MCP-1基因多态性与食管癌易感性的关系

崔 斌，部春迎，付 萍

单核细胞趋化因子-1(MCP-1)是趋化因子超家族的重要成员。MCP-1基因多态性与一些恶性肿瘤如乳腺癌、宫颈癌、胃癌、前列腺癌及肺癌的易感性有关[1-6]。本研究应用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序的方法检测济南地区汉族人群中MCP-1-2518位点基因多态性，探讨MCP-1-2518位点基因多态性与食管癌易感性之间的关系。

1 资料与方法

1.1 研究对象 收集2011年11月1日至2013年11月1日章丘市人民医院、济南市第三人民医院、济南市第四人民医院、济南市第七人民医院及章丘市中医院行胃镜检查或住院手术治疗的食管癌202例作为病例组，所有患者均经病理学确诊为食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)。选取同期在章丘市人民医院健康体检人员265人作为健康对照组，均无肿瘤及遗传病史。所有入组者均为汉族，无血缘关系。以问卷形式收集研究对象的人口学资料、吸烟史、饮酒史等资料。病例组男性145例，女性57例，年龄34～82岁，平均58.1岁；对照组男性198例，女性67例，年龄35～79岁，平均57.2岁。两组研究对象的性别和年龄差异均无统计学意义。

1.2 方法 DNA提取。抽取研究对象外周血5 ml，以EDTA抗凝，用TIANamp Genomic DNA Kit(北京天根生物技术有限公司)常规提取基因组DNA，提取过程按试剂盒说明操作。用全基因组DNA扩增含有MCP-1-2518位点的DNA片段。引物均参考文献[7]设计，由上海生工生物工程公司合成。上游引物：5’-CCGAGATGTTCCCAGCACAG-3’;下游引物：5-CTGCTTTGCTTGTGCCTCTT-3’。PCR反应体系总体积50 μl，其中包括引物各15pmol，1U Tap DNA聚合酶，2.5 mmol/L MgCl2，200mmol/L dNTP和模板DNA 0.5 μg。PCR反应条件：94 ℃预变性 5 min；94 ℃变性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共36个循环；72 ℃延伸10 min(扩增仪为GeneAmp PCR System 9700)。扩增片段经纯化后在ABI PRISM 3100型DNA全自动测序仪上进行直接测序分析(由大上海生工生物工程技术服务有限公司完成。并随机抽取部分样本进行DNA直接测序，以保证基因分型结果的准确。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行统计学处理，病例组与对照组的基因型和等位基因型分布比较均采用χ2检验。以非条件Logistic回归法计算表示经性别、年龄校正的相对风险的比值比(odd ratio，OR)及其95%的可信区间(confidence interval，CI)。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MCP-1-2518位点等位基因和基因型与ESCC易感性的关系(表1) MCP-1-2518位点AA、AG、GG基因型在病例组中的频率分别为18.8%、47.0%和34.2%，在对照组中为14.3%、49.4%和36.2%。MCP-1-2518的A、G等位基因频率和AA、AG、GG基因型频率在ESCC组和健康对照组之间差异均无统计学意义，P>0.05。

表1 MCP-1-2518位点等位基因和基因型与食管鳞状细胞癌易感性的关系

2.2 吸烟与ESCC易感性的关系(表2) 按照吸烟习惯，我们将研究对象分为吸烟组与非吸烟两组，吸烟者在ESCC组和健康对照组比例分别为48.02%(97/202)和49.06%(130/265)，两组相比差异无统计学意义，P>0.05。分层分析表明，AA型基因频率在ESCC吸烟组(25.8%)显著高于健康对照吸烟组(13.1%)(χ2=8.059，P=0.018)。与GG基因型相比，携带AA基因型可使吸烟人群ESCC的发病风险增加3倍。而在非吸烟的患者和健康对照组中，MCP-1-2518位点的等位基因及基因型频率差异均无统计学意义，P>0.05。

表2 MCP-1-2518基因多态性联合吸烟状况与食管鳞状细胞癌易感性的关系

3 讨论

食管癌是全世界最常见的十大恶性肿瘤之一[8]。食管癌的发病机制尚未完全阐明，可能是环境因素与遗传因素相互作用的结果。但是暴露于相同环境因素下，只有很少一部分人患食管癌的事实说明，个体是否患食管癌不但取决于环境因素，还取决于个体的遗传易感性，这种易感性的差异在肿瘤的发生发展中可能起着重要的作用。宿主体内参与肿瘤发生的一些基因在人群中具有多态性，这些多态性基因可单独或与环境因素相互作用决定个体对肿瘤的易感性[9]。近年来的研究表明，抑癌基因、代谢酶基因、DNA修复基因及免疫相关基因等的多态性与个体对食管癌的易感性有关。

MCP-1定位于17q11，2-21.1，属于CC细胞因子家族，由CCL2基因编码。MCP-1的主要功能是：趋化单核/巨噬细胞；趋化和激活嗜碱性粒细胞，使其释放组胺参与免疫调节；参与细胞的生长、代谢和凋亡过程；在肿瘤的发生发展过程中主要通过募集肿瘤相关巨噬细胞、促进肿瘤血管生成、调节肿瘤免疫、直接作用于肿瘤细胞等促进肿瘤发生发展。MCP-1基因调控区序列5’端存在两处位点的基因多态性-297A/T6和-2518G/A。MCP-1多态性可导致其转录水平或表达水平的改变，从而决定了个体的差异性，在不同的环境因素作用下，可以表现出对疾病的不同易感性。目前许多研究已经证实MCP-1多态性与前列腺癌、肺癌的发病相关[5-6]。

本研究结果显示，MCP-1-2518位点基因型及等位基因分布在ESCC组和健康对照组无明显差异。根据吸烟状况分层分析发现，MCP-1-2518的AA型基因频率在ESCC吸烟组(25.8%)显著高于健康对照吸烟组(13.1%)，与GG基因型相比，携带AA基因型可使吸烟人群ESCC的发病风险增加3倍。此结果与杨磊等[5]报道的携带AA基因型可增加吸烟人群患非小细胞肺癌风险相类似。而在非吸烟的患者和健康对照组中，MCP-1-2518位点的等位基因及基因型频率差异均无统计学意义(P>0.05)，说明AA型基因可增加吸烟者患ESCC的风险，AA型基因的过量表达可能与吸烟所诱导的代谢改变相互作用，从而影响ESCC的易感性。此结果与Vazquez-Lavista等[10]报道的携带AA型基因可增加膀胱肿瘤的发病风险相类似。

综上所述，MCP-1-2518位点的多态性基因型和等位基因不单独影响ESCC的发生和发展，MCP-1-2518位点的AA基因型可增加吸烟人群ESCC易感性。MCP-1-2518位点基因多态性分析可作为预测吸烟人群ESCC易感性的分子指标之一。

参考文献：

[1] Loberg RD，Day LL，Harwood J，et al.CCL2 is a potent regulator of prostate cancer cell migration and proliferation[J].Neoplasia, 2006, 8(7): 578-586.

[2] Davidson B,Goldberg I Gotlieb WH,et al.Macrophage infiltration and angiogenesis in cervical squamous cell carcinoma-clinicopathologic correlation[J].Acta Obste Gynecol Scand,1999,78(3):240-244.

[3] Ghilardi G1,Biondi ML,La Torre A,et al.Breast cancer progression and host polymorphisms in the chemokine system: role of the macrophage chemoattractant protein-1 (MCP-1) -2518 G allele[J].Clin Chem,2005,51(2):452-456.

[4] Kuroda T,Kitadai Y,Tanaka S,et al.Monocyte chemoattractant protein-1 transfection induces angiogenesis and tumorigenesis of gastric carcinomain nude mice via macrophage recruitment[J].Clin Cancer Res,2005,11(21):7629-7636.

[5] 杨磊, 时广利, 宋长兴, 等.中国北方地区汉族人群MCP-1基因多态性与肺癌相关性研究[J].结核病与胸部肿瘤,2012,(4):266-269

[6] Cai Z,Chen Q,Chen J,et al.Monocyte chemotactic protein 1 promotes lung cancer-induced bone resorptive lesions in vivo[J].Neoplasia, 2009 Mar; 11(3):228-236.

[7] Dyment DA,Sadovnick AD,Ebers GC.Genetics of multiple sclerosis[J].Hum Mol Genet,1997,6(10):1693-1698.

[8] 张思维,陈万青,雷正龙,等.中国肿瘤登记地区2008年恶性肿瘤发病和死亡分析[J].中国肿瘤, 2012, 21(1): 1994-2013.

[9] Cheung WY,Liu G.Genetic variations in esophageal cancer risk and prognosis[J].Gastroenterol Clin North Am, 2009,38(1):75-91,viii.

[10] Vazquez-Lavista LG,Lima G,Gabilondo F,et al.Genetic association of monocyte chemoattractant protein 1(MCP-1)-2581 polymorphism in Mexican patients with transition cell carcinoma of the bladder[J].Urology,2009,74(2): 414-418.