胃癌中表皮生长因子受体2蛋白的表达及其临床意义

2014-04-12孙鑫鑫王超群黄必飞王艳曾悦

浙江医学 2014年2期

孙鑫鑫王超群黄必飞王艳曾悦

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目的探讨表皮生长因子受体2（HER2）蛋白在胃癌及癌旁胃组织中的表达，分析其与胃癌临床病理特征的关系。方法用免疫组织化学EnVision法检测579例胃癌组织和65例癌旁胃组织中HER2蛋白表达并进行比较。结果胃癌和癌旁胃组织中HER2过表达率分别为10．54%（61/579）和0（0/65），两者HER2过表达率差异有统计学意义（P＜0．01）。肠型胃癌HER2蛋白过表达率（17．90%）明显高于弥漫型胃癌（4．18%）和混合型胃癌（8．57%），均P＜0．01；高-中分化胃癌HER2过表达率（14．91%）明显高于低分化胃癌（6．58%），P＜0．01。HER2蛋白表达与胃癌临床分期、淋巴结转移及浆膜浸润无关（均P＞0．05）。结论胃癌中HER2表达增强，其高表达与肠型胃癌和高-中分化胃癌密切相关。肠型胃癌和高-中分化胃癌中HER2高表达的机制有待进一步探索。

表皮生长因子受体2 胃癌免疫组化蛋白表达

胃癌是我国乃至全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率在恶性肿瘤中均位于前列[1]。目前，胃癌的治疗以手术切除加化疗为主，但肿瘤的复发和转移仍然导致患者生存率低下[2]。因此，寻找与胃癌发生、发展相关的生物标记物，并对其进行干预，对提高患者生存质量和生存率有着重要意义。目前，虽然有较多关于胃癌中表皮生长因子受体2（HER2）蛋白表达状态的研究，但由于研究人群和评分标准的差异，导致各研究报道的HER2蛋白阳性率（4%～53%，中位数18%）[2]有较大的偏差。本研究采用Hofmann等[3]建立的胃癌中HER2蛋白表达的评分标准，应用免疫组化方法检测579例胃癌组织和65例癌旁胃组织中HER2蛋白表达，以求进一步研究并验证HER2蛋白在胃癌中的表达及其与临床病理意义。

1 对象和方法

1.1 对象 2006-01—2013-03我院手术切除的胃腺癌患者579例，男394例，女185例；年龄32～86岁，中位年龄67岁。Lauren分型：肠型257例，弥漫型287例，混合型35例；组织学分级：高-中分化腺癌275例，低分化腺癌304例；临床分期：Ⅰ/Ⅱ期298例，Ⅲ/Ⅳ期281例；有淋巴结转移340例，无淋巴结转移239例；侵及浆膜者391例，未侵及浆膜者188例。患者术前均未做化疗、免疫及放射治疗。其中65例另取癌旁胃组织。

1.2 试剂兔抗人HER2蛋白单克隆抗体、EnVision二步法试剂盒购自基因科技（上海）有限公司，均为丹麦Dako公司产品。

1.3 方法所有组织均以10%甲醛溶液固定，石蜡包埋，4μm连续切片，分别做HE及免疫组化染色。免疫组化实验采用柠檬酸盐缓冲液高压热修复，EnVision二步法染色，DAB/H2O2显色，苏木素复染。用已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照，具体步骤按说明书进行。染色结果由两位病理医师阅片核实诊断。

1.4 结果判断 HER2蛋白染色主要定位于细胞膜，其结果判定采用Hofmann等[3]建立的评分标准，0（阴性）：无着色或＜10%细胞有细胞膜着色；1+（阴性）：＞10%细胞有弱的、不连续的细胞膜着色，需要高倍物镜（×40）观察染色；2+（意义不明确的）：＞10%细胞有弱到中等的、完整的或底外侧的细胞膜着色；3+（阳性）：＞10%细胞有中到强的、完整的或底外侧的细胞膜着色，只需要低倍物镜（×2.5～5）即可观察染色。本研究中以0～1+为HER2蛋白表达阴性，2+～3+为HER2蛋白过表达。

1.5 统计学处理采用SPSS 13.0统计软件，应用χ2检验对胃癌和癌旁胃组织中HER2蛋白表达、胃癌中HER2蛋白表达与临床病理特征的关系进行分析。

2 结果

2.1 HER2蛋白在胃癌及癌旁胃组织中的表达 HER2蛋白在胃癌中的过表达率为10.54%（61/579，其中3+45例，2+16例），在癌旁胃组织中的过表达率为0（0/65），胃癌组织与癌旁胃组织HER2蛋白过表达率差异有统计学意义（P＜0.01）（图1）。

图1 HER2蛋白免疫组化染色[A：胃癌组织HER2蛋白表达3+（×400）；B：癌旁胃组织HER2蛋白表达阴性（×200）]

2.2 胃癌组织HER2蛋白表达与患者临床病理特征的关系见表1。

由表1可见，HER2蛋白过表达率与胃癌Lauren分型及组织学分化程度相关（均P＜0.01），肠型胃癌HER2蛋白过表达率明显高于弥漫型胃癌和混合型胃癌；高-中分化胃癌HER2蛋白过表达率明显高于低分化胃癌（P＜0.01）。HER2蛋白表达与胃癌临床分期、淋巴结转移及浆膜浸润无关（均P＞0.05）。

表1 胃癌组织HER2蛋白表达与患者临床病理特征的关系

3 讨论

HER2是表皮生长因子受体（EGFR）家族重要成员，编码一个相对分子质量1.85×105的具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白受体（又称p185）。目前有研究认为，HER2自身磷酸化后激活下游PI3K/AKT和RAF/ERK1/ 2两条主要的信号通路，在细胞生长、增殖、分化以及肿瘤细胞侵袭转移过程中起了重要作用[4-5]。

HER2基因扩增和蛋白过表达存在于20%～30%的乳腺浸润性导管癌患者，且与患者预后不良相关[6]，针对HER2的分子靶向药物Herceptin使部分HER2蛋白过表达乳腺癌患者受益。因此，关于各种恶性肿瘤中HER2表达成为研究的热点。已有研究表明，HER2基因扩增和蛋白过表达不仅存在于乳腺癌中，还见于卵巢癌、子宫内膜癌、结肠癌、食管癌等[7]。

目前，虽然有较多关于胃癌中HER2蛋白表达状态的研究，但各研究报道的HER2蛋白阳性率从4%～53%不等[2]，存在较大偏差。近年来，有4项研究报道中国胃癌患者HER2蛋白阳性率（3+）从5.8%～9.8%不等[8-11]，他们均采用了Hofmann等[3]建立的评分标准。本课题检测了579例胃癌HER2蛋白表达，发现45例为3+（7.77%），16例2+（2.76%），总体HER2蛋白过表达率为10.54%（61/579），在文献报道的范围内。与癌旁胃组织比较，胃癌组织中HER2蛋白表达明显增强，为HER2蛋白阳性胃癌患者抗HER2分子靶向治疗提供了理论基础。我们还发现，肠型胃癌HER2蛋白过表达率明显高于弥漫型和混合型胃癌，高-中分化胃癌HER2蛋白过表达率明显高于低分化胃癌，这些结果与多数国、内外研究报道相符[11-12]，提示HER2蛋白过表达与特定类型癌细胞亚群相关。因高-中分化胃癌多数是肠型胃癌，低分化胃癌多数是弥漫型胃癌，所以上述结果是一致的。然而，亦有文献报道HER2蛋白在肠型胃癌和低分化胃癌中高表达，而在弥漫型胃癌和高-中分化胃癌中低表达[13]。多数研究报道HER2蛋白过表达与患者预后不良相关，而与临床分期、淋巴结转移及肿瘤浸润深度等临床病理特征无关[2，11-12]。

肠型胃癌及高-中分化胃癌中HER2蛋白高表达的机制，有学者认为肠型胃癌和弥漫型胃癌的发生是受不同的信号传导途径影响，不同组织病理学特征的胃癌之间存在不同模式的遗传学改变[12]。弥漫型胃癌结合乳腺浸润性小叶癌HER2蛋白表达状态分析，可以找到一些共同点，即这两种肿瘤均HER2蛋白低表达，且E-cadherin表达缺失，而肠型胃癌和乳腺浸润性导管癌则正好相反。因此，我们提出疑问，HER2蛋白表达是否与E-cadherin通路相关？我们将在下一步研究中继续验证这个问题。

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Expression of HER2 in gastric carcinoma and its clinicopathological significance

Objective To investigate the expression of epidermal growth factor receptor 2(HER2)protein in gastric carcinoma and its clinicopathological significance．MethodsThe expression of HER2 was detected with immunohistochemical EnVision method in 579 specimens of gastric carcinoma and 65 specimens of adjacent gastric tissue．ResultsThe positive expression rates of HER2 protein in gastric carcinomas and adjacent gastric tissues were 10．54%(61/579)and 0(0/65),respectively(P＜0．01)．The HER2 expression rate in intestinal type gastric carcinomas(17．90%)was significantly higher than that in diffuse type gastric carcinomas(4．18%)and mixed type gastric carcinomas(8．57%)(P＜0．01)．The expression rate of HER2 in well and moderately-differentiated gastric carcinomas was significantly higher(14．91%)than that in poorly differentiated ones(6．58%)(P＜0．01)．No association was observed between HER2 expression and clinical stage,lymph nodes metastasis and serosal invasion(P＞0．05)．ConclusionHER2 expression is up-regulated in gastric carcinoma,particularly in intestinal type gastric carcinomas and well and moderately-differentiated gastric carcinomas．

HER2 Gastric carcinoma Immunohistochemistry Protein expression