糙叶五加叶化学成分研究

李 芝，邹亲朋，李小军，叶惠煊，黄玮超，谢 霞，刘向前*

（1.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208；2.长沙博海生物科技有限公司，湖南 长沙 410205）

糙叶五加叶化学成分研究

李 芝1，邹亲朋2，李小军1，叶惠煊1，黄玮超1，谢 霞1，刘向前1*

（1.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208；2.长沙博海生物科技有限公司，湖南 长沙 410205）

目的 研究糙叶五加叶的化学成分。方法 采用大孔吸附树脂、正反相硅胶、Sephadex LH-20凝胶等柱层析方法及重结晶手段进行分离纯化，并采用波谱技术和化合物的理化性质鉴定其结构。结果 从糙叶五加叶中分离并鉴定了10个单体化合物，分别为：豆甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、蜜蜡酸(3)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、虫漆蜡酸(5)、正十六烷酸(6)、山奈酚(7)、芦丁(8)、槲皮素(9)、正三十四烷酸(10)。结论 研究结果进一步明确了糙叶五加叶的物质基础，为今后开发该植物提供了实验数据。

糙叶五加叶；化学成分；结构鉴定

糙叶五加(Acanthopanax henryi(Oliv.)Harms)又名亨利五加，属于五加科五加属植物，为中国特有植物，广泛分布于湖南、湖北、浙江、安徽等地。其根皮作为“五加皮”收载于湖南省中药材地方标准，具有祛风湿、补肝肾、活血化瘀等功效，民间用其治疗风湿痹痛、水肿、跌打损伤等[1]。已从糙叶五加根皮中分离得到了紫丁香苷、紫丁香酚苷、紫丁香树脂醇、β-谷甾醇、豆甾醇、海松酸(+)-芝麻素、洒维宁和刺五加苷E等化合物[2]；但对糙叶五加叶的化学成分及其活性研究少有报道。本课题组对五加属植物开展了系统研究，前期已从糙叶五加叶抗氧化活性部位中分离得到了新绿原酸、4-O-咖啡酰奎尼酸、异槲皮苷、山柰酚-3-芸香糖苷、异绿原酸B、洋蓟素、异绿原酸A、异绿原酸C和槲皮素-3，7-二葡萄糖苷等化合物，并对其中多个化合物进行了HPLC的定量研究[3-4]。本文仅对糙叶五加叶抗氧化活性部位中的石油醚(PE)萃取部位、乙酸乙酯(EtOAc)萃取部位和正丁醇(n-BuOH)萃取部位得到10个单体化合物，现将成分分离鉴定的方法与结果报道如下。

1 仪器与材料

1.1 主要仪器

SGWX-4型显微溶点测定仪 (上海精密科学仪器有限公司)；AVATAR-360型傅里叶红外光谱仪（美国Nicolet公司）；JMS-700型高分辨质谱仪 （日本电子株式会社）；QP-2010型气质联用仪（日本岛津公司）；UNITY-500型二维核磁共振仪（美国Varian公司）；INOVA-400型一维核磁共振仪 （美国Varian公司）。

1.2 材料

药材于2011年10月采自湖南省新化县，经湖南中医药大学药学院刘向前教授鉴定为糙叶五加Acanthopanax henryi(Oliv.)Harms叶，干燥后备用。正相层析硅胶 (青岛海洋化工厂)，MDS-5-300反相硅胶 （北京中元天成科技发展有限公司）；Diaion HP-20P（日本三菱化学公司）；Sephadex LH-20（瑞典 Pharmacia公司）；D101大孔树脂 （天津光复精细化工研究所）；石油醚、甲醇等试剂均为分析纯。

2 方法

干燥的糙叶五加叶粉碎，称质量1 kg，分别加入20 L 95%、80%、60%乙醇冷浸提取，最后加10 L水回流提取2次，2 h/次，合并提取液，回收试剂，得到提取物396 g。热水混悬该提取物依次使用PE、EtOAc、n-BuOH萃取，得到PE萃取物14.0 g、EtOAc萃取物23.3 g、n-BuOH萃取物67.0 g。

将PE萃取物14.0 g进行硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，得6个馏分(P.Ⅰ→Ⅶ)。P.Ⅱ(0.3 g)上正相硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇洗脱，得到化合物1(162 mg)。P.Ⅶ经重结晶，得到化合物2 (379 mg)。P.Ⅱ (1.4 g)上硅胶柱分离，以二氯甲烷-甲醇洗脱，得P.Ⅱ-1和P.Ⅱ-2，得到化合物3(465mg)和化合物5(75 mg)。P.Ⅵ经D101大孔吸附树脂吸附，甲醇-水梯度洗脱，得到4个馏分(P.Ⅵ-1→4)，P.Ⅵ-2上 反相硅胶柱分离，得到化合物6(140 mg)。P.Ⅲ (0.4 g)经重结晶，得到化合物10(70 mg)。

将EtOAc萃取物23.3 g上D101大孔吸附树脂柱以甲醇-水梯度洗脱，得到5个馏分 （E.Ⅰ→Ⅵ）。E.Ⅱ上硅胶柱分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，得化合物9（14 mg）和化合物7（175 mg）。

将n-BuOH萃取物2.0 g，经硅胶柱层析分离，氯仿-甲醇梯度洗脱，得到化合物4（85 mg）和化合物8(1 250 mg)。

3 结构鉴定

化 合 物 1： 白 色 针 状 结 晶 ，mp133~ 135℃，Liebermann-Burchard反应呈阳性，IRcm-1：3421(OH)，2960(C=C)，2937(CH3)，2867(CH)，1642 (C=C)，1465(CH2)，1380(CH3)，1060(C-O)等处有较强吸收峰；1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.52(1H，m，H-3)，5.35(H，d，H-6)，0.69(3H，s，H-18)，1.01(3H，s，H-19)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，5.14(1H，dd，J= 6.6 Hz，H-22)，5.03(1H，dd，J=6.6 Hz，H-23)，0.93 (6H，d，J=6.9 Hz，H-26和H-27)，0.91(3H，d，J=6.6 Hz，H-29)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：37.3(C-1)，31.7(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4)，140.9(C-5)，121.7 (C-6)，31.7(C-7)，31.7(C-8)，50.1(C-9)，36.2(C-10)，21.0(C-11)，39.6(C-12)，42.1(C-13)，56.9(C-14)，23.1 (C-15)，28.3(C-16)，55.9(C-17)，12.1(C-18)，19.7(C-19)，42.2(C-20)，21.4(C-21)，138.3(C-22)，129.3(C-23)，51.3(C-24)，34.0(C-25)，21.1(C-26)，18.7(C-27)，26.1(C-28)，12.4(C-29)。以上数据与文献报道的化合物豆甾醇结构一致[5]，故鉴定化合物1为豆甾醇。

化合物2：白色粉末，mp 274~276℃，13C-NMR (150 MHz，C5D5N)δ：37.7(C-1)，30.4(C-2)，78.7(C-3)，40.3(C-4)，141.4(C-5)，121.9(C-6)，32.4(C-7)，32.4 (C-8)，50.3(C-9)，37.2(C-10)，21.5(C-11)，39.6(C-12)，42.8(C-13)，57.2(C-14)，24.7(C-15)，28.6(C-16)，56.8(C-17)，12.1(C-18)，19.5(C-19)，36.5(C-20)，19.2 (C-21)，34.6(C-22)，27.2(C-23)，46.5(C-24)，30.1(C-25)，19.5(C-26)，20.0(C-27)，23.8(C-28)，12.3(C-29)；glc：102.8(C-1’)，75.4(C-2’)，78.6(C-3’)，72.0 (C-4’)，78.1(C-5’)，63.0(C-6’)。以上数据与参考文献比对一致[6]，故确定化合物2为胡萝卜苷。

化合物3：白色针状结晶，mp 92~93℃。IRcm-1：3464(OH)，2961(CH3)，2870(CH)，1703(C=O)，1453 (CH2)，758。EI-MS：m/z 452.5[M+]，424，396，382，368……97，85，71，57等一系列掉-CH2碎片峰；以上数据与参考文献比对一致[7]，故确定该化合物为蜜蜡酸。

化合物4：淡黄色粉末，mp 239～241℃，盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应阳性。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：5.47(1H，d，J=7.8，glc-H)，6.21 (1H，d，H-6)，6.41(1H，d，H-8)，6.84(1H，d，H-5’)，7.59(1H，d，J=2.0 Hz，H-2’)，7.53(1H，dd，J=1.8 Hz，8.0 Hz，H-6’)。13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：156.7(C-2)，133.8(C-3)，177.9(C-4)，161.7(C-5)，99.1 (C-6)，164.5(C-7)，94.2(C-8)，156.6(C-9)，104.4(C-10)，121.6(C-1’)，115.6(C-2’)，145.2(C-3’)，148.9(C-4’)，116.6(C-5’)，121.6(C-6’)；glc：101.3(C-1)，74.5 (C-2)，76.9(C-3)，70.4(C-4)，78.0(C-5)，61.4(C-6)。以上数据与参考文献比对一致[8]，故鉴定化合物4为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物5：白色针状结晶，mp 94~95℃。EIMS：m/z 480.5[M+]，并出现了452，438，424，410……97，85，71，57等碎片峰，符合饱和脂肪酸的一般裂解规律。以上数据与虫漆蜡酸的数据一致[9]，故确定该化合物为虫漆蜡酸。

化合物6：白色粉末，mp 61~62℃。IRcm-1：2920 (CH3)，2850(CH)，1660(C=O)，1469(CH2)，719。EIMS：m/z 256.2[M+]，227，213，185，157，129，85，73，57等碎片峰；以上数据与参考文献中十六烷酸比对一致[10]，故鉴定化合物6为十六烷酸。

化合物7：淡黄色粉末，mp 272~274℃，TLC分析三氯化铁显蓝色，盐酸-镁粉反应呈阳性。13CNMR(150 MHz，DMSO)δ：147.1(C-2)，135.9(C-3)，176.2(C-4)，161.0(C-5)，98.4(C-6)，164.2(C-7)，93.7 (C-8)，156.5(C-9)，103.2(C-10)，121.9(C-1’)，129.7 (C-2’)，115.6(C-3’)，159.4(C-4’)，115.6(C-5’)，129.7 (C-6’)。以上数据与参考文献比对一致[11]，故鉴定化合物7为山柰酚。

化合物8：黄色粉末，mp 179~182℃，ESITOF-MS显示 [M+H]+m/z 611.303，其分子式为C27H30O16，1H-NMR (600 MHz，DMSO-d6)δ：5.34 (1H，d，J=7.2，glc-H)，4.38(1H，d，J=1.8，rha-H)，6.19 (1H，d，H-6)，6.38(1H，d，H-8)，6.84(1H，d，H-5’)，7.55(1H，d，J=2.4 Hz，H-2’)，7.53(1H，dd，J=2.4 Hz，8.4 Hz，H-6’)。13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：156.8(C-2)，133.7(C23)，177.8(C-4)，161.0(C-5)，99.1 (C-6)，164.5(C-7)，94.0(C-8)，157.0(C-9)，104.4(C-10)，121.6(C-1’)，115.5(C-2’)，145.2(C-3’)，148.8(C-4’)，116.7(C-5’)，122.0(C-6’)；glc：101.6(C-1)，74.5 (C-2)，76.3(C-3)，72.3(C-4)，76.9(C-5)，67.4(C-6)；rha：101.2(C-1)，70.8(C-2)，71.0(C-3)，72.3(C-4)，70.4 (C-5)，18.2(C-6)。以上数据与参考文献比对一致[12]，故确定化合物8为芦丁。

化合物9：淡黄色粉末，mp 310~312℃，TLC分析三氯化铁显蓝色，盐酸-镁粉反应阳性。1H-NMR (600 MHz，DMSO)δ：6.19(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)， 6.41(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，7.68(1H，d，J=2.4 Hz，H-2’)，7.54(1H，d，J=2.4，7.8 Hz，H-6’)，6.89(1H，d，J= 7.8 Hz，H-5’)。13C-NMR(150 MHz，DMSO)δ：147.2 (C-2)，136.2(C-3)，176.3(C-4)，161.1(C-5)，98.6(C-6)，164.3(C-7)，93.8(C-8)，156.6(C-9)，103.4(C-10)，122.4(C-1’)，115.5(C-2’)，145.5(C-3’)，148.1(C-4’)，116.0(C-5’)，120.4(C-6’)。以上数据与参考文献比对一致[13]，故确定化合物9为槲皮素。

化合物10：白色针状结晶，mp 89~90℃。EIMS：m/z 508.5[M+]，480，452，438，424，410……71，57，43，29等一系列掉-CH2碎片峰和脂肪酸特征的碎片峰。以上数据与参考文献比对一致[14]，故鉴定化合物10为正三十四烷酸。

4 结论

本文报道从糙叶五加叶中分离的10个化合物，包括4个脂肪酸类化合物、2个甾体类化合物和4个黄酮类化合物。文献研究表明黄酮类化合物多有祛痰、止咳、平喘、改善血液循环、提高免疫力、降血脂、抗氧化、抗炎等药理活性，在药品、食品和保健品领域具有广泛的应用价值。本课题组研究也发现该植物叶中黄酮类化合物含量丰富，有很好的抗氧化活性，且该资源湖南省较为丰富，目前尚未被有效利用，故有待进一步的研究和开发。

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（本文编辑 杨 瑛）

Study on chemical constituents from the leaves of Acanthopanax henryi(Oliv.)Harms

LI Zhi1,ZOU Qinpeng2,LI Xiaojun1,YE Huixuan1,HUANG Weichao1,XIE Xia1,LIU Xiangqian1*
(1.School of Pharmacy,Hunan University of Chinese medicine,Changsha,Hunan 410208,China; 2.Changsha Broad-Ocean Bio-Science and Technique Co.Ltd.Changsha,Hunan 410205,China)

ObjectiveTo study the chemical constituents of leaves of Acanthopanax henryi based on antioxidant activities.MethodsThe compounds were isolated and obtained by macroporous resin, silica gel, MDS, Sephadex LH-20 column chromatography and recrystallization.The structures of these compounds were elucidated by means of physiochemical properties and a variety of spectroscopic analyses.Results Ten compounds were identified as stigmasterol(1),daucosterol(2),melissic acid(3),quercetin-3-O-β-glucoside(4),lacceroic acid(5), palmitic acid(6),kaempferol(7),rutin(8),quercetin(9)and n-tetra-triacontanoic acid(10).ConclusionThe results clarify the material basis of antioxidant activity of the leaves of Acanthopanax henryi (Oliv.)Harms,which provide reference for the future development of this plant.

Acanthopanax henryi;chemical constituents;structure identification

*刘向前，男，教授，硕士研究生导师，E-mail：lxq0001cn@163.com。

R284.1

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.03.007.024.03

2013－10－27

湖南省自然科学基金重点资助项目(11JJ2042)；湖南省中药学"十二五"重点学科建设项目；湖南中医药大学药物分析学“十二五”校级重点学科建设项目。

李 芝，女，在读硕士研究生，主要从事中药及天然产物活性成分研究。