综合评分法优选辅料甘草汁的制备工艺

史 辑 景海漪 卢 莹 贾天柱*

（辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600）

综合评分法优选辅料甘草汁的制备工艺

史 辑 景海漪 卢 莹 贾天柱*

（辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600）

目的 优选炮制辅料甘草汁的最佳制备工艺。方法 采用正交试验法对甘草汁的制备各个影响因素进行考察，通过多指标综合评分法进行数据分析，优选工艺条件。结果 因素D对甘草汁制备工艺的综合评分值影响最显著，因素A，B，C均为影响不显著因素，可结合生产实际进行选择。结论 采用综合评分法通过正交试验优选甘草汁制备工艺为：甘草药材加8倍量水浸泡1 h，煎煮3次，每次1.5 h。

炮制辅料；甘草汁；制备工艺；高效液相色谱法；甘草苷；甘草酸；综合评分法

甘草汁是中药炮制常用的液体辅料，为甘草煎汤去渣而得，一些药物经甘草汁浸泡或煎煮后能增强补益作用，缓和劣性等，如甘草汁制巴戟天、制远志。各省炮制规范对于甘草汁制备方法的规定较多，对其中浸泡时间、溶剂用量等因素的描述不明确，对于甘草汁制药材的方法记载也不一致[1-3]。为保证制巴戟饮片的规范生产，本实验采用综合评分的方法对甘草汁制备工艺进行考察，结合传统标准，为甘草汁的质量控制标准提供依据。

1 材料与仪器

日本岛津公司LC-20A液相色谱仪（LC-20AB泵，IL-20A自动进样器，CBM-20A系统控制器，CTO-20A柱温控制箱，SPD-M20A二极管阵列检测器，LC-Solution工作站）；SARTORIUS CP225D型十万分之一分析天平；KQ-5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；X/WT数显调节仪电热恒温水浴锅（余姚市显星仪器有限公司）；电热恒温干燥箱（上海市跃进医疗器械一厂）。

甘草饮片购自大连开发区阳光大药房，经辽宁中医药大学中药鉴定教研室李峰教授鉴定为豆科植物甘草Glycyrrhizin uralensis Frisch的干燥根和根茎；甘草酸及甘草苷对照品购自成都曼思特生物科技有限公司；甲醇和乙腈为色谱纯, 水为娃哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 甘草苷和甘草酸的HPLC测定方法的建立。

2.1.1 色谱条件：日本岛津公司LC-20A液相色谱仪；流动相：乙腈-0.05%磷酸水，梯度洗脱，0～8 min乙腈19%，8～35 min乙腈19%～50%，35～36 min乙腈50%～100%，36～40 min乙腈100%～19%；流速1 mL/min；柱温25 ℃；检测波长254 nm。此条件下，样品中甘草苷、甘草酸均可达到基线分离，分离度良好。

2.1.2 甘草药材供试液的制备：精密称取甘草药材粉末（60目）约0.12 g于50 mL具塞三角瓶中，加入流动相20 mL，称重，超声提取30 min，放冷，补足失重，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，微孔滤膜（0.45 µm）过滤，作为供试液，取供试液10 µL注入高效液相色谱仪，根据峰面积计算药材中甘草酸、甘草苷的含量。

2.1.3 线性关系考察：精密称定甘草苷和甘草酸对照品各10 mg，置于25 mL量瓶中，加少许甲醇溶解后，用流动相定容。精密吸取上述对照品溶液各0.1、0.2、0.5、1.0、2.5 mL，分别置于10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。标准系列溶液分别进样3次（每次进样20 L），按“2.1.1”色谱条件进行测定，以峰面积均值A对进样量C（g）线性回归，求得甘草苷（1）和甘草酸（2）的线性回归方程分别为：

甘草苷的线性范围为0.2064～1.032 g；甘草酸的线性范围为：0.3904～1.9520 g；样品溶液在48 h内稳定。RSD＜1.0%。

2.2 出膏率的测定

称取甘草药材50 g，切成1～2 cm碎段，加适量水浸泡后，进行煎煮，将煎煮液转移至1000 mL量瓶中，并用水稀释至刻度。精密量取25 mL置于已恒重的蒸发皿中，于105 ℃干燥3 h，称重，计算出膏率。

2.3 甘草汁制备工艺筛选

以出膏率、甘草酸及甘草苷的提取率为指标，以浸泡时间、溶剂用量、提取时间和提取次数为考察因素，设计正交试验，选择L9（34）正交表，见表1；根据测定结果，进行多指标综合评分。评分时以各指标的实验最大值为参照将数据进行归一化，再给以不同的权重。鉴于甘草药材中甘草苷和甘草酸的含量和药理活性较好，二者取相同的权重系数，均设为0.4。在有效成分明确的前提下，出膏率越高则纯度越低，但是本实验甘草药材有效成分种类较多，药理作用多样，因此我们认为其出膏率代表其他类有效成分，因此设其权重系数为0.2。以综合值进行统计分析，结果见表2和表3。其中综合评分Y=0.4X1×100/87.35+0.4X2×100/63.38+0.2X3×100/3.9434。

表1 甘草汁提取工艺因素水平

表2 甘草汁提取工艺正交实验结果

表3 正交试验方差分析

直观分析结果表明，以综合评分为标准，在所选因素水平范围内，煎煮次数对结果影响最大，其次是煎煮时间，浸泡时间对于结果的影响较小。以极差最小的因素，即浸泡时间做为误差，进行方差分析[4]。结果表明，提取次数D为主要影响因素，因素A影响最小。根据正交试验综合评分结果优选最佳提取方案为A2B1C2D3，即甘草药材，切成1～2 cm碎段，加入8倍量水，浸泡1 h后，煎煮3次，每次1.5 h，3次所得煎煮液合并即得。

2.4 最佳提取工艺的验证

按照最佳工艺，称取甘草药材6 g，切成1～2 cm碎段，加入8倍量水，浸泡1 h，煎煮1.5 h，煎煮3次，合并滤液，滤液浓缩至100 mL。精密吸取1 mL浓缩液置50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，在上述色谱条件下进样10 L，测定结果为甘草汁中的甘草苷平均含量为0.720%，甘草酸平均含量为1.406%。

按照确定的最佳工艺，重复验证3次，测得平均出膏率为2.84%，甘草酸提取率为62.15%，甘草苷提取率为70.69%，在正交表中与最佳工艺最接近的4号试验相比，较为接近。因此说明此工艺稳定，方法可靠。

3 讨 论

甘草汁作为炮制辅料，其质量优劣直接影响巴戟天等饮片炮制，要建立规范化炮制辅料甘草汁制备工艺具有重要意义，本研究以2010年版中国药典规定甘草药材的指标性成分，设计正交实验，以浸泡时间、溶剂用量、提取时间和提取次数为考察因素。结果表明，提取时间和提取次数对甘草苷和甘草酸的含量影响较大，最终确定甘草汁的最佳制备工艺为：甘草药材，切成1～2 cm碎段，加入8倍量的水，浸泡1 h，煎煮1.5 h，煎煮3次，3次所得煎煮液合并即得。

甘草汁作为常用的炮制辅料，一般以甘草饮片用量为指标，我们之前工作是分别对甘草苷和甘草酸采取不同色谱条件分别检测，工作量较大，本实验依据《中国药典》2010年版一部甘草药材的指标性成分检测方法，按优选工艺制备甘草汁，测定甘草汁中的甘草苷含量为0.720%，甘草酸含量为1.406%。采用该甘草汁炮制药物时，可按照原料药的炮制要求等进行适当调整，可保证甘草汁中甘草苷和甘草酸的总含量，稳定其炮制品的质量。

制备甘草汁时，我们使用电热套加热水回流提取药材，既能保证充分回流，又可以防止煎煮甘草药材时水分不断挥发，药材有效成分提取不完全，且烧杯煎煮体积不易控制，得到有效成分含量高的甘草汁，对中药饮片的炮制有一定的指导意义。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社,2010.

[2] 钮正睿,李先瑞,顾雪竹,等.炮制辅料甘草汁的制备工艺研究[J].中国中药杂志,2009,34(16):2051-2053.

[3] 梁宪杨.以甘草为辅料炮制品的研究初探[J].南京中医药大学学报(自然科学版),2000,16(6):369-370.

[4] 蔡翠芳,冀小君,堐榜琴,等.炮制辅料甘草汁的制备工艺研究[J].山西中医学院学报,2009,10(6):25-27.

Studies on Technology Optimization for Preparing Licorice Juice by Multi-Target Grading Method

SHI Ji, JING Hai-yi, LU Ying, JIA Tian-zhu*
(School of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, China)

Objective To optimize prepare technology for licorice juice. Methods Based on the preliminary result of screening test. The water extract technology was chosen and optimized by an orthogonal test. Extraction time and numbers were examined at three levels and a multi-target grading methods was applied, which synthesized the paste-forming rate, extraction rate of glycyrrhizic acid and liquiritin. Results Extraction time significantly effected on multi-target grade, other factors could be selected in accordance with production practice. Conclusion The best extraction is obtained after the herb is extracted with 8 folds water for three numbers and each last 1h.

Morinda officinalis; Licorice juice; Preparing technology; HPLC; Glycyrrhizic acid; Liquiritin; Multi-target grading method

R283

：B

：1671-8194（2014）08-0040-02

*通讯作者