况等相关的临床指标均无关 （P>0.05）。结论 SSX2在HCC中呈低频率的表达。

【关键词】 肝细胞癌；癌-睾丸抗原；SSX2；逆转录-聚合酶链反应

肝细胞癌 （hepatoc ellular carcinomas， HCC） 是我国常见的恶性肿瘤， 目前临床治疗已积累了丰富经验， 在肿瘤免疫治疗方面也有了一定的进展。目前已发现的肿瘤相关抗原较多， CT抗原（cancer testis antigen）是其中最有前景的一种。因为这类抗原只在睾丸及广泛的肿瘤组织有表达。在CT抗原中有一种SSX抗原的多基因家族[1]。其中SSX2在HCC的表达研究目前已有报道[2， 3]， 但在广东地区未见报道， 为了了解其在广东地区HCC的表达情况， 本研究应用RT-PCR技术检测HCC及相应癌旁组织， 初步探讨广东地区HCC中SSX2基因表达的意义。

1 材料与方法

1. 1 标本来源 40例HCC及相应癌旁肝组织标本取自附院， 所有病例均经病理查实。标本于外科手术切除后即液氮冻存备用。

1. 2 RT-PCR分析 总RNA提取采用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法， cDNA质量检测方法见参考文献[4]。取2 ?g总RNA进行cDNA合成 （逆转录试剂盒， MBI公司）， 取 1 ?l cDNA进行RT-PCR检测 （30 ?l反应体系）， 设睾丸cDNA为阳性对照， 不加模板为空白对照。基因序列，经计算机辅助设计，使用Omiga 2软件设计引物， SSX2引物（MWG Biotech公司）序列为：Sense：GTG CTC AAA TAC CAG AGA AGA TC；Antisense：TTT TGG GTC CAG ATC TCT CGT G， 退火温度为58℃， 扩增产物大小为434 bp。PCR反应完毕进行1.5%琼脂糖凝胶电泳分析。

1. 3 统计学方法 采用最新版本SPSS19.0统计软件包进行统计学分析。

2 结果

2. 1 SSX2在HCC组织中低表达 癌旁肝组织SSX2表达阳性率为0（0/40）， HCC组织SSX2表达阳性率为27.5%（11/40）， P值<0.01。

2. 2 SSX2的表达与临床指标无相关关系 SSX2与AFP阳性率、HBsAg阳性率、病理分级、HCC肿瘤大小及HCC是否伴有肝硬化的情况等相关的临床指标均无关 （P>0.05）， 结果见表1。

3 讨论

在SSX抗原基因家族中， 包括有SSX1～SSX5等5种基因， 其中SSX2属于肿瘤基因， 可以使滑膜肉瘤患者发生t（X， 18）易位。SSX2最早在血清检测法（SEREX）分析中发现， 被命名为HOM-MEL-40蛋白， 进一步通过Northern Blot技术证实其为SSX2[5]。在以往的研究中， SSX2在HCC的mRNA表达率在30%～46.7%之间。Chen等[2]检测30例肝细胞癌中SSX2呈较高的表达率为46.7%， 其余的研究表明SSX2在HCC中呈低频率的表达率在30%～35.7%之间。

本研究RT-PCR检测结果为SSX2在HCC组织的mRNA表达率为27.5% （11/40）， 相应的癌旁肝组织均未检测到SSX2的mRNA， 两组比较差异有统计学意义（P<0.001）， 提示SSX2在HCC组织的表达高于癌旁肝组织。对HCC的SSX2检测与临床指标之间的关系进行分析， 发现在6项指标中， SSX2 在HBsAg阳性和阴性的HCC组织表达率分别是22.58%和44.44%， 有表达差异， 但是这个差异并无统计学意义（P>0.05）；在其余的5个指标中， 在AFP阳性和阴性， Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级的病理分级， 直径>5 cm和≤5 cm的肿瘤， 有无肝硬化及在患者>45岁和≤45岁的HCC组织中， SSX2的表达率都很接近， 统计学结果均无相关性（P>0.05）。本项目的研究结果显示癌-睾丸抗原SSX2在广东地区的HCC组织中表达率稍低于以往的研究结果， 是因为标本例数的原因还是不同地域组织的原因， 有待于进一步的研究发现；而SSX2的表达情况与患者年龄、性别、病理分级、肿瘤大小、HBsAg及AFP的水平等无关， 则与以往的报道一致。

参考文献

[1] Zahn M. Cancer/Testis （CT）Gene Database. Cancer Immunology online， 2006.

[2] Chen C H， Chen G J， Lee H S， et al. Expressions of cancer-testis antigens in human hepatocellular carcinomas. Cancer Lett， 2001， 164（2）： 189.

[3] 肖瑞雪，农蔚霞，宋琼，等.癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义.中国医药导报， 2013， 10（05）： 4-6.

[4] Gure AO， Stockert E， Arden KC， et al . CT10： a new cancer-testis （CT） antigen homologous to CT7 and the MAGE family， identified by representational-difference analysis. Int J Cancer， 2000， 85（5）：726.

[5] Smith HA， Cronk RJ， Lang JM， et al.Expression and immunothera-peutic targeting of the SSX family of cancer-testis antigens in prostate Cancer. Cancer Rcs， 2011，71（21）：6785-6795.endprint