用EP6-A2方法验证比色法检测血清超氧化物歧化酶

齐发梅，李金龙，齐占斌

(1、甘肃省人民医院，甘肃 兰州 730000；2、宁夏医科大学，宁夏 银川 075000；3、甘肃中医学院；甘肃 兰州730000)

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一类广泛存在于生物体内的金属酶，是清除超氧阴离子自由基使细胞免受损害的一种重要的抗氧化酶，对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用。因此了解机体内SOD水平变化对于判断体内自由基的产生与清除平衡状态有着重要意义。线性范围是试剂盒的重要性能指标之一。线性范围窄的试剂盒在临床上的应用就会受到限制，满足不了实验室及临床需求[1]。EP6-A2文件是CLSI在EP6-A文件的基础上制定出来的，EP6-A2方法操作简便，适合于临床常规实验室人员评价线性，是目前最好评价线性的方法[2]。本文采用EP6-A2方法，对比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒线性范围进行验证，有利于比色法测定SOD方法的推广应用，保证检测结果的准确性、方法的可行性，从而更好的为临床服务。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1 .1样品 试剂厂商提供的质控液，浓度250U/ml

1.1 .2仪器 OLMPUSAU2700全自动生化分析仪。

1.1 .3试剂 血清SOD检测试剂盒是福建福缘生物科技有限公司生产的双试剂试剂盒。试剂盒采用邻苯三酚自氧化法(PAM)，显色反应强度与SOD的活性呈正相关关系。

1.1 .4分析软件 SPSS 11.5统计软件包。

1.2 方法

1.2 .1配制试验样本 按表1配置。

表1 配制方法

1.2 .2试验测试 将上述 6个试验样本按1-6的

顺序测定一次，再按随机顺序测定第二次(实验操作严格按照SOP文件进行，室内质控在控)。

1.2 .3离群值检测 以理论浓度为X轴、测定浓度为y轴绘制散点图，检查是否存在非常明显的非线性；并通过目视判断试验数据有无明显的离群点。然后计算SDr。

1.2 .4回归分析 使用SPSS11.5软件对数据进行回归分析，将测定数据分别拟合一次、二次和三次多项式如表2。计算每个非线性系数斜率的标准差，判断非线性系数与0之间有的差异是否有统计学意义(t检验)。

1.2 .5计算线性偏差 当最适多项式为二次或三次多项式时，需计算每个浓度点处的线性偏差。公式为DLi=p(Xi)-p'(Xi)。式中X的取值范围为 X1…X6；p'(Xi)为一次回归多项式在点 Xi处的计算值。

2 结果

2.1 对6个试验样本进行SOD测定，结果见表3。

2.2 离群值检测 首先绘制散点图，绘制检测结果散点图见图1。由图1可知本研究12个数据中没有数据明显的离群点。可以进行下一步数据处理。

表2 回归方程类型

表3 6个实验样本测定的SOD浓度(U/m l)

图1 检测结果散点图

2.3 计算SDr剔除第一组试验样本数据，计算得到SDr=0.43%。小于实验室5%的允许误差，结果可以线性评价。

2.4 回归分析 具体结果见表4。

表4 SOD线性验证的回归分析结果

由表4可知，非线性系数即二次回归多项式的b2、三次回归多项式的b2以及b3与“0”之间的差异无统计学意义(P>0.05)，拒绝二次及三次多项式，最适合的多项式为一次多项式，不需要计算DLi。最适方程为Y=1.0161X-0.0054。符合线性，线性范围0~250 U/ml。

3 讨论

线性是反映方法性能评价的重要指标之一，在某种意义上，线性范围越宽，该试剂盒就越方便用于临床，但每一种试剂都有其一定的线性范围，线性范围内的结果才具有可靠性。本文按EP6-A2文件要求[3-5]对邻苯三酚自氧化法试剂盒进行了验证，结果为散点图未见离群点与明显的非线性，计算得到的SDr为0.43%小于实验室允许误差5%。对试验数据进行回归分析，结果显示，二次多项式模型的非线性系数b2，或三次多项式模型的b2或b3中任一个与“0”比较，均无显著差异(P>0.05)，最适合的多项式为一次多项式，为Y=1.0161X-0.0054。符合线性，线性范围0~250U/m l，与试剂盒提供的线性范围相符合，所以，该试剂盒可以满足临床需求。另外，邻苯三酚比色法测定SOD试剂盒与以往试剂相比，具有试剂稳定、标本用量少、准确度和精密度高等优点[6]，试剂盒即可测定血清样本也可测定血浆样本，而且可用于全自动生化分析仪、操作简便快捷等优点，适合各级医院使用，是一种理想的、值得推广应用的检测SOD试剂。

[1]冯仁丰.临床检验质量管理技术基础[M].第2版,上海:上海科学技术文献出版社,2007:39-50.

[2]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures[S].EP6-A2,CLSI,2003.

[3]吕赛平,邹学森.定量检测系统线性评价方法——EP6-A法[J].实验与检验医学,2009,27(3):303-334.

[4]吕赛平,刘琴,邹学森.应用EP6-A2方法验证血糖试剂盒的线性范围[J].实验与检验医学,2011,29(1):45-46,59.

[5]赵彩虹.超敏C反应蛋白试剂盒线性范围的验证[J].国际检验医学杂志,2012,33(15):1819-1821.

[6]张忠,高静,董振南,等.比色法测定超氧化物歧化酶的临床评价及其应用研究[J].标记免疫分析与临床,2011,18(2):105-107.