NB－UVB照射对白癜风皮损区IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平的影响

史永俭 刘园园 刘 瑛 张春敏

NB－UVB照射对白癜风皮损区IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平的影响

史永俭 刘园园 刘 瑛 张春敏

目的: 确定NB－UVB照射对白癜风局部皮损组织液细胞因子IL－6、IL－18、TNF－α以及sl-CAM－1水平的影响。方法: NB－UVB照射白癜风皮损区30次,采用ELISA法检测白癜风患者NBUVB照射前后局部皮损组织液中IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平。结果: 皮损区组织液中IL－6为0.316±0.237 ng/mL,低于健康人群,IL－18为0.925±0.419 ng/mL、TNF－α为1.012±0.473 ng/ mL、slCAM－1为1.162±0.386 ng/mL,均高于健康人群。经NB－UVB照射后,复色区各细胞因子水平基本恢复正常。结论: NB－UVB可能通过对细胞因子的调节起到治疗白癜风的作用。

白癜风； 细胞因子； 窄谱中波紫外线

越来越多的研究表明白癜风患者皮损处存在局部免疫状态的改变,病灶局部微环境中细胞免疫状态与其发生发展密切相关,1皮损部位活化的各种T细胞浸润、抗MC抗体以及CD8＋的CTL介导的细胞免疫反应等均能影响白癜风的发生。2,3另外机体的免疫效应大部分通过细胞因子介导,是近年来研究的热点之一。B－淋巴细胞激活因子4、IL－175、IFN－γ6、TNF－α6、slCAM－17等多个细胞因子可能参与了白癜风的发病。目前,国内外对白癜风患者血清相关细胞因子水平变化的研究较多,发现多种细胞因子参与了白癜风的发生过程,但对局部皮损处的研究较少。我们试图通过研究皮损处几种相关细胞因子水平的变化从一个侧面证实白癜风患者存在局部免疫状态异常,希望对揭示白癜风的发病机制有所帮助。国内研究8发现窄谱中波紫外线照射能降低白癜风患者局部皮损处IL－4、IFN－γ的水平,但其研究的细胞因子较少,照射时间较短,不能全面反映窄谱中波紫外线对局部皮损处细胞因子网络的影响。我们的研究期望能进一步了解窄谱中波紫外线照射能否通过调节多种细胞因子水平,恢复白癜风患者局部免疫状态平衡,从而进一步为窄谱中波紫外线治疗白癜风提供免疫学依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 所有患者均为2011年9月至2013年6月在我科就诊的进展期白癜风患者。其中男15例,女9例；年龄19～45岁,平均26.50±9.36岁；病程2个月～5年,平均2.25±1.68年。其中寻常型18例,局限型11例,泛发型7例,节段型6例。所有患者未进行紫外线治疗,皮损处1个月内未使用外用药物,3个月内未应用系统药物治疗。皮肤无炎症,无系统疾病及光敏性皮肤病。另选15名正常人为健康对照组,男9名,女6名,年龄20～42岁,平均28.42±8.78岁。所有患者均知情同意,治疗方案经本院伦理委员会讨论通过。

1.2 主要仪器与试剂 UV100L系统光疗仪(德国Waldmann公司),SUV－1000日光紫外线模拟器(上海Sigma公司),BY－II型白癜风表皮分离仪(山东神思医疗设备有限公司),酶标仪(奥地利产anthos 2010型),高速离心机(美国索福公司),IL－6、IL－18、TNF－α、slCAM－1试剂盒(美国派普泰克公司)。

1.3 方法

1.3.1 对白癜风患者白斑区与健康人正常皮肤用BY－II型白癜风治疗仪进行负压吸疱,负压45 kPa,温度43℃。抽取疱液1～2 mL(含血性疱液及纤维组织弃去不用),离心20 min左右(2000～3000 r/min),收集上清。应用ELISA法检测IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平。

1.3.2 对白癜风患者进行NB－UVB照射前测定最小红斑量(MED),初始剂量为最小红斑量的50%,即0.3～0.5 J/cm2,每周照射3次。如照射皮肤无红斑反应,以后每次增加剂量0.1～0.2 J/cm2,共照射30次。若出现疼痛性红斑则暂停照射,在红斑消退后恢复照射,剂量减少50%。照射中遮盖保护患者的眼部及外生殖器部位,除部分患者因不良反应外用润肤乳膏外,未使用其他药物。

1.3.3 治疗3个月后进行疗效评价 皮损区完全复色或单皮片复色面积大于80%为成功区；皮损区面积无变化,进一步扩大或单皮片复色面积小于20%视为失败区。在治疗组16例配合检测的患者成功与失败的区域分别再次进行1～2个单位的负压吸疱,抽取疱液,检测前述细胞因子水平。

1.3.4 统计学方法 采用SPSS 13.0软件系统分析白癜风患者白斑区IL－6、IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平；光疗前后成功与失败区IL－6、IL－18、TNF－α、slCAM－1水平差异。实验数据用¯x±s表示,两组间比较用t检验。

2 结果

2.1 白癜风患者局部白斑区IL－6水平与健康人比较明显降低(P＜0.05),TNF－α水平偏高(P＜0.05),IL－18、slCAM－1水平则明显升高(P＜0.01)。见表1。2.2 经NB－UVB照射后,复色部位IL－6水平升高, IL－18、TNF－α以及slCAM－1水平降低,与健康人比较无显著性差异(P＞0.05)。复色失败区治疗后各细胞因子水平与对照组比较有显著差异。见表2。

表1 白癜风患者局部白斑区与健康对照组相关细胞因子水平比较

表2 NB－UVB照射后,复色与未复色皮损各细胞因子水平变化

3 讨论

白癜风是一种由于黑素细胞受损致色素脱失的获得性皮肤病,其病因及发病机制迄今尚未完全阐明。角质形成细胞对黑素细胞的各种功能有重要的调控作用,其主要通过分泌各种细胞因子来维持黑素细胞的功能。IL－6是皮肤角质形成细胞分泌的重要细胞因子,角质形成细胞的损伤及功能减弱可引发白癜风。我们研究发现白癜风皮损区组织液中IL－6明显降低,提示其可能有角质形成细胞功能受损,与Moretti等9研究结果不符。Moretti等研究了15例处于活动期的白种人,穿孔活检取皮损和病灶周围的皮肤,采用免疫组化的方法研究发现IL－6在白癜风皮损区高表达。我们的研究与国内学者10研究结果吻合,均采用了ELISA法检测局部疱液中的细胞因子。两者结果不同是否与取材深度、检测方法及人种差异有关需进一步证实。TNF－α主要由活化的单核－巨噬细胞产生,具有多种生物效应,可激活诱导型一氧化氮合酶,产生大量一氧化氮对黑素细胞产生细胞毒性作用,从而抑制黑素细胞增殖和色素生成。slCAM－1是中性粒细胞与黑素细胞黏附的必需因子,其可促进淋巴细胞与黑素细胞黏附,在淋巴细胞攻击破坏黑素细胞中发挥重要的连接作用,进而导致黑素细胞破坏。IL－18主要由单核巨噬细胞产生,同时也可由表皮角质形成细胞合成表达。已有大量资料证明IL－18能诱导Th1细胞、自然杀伤细胞分泌IFN－γ、粒－巨嗜细胞集落刺激因子,IL－2等多种细胞因子。11,12诱导IFN－γ是IL－18的主要功能之一,IFN－γ可加强slCAM－1的表达促进白细胞与黑素细胞的黏附,引起黑素细胞的破坏。同时IFN－γ还是诱导型一氧化氮合酶的诱导因子,可以产生大量一氧化氮引起黑素细胞自身破坏。因此IL－18可能通过刺激Th1细胞和NK细胞产生相关细胞因子而参与了白癜风的发病过程。我们研究发现以上三种细胞因子在白癜风局部皮损中均显著升高,其中TNF－α、slCAM－1检测结果与Grimes等6、宋秀祖等7的研究结果相符合,提示白癜风局部皮损处存在明显免疫异常,表皮微环境细胞因子的变化、局部细胞因子表达不平衡可能与白癜风的发病有关。

NB－UVB照射能促进角质形成细胞分泌相关细胞因子,同时诱导T细胞凋亡13及抑制前炎症因子的释放,影响细胞因子调节网络,进而通过细胞因子相互作用维持或增加表皮黑素细胞的数量功能,促进黑素生成。本研究表明,经NB－UVB照射后白癜风皮损复色区组织液中IL－6含量增高,IL－18、TNF－α、sl-CAM－1均降低,而复色失败区各细胞因子变化不显著。可部分解释NB－UVB治疗白癜风的作用机制。但NB－UVB治疗白癜风的作用机制较为复杂,我们的研究还不能全面反映NB－UVB照射对白癜风局部免疫状态的影响。

1 Yu R,Broady R,Huang Y,et al.Transcriptome nalysis reveals markers of aberrantly activated innate immunity in vitiligo lesional and non－lesional skin.PLoS One,2012,7(2):e510－e530.

2 Wang CQ,Cruz－Inigo AE,Fuentes－Dueulan J,et al.Th17 cells and activated dendritic cells are increased in vitiligo lesions.PLoS One,2011,6(4):e18907.

3 Wankowicz－Kalinska A,van den Wijingaard RM,Tigges BJ,et al.Immunopolarization of CD4＋and CD8＋T cells to Type－1－like is associated with melanocyte loss in human vitiligo.Lab Invest, 2003,83(5):683－695.

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8钟文俊,蔡美玲,池丽俏,等.NB－UVB治疗白癜风的疗效及对局部组织液中IL－4、IL－12和INF－γ的影响.中国麻风皮肤病杂志,2011,27(3):217.

9 Moretti S,Spallanzani A,Amato L,et al.New insights into the pathogenesis of vitiligo:imbalance of epidermal cytokines at sites of lesions.Pigment Cell Res,2002,15(2):87－92.

10皮肖冰,王晓霞,曾凡钦,等.窄谱中波紫外线对寻常型白癜风患者皮肤组织液白介素－1β及白介素－6的影响.岭南皮肤性病科杂志,2007,14(2):67－69.

11 Yoshimoto T,Takeda K,Tanaka T.IL－12 upregulates IL－18 receptor expression on T cells,Th1 cells and B cells:synergism with IL－18 for IFN－γ prodution.J Immunol,1998, (161):3400－3407.

12 Puren AJ,Fantuzzi G,Gu Y,et al.Interleukin－18(IFN－γ inducing factor)induces IL－1β and IL－8 via TNA－α production from non－CD14＋human blood mononuclear cells.J Clin Invest,1998,101:711－721.

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(收稿:2014－04－28 修回:2014－08－04)

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Effects of NB－UVB on the levels of IL－6、IL－18、TNF－α and slCAM－1 in the lesions of vitiligo

SHI Yong-jian,LIU Yuan-yuan,LIU Ying,et al.The Second Hospital of Shandong University,Jinan,250033

Objective:To determine the effects of NB－UVB on the levels of IL－6,IL－18,TNF－α and sl-CAM－1 in the lesions of vitiligo.Methods:The lesional levels of IL－6,IL－18,TNF－α and slCAM－1 were detected by ELISA before and after irradiation by NB－UVB for 30 times.Results:Before the irradiation of NB－UVB,the level of IL－6 was 0.316±0.237 ng/mL,which was lower than that in healthy people；the levels of IL－18,TNF－α,slCAM－1 were 0.925±0.419 ng/mL,1.012±0.473 ng/mL and 1.162±0.386 ng/mL,which were higher than those of the healthy people.After the irradiation of NB－UVB,all the cytokine levels in the improved lesions were basically restored to normal.Conclusion:The efficacy of NB－UVB on vitiligo may be through regulating the levels of cytokines.

vitiligo；cytokine；NB－UVB

山东大学第二医院皮肤科,济南,250033