CNQX对伤害性刺激隐神经诱发大鼠脊髓Fos蛋白表达的影响

杨宇 姚阳 刘坤 刘畅 张宇平 魏昭 沈晶晶

c-fos基因被激活并表达的Fos蛋白可作为研究神经传导通路的一个有意义的标志物，可用来判断、追踪伤害性刺激信号的传导通路。文献报道谷氨酸参与伤害性信息引起c-fos基因表达[1]，脊髓后角作为疼痛信息处理的初级中枢，其神经递质的成分和受体的分布、来源等信息，是打开脊髓神经元信号传导和疼痛传递的前提基础。

1 材料与方法

1.1材料 Wistar大鼠40只，体重(250±20)g；c-fos抗体；ABC免疫组化试剂盒。

2 结果

2.1伤害性刺激SN对脊髓神经元Fos蛋白表达的影响 正常状态下大鼠脊髓神经元仅有少量Fos蛋白表达，其主要分布在胞核内，经过DAB显色后，阳性神经元的Fos蛋白胞核被染成棕褐色，多为圆形或椭圆形，大小不等。与空白对照组比较，电刺激SN后30 min，诱发脊髓神经元Fos蛋白表达显著增加，P<0.05，见图1、表1。

2.2CNQX对伤害性刺激SN诱发脊髓神经元Fos蛋白表达的影响 CNQX实验组，诱发脊髓神经元Fos蛋白的表达轻度增加，但与空白对照组相比较，阳性细胞面积百分比和积分光密度差异无统计学意义(P>0.05)，而CNQX对照组，诱发脊髓神经元Fos蛋白表达明显增加，与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，见图1、表1。

结果显示，CNQX拮抗了电刺激SN引起脊髓神经元Fos蛋白表达的显著增加，提示非NMDA受体参与了SN引起躯体痛的形成过程。

图1 电刺激SN及静脉注射CNQX后脊髓Fos蛋白的表达

分组时间(min)积分光密度阳性细胞百分比空白对照组307.176±0.6621.982±0.706电刺激SN实验组309.481±1.243ab3.336±0.834ab注射CNQX+电刺激SN308.059±0.5012.114±0.638注射NS+电刺激SN309.374±1.147ab3.286±0.678ab

注：aP<0.05，与空白组对比；bP<0.05，与注射CNQX +电刺激SN组对比

3 讨论

当中枢神经元受到各种化学、物理等原因刺激后，诱导c-fos基因翻译成Fos蛋白进入细胞核与目的基因结合而对刺激作出相应反应，因此，Fos蛋白表达被广泛用作神经元功能活动的指标[3]。实验中空白对照组见到脊髓神经元Fos蛋白的少量表达，提示正常状态下，正常细胞确实有低水平的Fos蛋白表达，伤害性电刺激隐神经后30～60 min时，Fos蛋白数量很多，表达明显增加，高峰出现在电刺激后60 min[4]。

各种类型谷氨酸受体均参与了伤害性信息引起疼痛的过程，一般认为NMDA则受体介导持续性痛，非NMDA受体主要介导一过性痛。本研究观察到，CNQX阻断了伤害性电刺激隐神经引起的脊髓Fos蛋白表达的显著增加，提示非NMDA受体参与到SN伤害性传入信息引起脊髓Fos蛋白表达增加的过程，为镇痛机理的研究提供新的实验基础。

[1] 曾文泓,刘德明.c-fos基因与脊髓损伤.四川解剖学杂志,2008,16(1):20-22.

[2] 杨宇,杨静玉,等.电刺激隐神经对大鼠脊髓c-fos基因表达的影响.沈阳医学院学报，2010,12(2):69-72.

[3] 郭新华,刘凌云,李清君.不同类型的谷氨酸受体在脊髓痛觉过敏产生中的作用及其信号转导机制.河北医科大学学报，2005,26(3):218-220.

[4] 商丽宏,代秋竹,陈魁敏.等.CNQX对截断尾末端后小鼠痛反应变化的影响.中国医科大学学报，2011，40(1):48-52.