中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白和癌胚抗原在直肠癌诊断和预后中的意义

苏传伟

(深圳市观澜人民医院普外科,广东 深圳 518000)

直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，尽管随着先进手术器械在临床上的广泛应用以及外科手术经验的不断积累，直肠癌术后生存率明显提高，但直肠癌往往早期临床症状体征不明显，起病隐匿，患者就诊时往往已处于疾病的中晚期。而目前临床上用于直肠癌诊断和预后的生物学标志物都十分有限[1]。因此，寻找相关的生物学标志物是目前研究的热点[2]。本研究旨在探讨中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin，NGAL)在直肠癌组织中的表达及血清中NGAL和癌坯抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)水平，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集深圳市观澜人民医院2007年12月至2009年12月间收治的直肠癌患者45例，其中男22例，女23例，年龄38～79(58.6±7.1)岁；有淋巴结转移26例，未转移19例；高中分化者20例，低分化者25例；按照Dukes分期分A、B、C、D四期，其中(A+B)期18例，(C+D)期27例；浸润深度：突破肌层25例，未突破肌层20例；肿瘤的大小：<5 cm 19例，≥5 cm 26例。选取同期收治的30例直肠息肉患者进行对照。其中男16例，女14例；年龄34～65(57.9±7.5)岁；直肠癌组和直肠良性肿瘤组在年龄、性别方面比较无统计学意义，具有可比性。所有患者术前均未进行过化疗与放射治疗，术后所有患者定期进行门诊复查。随访工作截止于2012年11月。所有患者均具有完备的随访资料。

1.2方法 所有患者术前进行血清NGAL和CEA水平测定，CEA检测采用电化学发光法，严格按照罗氏公司提供的试剂盒操作说明进行。CEA参考值为0～5 μg/L，血清NGAL水平采用双抗体夹心酶联免疫分析进行检测。术后组织切片标本采用链酶卵白素-生物素过氧化物酶法(SP法)测定NGAL的表达，兔抗人NGAL单克隆抗体均来自美国SANTA CRUZ公司，SP9001试剂盒和二氨基联苯胺试剂盒均来自北京中杉生物工程公司。严格按照明书步骤进行操作。

1.3结果判定及观察指标 NGAL在细胞质中呈现棕黄色染色颗粒为阳性细胞。光学显微镜下，计算出每10个高倍视野(×400)中染色为阳性的肿瘤细胞百分率，显色细胞数(染色阳性百分比)在20%以上即为阳性表达作为统计分析的标准[3]。通过测定组织中NGAL表达的阳性率及术前血清NGAL和CEA水平，探讨三者与临床病理因素、年龄、性别、有无淋巴结转移、浸润深度、肿瘤大小、分化程度、临床分期、脉管侵犯的关系。

2 结 果

2.1直肠癌组和直肠良性肿瘤组组织NGAL的表达及血清NGAL和CEA水平的比较 NGAL的表达主要定位于细胞的胞质内，呈棕黄色或棕褐色，直肠癌的阳性表达率为84.44%(38/45)，直肠良性肿瘤的阳性表达率为33.3%(10/30)，差异有统计学意义(P<0.05)。术前两组血清NGAL和CEA水平进行比较，差异均有统计学意义(P<0.05)(表1)。

表1 直肠癌组和直肠良性肿瘤组组织NGAL的表达及血清NGAL和CEA的水平的比较

2.245例直肠癌组织NGAL的表达及术前血清NGAL和CEA的水平与直肠癌临床病理因素的关系 直肠癌组织NGAL异常表达及术前血清NGAL和CEA的高水平与直肠癌肿有无淋巴结转移、浸润深度、肿瘤的大小、分化程度、临床分期、脉管侵犯等临床病理因素有关，差异有统计学意义(P<0.05)；与年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。

2.3复发转移组与无复发转移组血清NGAL和CEA水平的比较 对45例直肠癌患者跟踪随访3年，根据术后患者有无复发转移分为两组，其中有复发转移患者14例，无复发转移患者31例，两组血清NGAL和CEA的水平进行比较，差异有统计学意义(P<0.05)(表3)。

表2 NGAL的表达及术前血清中NGAL和CEA的水平与直肠癌临床病理因素的关系

表3 复发转移组与无复发转移组血清中NGAL和CEA水平的比较

3 讨 论

NGAL在人中性粒细胞内于1993年首先被发现，是Lipocalin家族的一个新成员，存在于中性粒细胞中的过氧化物酶阴性颗粒中，定位于人染色体9q34上，包括7个外显子和6个内含子，由N端的310-螺旋，C端的α-螺旋和中间的8段反平行的β-折叠所构成，研究表明，NGAL与胚胎发育、炎症、信号转导、趋化作用及肿瘤的浸润转移关系密切[4-5]。

CEA是一种糖蛋白，相对分子质量为180×103，具有使肿瘤细胞逃避免疫攻击的作用。CEA在结直肠癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌患者均升高，目前血清CEA检测主要用于早期诊断、辅助判断预后及治疗效果和监测复发转移的指标，研究表明，血清CEA检测值是发现复发的理想指标，作为一种无创性检查方法其敏感性高于X线和结直肠镜[6-7]。

本研究结果显示，直肠癌的阳性表达率显著高于直肠良性肿瘤，直肠癌组织NGAL的表达及术前血清NGAL和CEA水平与有无淋巴结转移、浸润深度、肿瘤的大小、分化程度、临床分期、脉管侵犯有关(P<0.05)；提示NGAL和CEA水平的高低与肿瘤细胞的生物学特性相关。对直肠癌病情评估具有一定的指导意义。本研究进一步研究显示，有转移患者血清NGAL和CEA的水平显著高于无复发转移患者，提示联合检测NGAL和CEA的水平可以作为直肠癌复发转移、判断预后的指标。与相关研究结果一致[8-10]。

综上所述，联合检测NGAL和CEA水平用于直肠癌筛查诊断和预后评价，具有重要的临床应用前景，可以为直肠癌的诊治制订更加积极、合理、有效的治疗方案提供理论依据，还可以作为评估直肠癌的生物学行为、判断预后的重要指标之一，但有关的作用机制还有待做进一步的深入研究。

[1] 须静,胡晓波.中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的研究进展[J].检验医学,2012,27(10):871-876.

[2] Lippi G,Cervellin G.Neutrophil gelatinase-associated lipocalin (ngal),neutrophils,and ckd:Which comes first?[J].Am J Kidney Dis,2013,61(1):184.

[3] Kutasy B,Gosemann JH,Duess JW,etal.Increased trophoblastic apoptosis mediated by neutrophil gelatinase-associated lipocalin (ngal) activation in the nitrofen model of congenital diaphragmatic hernia[J].Pediatr Surg Int,2013,29(1):25-31.

[4] 李慧,孙保存,刘志勇,等.NGAL基因表达上调与大肠肿瘤发生的关系研究[J].中国肿瘤临床,2011,38(5):259-262.

[5] 丘佳明.乳腺癌患者肿瘤细胞NGAL水平免疫组织化学测定的临床意义[J].放射免疫学杂志,2012,25(5):546-548.

[6] Peng Y,Wang L,Gu J.Elevated preoperative carcinoembryonic antigen(cea) and ki67 is predictor of decreased survival in iia stage colon cancer[J].World J Surg,2013,37(1):208-213.

[7] Aggarwal C,Meropol NJ,Punt CJ,etal.Relationship among circulating tumor cells,cea and overall survival in patients with metastatic colorectal cancer[J].Ann Oncol,2013,24(2):420-428.

[8] 高钧,孙燕,赵秀兰，等.NGAL MMP-9和E-cadherin在结肠癌中的表达及其与预后的关系[J].中国肿瘤临床,2011,38(6):324-327.

[9] Ramos-Mozo P,Madrigal-Matute J,Vega de Ceniga M,etal.Increased plasma levels of ngal,a marker of neutrophil activation in patients with abdominal aortic aneurysm[J].Atherosclerosis,2012,220(2):552-556.

[10] 吕长刚,齐凤杰.NGAL和MMP-9蛋白在浸润性乳腺癌中的表达及临床意义[J].广东医学,2011,32(10):1287-1289.