温脾汤对小鼠缺血脑组织SOD和MDA的影响

吴思思 戴伟娟

温脾汤由附子、干姜、人参、大黄、甘草组成，作用是温补脾阳，攻下冷积。主治脾阳不足，常用于急性单纯性肠梗阻或不全梗阻等属中阳虚寒，冷积内阻者。临床多用于治疗慢性肾衰竭、溃疡性结肠炎、脑缺血缺氧、贫血等病症。本实验应用双侧颈动脉结扎制造的脑缺血模型，测定温脾汤对脑组织中MDA和SOD含量的影响，以探讨温脾汤是否对缺血脑组织有保护作用。

1 材料

1.1药物与试剂 草药：人参、大黄、附子、干姜、甘草，均由济宁邦尔中药饮片有限公司提供。

温脾汤制备：取上述药物，先用水浸泡6 h，然后放入500 ml水熬制，煎煮2次，合并两次的滤液至200 ml。置于冰箱中保存，临用前摇匀。

丙二醛(MDA)测定试剂盒：由南京建成科技有限公司提供。超氧化物歧化酶(SOD测定试剂盒：由南京建成科技有限公司提供。蛋白测定试剂盒：由南京建成科技有限公司提供。

1.2动物 昆明种小鼠，雄性，体重18～22 g，购自山东省防疫站实验动物室。

1.3仪器 紫外分光光度剂 UV754N 上海精密科学仪器有限公司生产。

2 方法

2.1分组与给药 昆明种小鼠40只，随机分4组：模型组、温脾汤低、中、高剂量组[灌胃0.4，2.0，10.0 ml/(kg·d)]。模型组灌服同容积的生理盐水。各小鼠连续灌胃8 d。

2.2小鼠脑缺血后脑组织匀浆液的制备 末次给药后1 h，各组在结扎两侧颈总动脉1.5 h后断头，小心剥取两侧大脑半球，称重，按重量∶体积=1∶9的比例加入预冷的生理盐水(4℃)，用组织匀浆器充分匀浆，将匀浆液以3000转/min离心12 min，取上清液。

2.3超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的测定 严格按照试剂盒说明，测定蛋白含量，继而测定SOD和MDA的含量。

2.4统计学方法 实验数据用均数±标准差表示，数据的统计分析均应用t检验。

3 结果

3.1超氧化物歧化酶(SOD)测定 结果表明，与模型相比，温脾汤中、高剂量组小鼠脑组织中SOD含量显著增高(P<0.01)，温脾汤低剂量组小鼠脑组织中SOD含量明显增高(P<0.05)，但不如中、高剂量显著。见表1。

表1 温脾汤对小鼠脑组织SOD含量的影响

注：与模型组比较，aP<0.05，bP<0.01

3.2丙二醛(MDA)测定 结果表明，与模型组相比，温脾汤组小鼠脑组织中MDA含量显著下降。见表2。

表2 温脾汤对小鼠脑组织MDA含量的影响

注：与模型组相比，aP<0.05

4 讨论

温脾汤由人参、大黄、附子、干姜、甘草组成，近年来研究发现其成分或其有效成分对缺血有保护作用，但对复方汤剂未有明确研究。

本实验采用小鼠双侧颈动脉结扎制造脑缺血模型，测定温脾汤对脑组织中MDA和SOD含量的影响。结果表明与模型组相比温脾汤组小鼠脑组织中SOD的含量明显增加，且有明显的剂量依赖性(低、中剂量组与模型组比较，P<0.05;高剂量组与模型组比较，P<0.01)。MDA含量显著下降(给药组与模型组比较，P<0.05)。

自由基代谢异常是脑缺血再灌注损伤的重要原因，脑缺血时,自由基的生成增加，防御机制活性降低，造成自由基损伤，脑缺血后，血清中MDA含量明显升高，说明其脂质过氧化反应增强，SOD受到抑制,自由基清除能力降低，两者呈负相关。因此，SOD和MDA的水平直接反映机体氧自由基的变化。

据有关资料报道，温脾汤的有效成分有升高SOD和降低MDA含量的作用。吕风亚等[1]在实验中发现，大鼠脑缺血再灌注后应用人参总皂苷治疗可提高脑组织SOD含量，降低MDA的含量。李建生等[2]在研究大黄苷及苷元对脑缺血损伤大鼠自由基代谢的影响时指出，大黄苷及苷元能明显提高大鼠SOD活性，降低MDA含量。宋铁山等[3]在实验中发现甘草总黄酮对肠缺血再灌注大鼠，能明显降低血清和肠组织中的MDA的含量，提高体内SOD的活性。 孙慧兰研究四逆汤的实验[4]发现附子生物碱、干姜挥发油及甘草粗提取品都可不同程度地提高心肌缺血/再灌注损伤心肌的SOD活性，降低其MDA含量。阎惠英等[5]用榨出的生姜汁研究对黄嘌呤氧化酶系统所产生的超氧阴离子自由基有抑制作用，结果表明姜汁可使小鼠离体血清和肝匀浆超氧化物歧化酶(SOD)活力显著增加。 由此可进一步证明温脾汤的各个组成成分都有升高SOD和降低MDA的作用为本实验提供了重要依据。而本实验的结果，证明了温脾汤这种复方汤剂用于保护缺血脑组织的可行性。

[1] 吕风亚.人参总皂甙对大鼠脑缺血再灌注后MDA、SOD及细胞凋亡的影响.脑与神经疾病杂志,2005,13(3):189-191.

[2] 李建生,刘敬霞,梁生旺,等.大黄苷及苷元对脑缺血损伤大鼠自由基代谢的影响.中国临床康复,2004,8(34)：7748-7750.

[3] 宋铁山,李湘楚.甘草总黄酮对大鼠肠缺血再灌注损伤的保护作用,咸宁学院学报(医学版),2004,18(5)：330-331，334.

[4] 孙慧兰,吴伟康,罗汉川,等.四逆汤有效部位抗心肌缺血/再灌注损伤神经酰胺机制的研究.中成药,2005,27(12):1429.

[5] 闫慧英,张杰梅,乔晓君.姜和蒜抑制活性氧作用的研究.包头医学院学报,1997,13(1):10-12.