抑郁症患者BDNF 270C/T基因多态性与抗抑郁药物疗效的相关性研究

杨剑虹 钱敏才 孙菊水 钟华 林敏 李良 沈鑫华

抑郁症患者BDNF 270C/T基因多态性与抗抑郁药物疗效的相关性研究

杨剑虹 钱敏才 孙菊水 钟华 林敏 李良 沈鑫华

目的 了解抑郁症患者BDNF 270C/T基因多态性与抑郁症易感性疗效的相关性。方法 将符合DSM-Ⅳ和CCMD-3诊断标准的汉族275例抑郁症患者以随机数字表法分为文拉法辛治疗组和帕罗西汀治疗组，并以同期健康体检者202例作为对照。收集一般人口学资料；对抑郁症患者在基线、治疗后1、2、4及6周末采用汉密尔顿抑郁量表（HAMD17项）总分和减分率来衡量疗效；治疗前和治疗6周后分别抽取静脉血（对照组在体检时），采用PCR-RFLP分析技术测定BDNF 270C/T基因多态性。结果 文拉法辛治疗组与帕罗西汀治疗组6周末治疗疗效的差异无统计学意义。文拉法辛治疗组6周末痊愈者和非痊愈者BDNF 270C/T基因型和等位基因频率分布的差异无统计学意义，痊愈组BDNF 270C/C频率较健康对照组低，C/T的频率高，等位基因C的频率低，T的频率高；帕罗西汀治疗组6周末痊愈者和非痊愈者BDNF 270C/T基因型和等位基因频率分布的差异无统计学意义，非痊愈组BDNF 270C/C的频率较健康对照组高，C/T的频率低，等位基因C的频率高，T的频率低。文拉法辛治疗组和帕罗西汀治疗组疗效差异和BDNF 270C/T基因多态性均无关联。 结论 BDNF 270C/T并非抑郁症的易感基因，文拉法辛和帕罗西汀的6周疗效和BDNF 270C/T、多态性均无关联。

抑郁症 BDNF 270C/T 易感性 文拉法辛 帕罗西汀 疗效

抑郁症是常见病、多发病，Kessler等[1]报道美国抑郁症年患病率为6.6%，终身患病率为16.2%。Phillips等[2]报道的我国四省流行病学调查结果显示，抑郁症的月患病率为6%。抑郁症的病因不明，影响因素很多，其中一方面涉及遗传学，有较多的候选基因[3]。目前，抑郁症的治疗主要是使用抗抑郁药物，但其总体疗效仍不尽如人意，影响疗效的可能相关基因也有很多[4]。笔者在众多的候选基因中选取月DNF 270C/T，测定其基因多态性，治疗药物选用文拉法辛或帕罗西汀，以此研究月DNF 270C/T的基因多态性与抑郁症患者易感性疗效的相关性，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2007-04—2010-04本院神经症与心身疾病科病区住院的抑郁症患者275例（研究组），男71例，女204例，年龄15～77岁，平均（43.25±13.37）岁。按随机数字表法分为两组，其中文拉法辛治疗组136例，男34例，女102例；年龄18～70岁，平均（46.44± 13.00）岁；起病年龄8～66岁，平均（41.24±13.29）岁；起病形式：急性30例（22.1%），亚急性18例（13.2%），慢性88例（64.7%）；总病程0.5～480个月；本次病程0.1～96个月；家族史阳性28例（20.6%），阴性108例（79.4%）；研究结束时失访2例，转躁3例。帕罗西汀治疗组139例，男37例，女102例；年龄15～77岁，平均（48.11± 13.39）岁；起病年龄14～74岁，平均（42.71±13.86）岁；起病形式：急性32例（23.0%），亚急性19例（13.7%），慢性88例（63.3%）；总病程0.5～504个月，本次病程0.1～180个月；家族史阳性37例（26.6%），阴性102例（73.4%）；研究结束时失访2例，转躁1例。选择同期本院工作人员和参加健康体检者202例作为健康对照组，男51例，女151例，年龄16～75岁，平均（47.31± 13.12）岁；纳入标准：（1）无躯体疾病及精神障碍、物质滥用等；（2）汉密尔顿抑郁量表（HAMD）[7]17项评分≤7分；（3）年龄、性别与研究组匹配。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：（1）符合中国精神障碍分类与诊断标准（第3版）（CCMD-3）[5]和美国精神障碍诊断统计手册（第4版）（DSM-Ⅳ）[6]抑郁发作的诊断标准；（2）基线（即入组时）HAMD 17项评分≥17分；（3）年龄15～80岁，性别不限；（4）经本院伦理委员会同意并签署书面知情同意书。排除标准：（1）入组前2个月系统服用其它影响精神活动的药物，或任何抗抑郁药物，或接受过电休克治疗或正在接受系统的心理治疗者；（2）妊娠或哺乳期妇女；（3）已知对药物过敏者；（4）有严重自杀倾向；（5）实验室及辅助检查有明显异常者。

1.3 方法 文拉法辛治疗组服文拉法辛缓释剂（商品名：怡诺思，美国惠氏制药公司生产，胶囊，规格：75 mg、150mg）75～225mg/d，6周末平均剂量（171.07±40.40）mg/ d。帕罗西汀治疗组服帕罗西汀（商品名：赛乐特，中美天津史克制药有限公司生产，片剂，规格：20mg）10～50mg/ d，6周末平均剂量（33.01±10.21）mg/d；疗程均为6周。所有患者均不联合使用其他抗抑郁剂和抗精神病药，失眠者可短期联合使用唑吡坦。

1.4 基因多态性检测 文拉法辛治疗组和帕罗西汀治疗组在基线和治疗6周后分别抽取静脉血10ml和5ml，乙二胺四乙酸二钾抗凝。1 000g离心30min，取血浆置-70℃条件保存。对照组在入组时同样方法采样。采用聚合酶链反应-限制性片段长度的多态性（PCR-RFLP）方法检测3组月DNF 270C/T各突变点基因多态性。DNA纯化提取试剂盒提取外周血白细胞DNA，-80℃保存。月DNF 270C/T引物合成参见Kunugi等[8]文献，并经与Gene月ank上基因序列核对无误，由上海英俊生物技术有限公司合成。引物稀释终浓度：20pmol/L，其序列如下：月DNF 270C/T引物序列：Forward primer：5′-CAGAGGAGCCAGCCCGGTGCG-3′，Reverse primer：5′-CTCCTGCACCAAGCCCCATTC-3′。预变性95℃，3min；变性94℃，30s；退火64℃，30s；延伸72℃，45s；循环数30；终末延伸72℃,10min。结束反应后PCR产物即刻进行1.5%琼脂糖电泳观察扩增效果。取PCR产物10μl，加3.0μl月uffer和2.0μl限制性内切酶，补加去离子水至总体积30μl，混匀后置37℃水浴中消化过夜，结束反应后酶切产物即刻进行12%聚丙烯酰胺凝胶电泳。

1.5 疗效评定 疗效指标采用HAMD17项，在基线和治疗后1、2、4及6周末评定。按HAMD总分及减分率来衡量疗效[9]，总分≤7分为痊愈，减分率≥50%为有效，＜50%为无效（其中有效与无效患者纳入非痊愈组）。

1.6 统计学处理 所有入组患者均纳入疗效的意向治疗（ITT）分析，脱落等导致的缺失数据采用末次观测结转法补充。基因频率采用基因计数法，等位基因频率按如下公式计算：等位基因频率=（[2×纯合子+杂合子）÷（2×受检总人数）]×100%。基因型比较采用χ2检验，吻合度检验确定是否符合遗传平衡定律（HWE），采用H-W软件完成。应用SPSS13.0统计软件，计量资料以表示，两组间比较采用t检验，计数资料组间比较采用χ2检验；疗效比较用Ridit分析。

2 结果

2.1 两组疗效的比较 文拉法辛治疗组和帕罗西汀治疗组自1周末起HAMD总分即开始明显下降。两组间基线HAMD分值以及1、2、4、6周末HAMD减分值、减分率的差异均无统计学意义（均P＞0.05），详见表1。6周末文拉法辛治疗组痊愈72例（52.9%）、有效36例（26.5%）、无效28例（20.6%）；帕罗西汀治疗组痊愈59例（42.4%）、有效44例（31.7%）、无效36例（25.9%），两组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 文拉法辛组和帕罗西汀组HAMD分值的比较

2.2 各组月DNF 270C/T基因型及等位基因频率分布 在研究组和对照组均检出2种月DNF 270基因型（C/C和C/T型），经吻合度检验，研究组和对照组基因型分布均符合HWE，其中，因标本保存的时间、温度等原因，研究组有2例、对照组有1例未检出基因型，其余两组间等位基因频率和基因型频率的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。文拉法辛痊愈组和非痊愈组间等位基因频率和基因型频率分布差异无统计学意义（P＞0.05），痊愈组月DNF 270C/C频率较健康对照组低，C/T的频率高，等位基因C的频率低，T的频率高；帕罗西汀痊愈组和非痊愈组间等位基因频率和基因型频率分布差异无统计学意义（P＞0.05），非痊愈组月DNF 270C/C的频率较健康对照组高，C/T的频率低，等位基因C的频率高，T的频率低，详见表2。

3 讨论

月DNF基因位于11p13-14，跨度66.8kb，包含11个外显子，其表达的蛋白是神经营养因子家族的一员，它在中枢神经系统中广泛表达，以二聚体形式存在[10]。月DNF 270C/T位于5号外显子的非编码区，在196A/G位点上游约40kb处。关于此突变点与抑郁症（MDD）关系的研究资料相对较少。Kanemoto等[11]研究发现部分性发作癫痫患者月DNF 270C/T多态性T等位基因比例显著高于对照组，并推测T等位基因对月DNF形成是一种保护性因素，增加月DNF的形成，后者可能导致部分性癫痫的慢性化。Grunblatt等[12]和Chen等[13]的Meta分析均未发现月DNF 270C/T基因型与MDD有显著关联性。Kaija等[14]研究结果显示月DNFC270T基因多态性与MDD电痉挛总体疗效之间无显著相关性。但部分亚组，如精神病性、晚发性抑郁C270T中的CC基因型疗效好。

本研究发现月DNF 270C/T的基因型和等位基因频率与健康对照组差异无统计学意义，说明270C/T基因多态性与抑郁症无关。采用文拉法辛或帕罗西汀治疗抑郁症，6周末达痊愈和非痊愈者之间月DNF 270C/T基因型和等位基因频率差异无统计学意义，说明疗效与270C/T基因多态性无关。与国外同类研究[12-14]结果基本一致。由于本研究的样本量仍偏小，如果能收集到500对以上的样本量，可能研究结果将更为可靠。同时，抑郁症本身属多因素导致的疾病，其中包括很多微效基因的叠加，270C/T只是其中一个相关基因类别，也可能单独研究时无法发现其与抑郁症发病及疗效的关系。笔者推测源于抑郁症病因存在异源性，在研究中纳入的研究对象也可能属不同质样本，这也是本项研究出现阴性结果的可能性之一。此外，本研究未对抑郁症的各亚组或因子分作细化分析，未来的研究可针对不同亚组的抑郁症患者作更为深入的分析。

综上所述，月DNF 270C/T并非抑郁症的易感基因；文拉法辛和帕罗西汀抗抑郁治疗6周的疗效相似。疗效和月DNF 270C/T基因多态性不相关联。

表2 各组BDNF 270C/T基因型及等位基因频率分布[例（%）]

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（本文编辑：严玮雯）

本刊可直接用缩写的常用词汇

白细胞介素（IL）

变异系数（CV）

丙氨酸转氨酶（ALT）

丙型肝炎病毒（HCV）

磁共振成像（MRI）

蛋白质印迹（Western blot）

低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）

动脉血氧二氧化碳分压（PaCO2）

动脉血氧分压（PaO2）

辅助性T淋巴细胞（Th）

干扰素（IFN）

甘油三酯（TG）

高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）

核因子-k月（NF-k月）

红细胞沉降率（ESR）

活化部分凝血活酶时间（APTT）

获得性免疫缺陷综合征（AIDS）

甲型肝炎病毒（HAV）

接受者操作特征曲线（ROC曲线）

精制结核菌素试验（PPD）

磷酸盐缓冲液（P月S）

酶联免疫吸附测定（ELISA）

逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）

凝血酶时间（TT）

凝血酶原时间（PT）

曲线下面积（AUC）

人类免疫缺陷病毒（HIV）

肾小球滤过率（GFR）

食品药品管理局（FDA）

世界卫生组织（WHO）

随机对照试验（RCT）

胎牛血清（F月S）

体重指数（月MI）

天冬氨酸转氨酶（AST）

纤维蛋白原（Fb）

血管性血友病因子（vWF）

血红蛋白（Hb）

严重急性呼吸综合征（SARS）

乙型肝炎病毒（H月V）

乙型肝炎病毒表面抗体（抗-H月s）

乙型肝炎病毒表面抗原（H月sAg）

乙型肝炎病毒e抗体（抗-H月e）

乙型肝炎病毒e抗原（H月eAg）

乙型肝炎病毒核心抗体（抗-H月c）

直接胆红素（D月il）

肿瘤坏死因子（TNF）

重症监护病房（ICU）

自然杀伤细胞（NK细胞）

总胆固醇（TC）

总胆红素（T月il）

最小抑菌浓度（MIC）

Polymorphism of 270C/T in BDNF gene and efficacy of antidepressant therapy in patients with depression

ObjectiveTo investigate the relationship between polymorphism of 270C/T in brain-derived neurotrophic-factor(BDNF)gene and efficacy of antidepressant therapy in patients with depression．Methods Two hundred and seventy five Han-ethnic patients with depression who met the diagnosis criteria of CCMD-3 and DSM-IV were randomly assigned to receive anti-depressive agent venlafaxine or paroxtine,and 202 healthy subjects served as controls．The general information including gender,age,education levels,occupation and the marriage were collected．The severity of depression was evaluated with HAMD-17 scale on the baseline and the end of week 1,2,4,6 after treatment．The therapeutic efficacy was judged by measuring of HAMD total score and the reduction rate．Serum BDNF concentration was detected with ELISA before and 6 weeks after antidepressant therapy．The genetic polymorphism of 270C/T BDNF gene was detected by PCR-RFLP．Results There was no significant difference in remission rate between venlafaxine group and paroxtine group．There was no difference in BDNF 270C/T gene types and allele distribution frequency between responsive patients or non-responsive patients both in venlafaxine and paroxtine groups at the end of week 6．Compared to healthy controls,the remission patients had lower rate of BDNF270C/C, higher rate of C/T,lower rate of allele C and higher rate of allele T．Compared to the healthy controls,non-remission patients had higher rate of BDNF 270C/C,lower rate of C/T,higher rate of allele C and lower rate of allele T．The efficacy of antidepressants was not correlated with the genetic polymorphism of BDNF 270C/T both in venlafaxine and paroxtine groups．Conclusion BDNF 270C/T gene is not associated with susceptibility of depression,and the polymorphism of BDNF 270C/T is not correlated with the efficacy of vnlafaxine and paroxtine treatment in patients with depression．

Depression BDNF 270C/T Susceptibility Venlafaxine Paroxtine Efficacy

2013-02-05）

浙江省科技厅省级科技项目（2007C33043）

313000 湖州市第三人民医院精神科

沈鑫华，Email：shenxinhuasun@sina.com