壮骨颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响

邢志军　陈德喜　赵景明

[摘要] 目的 探讨壮骨颗粒对原发性骨质疏松症的作用机制，为壮骨颗粒治疗骨质疏松症提供实验依据。 方法 建立6个月龄雌性SD大鼠卵巢摘除骨质疏松模型，模型成立后随机分为A组（假手术对照组）、B组（去卵巢对照组）、C组（钙尔奇-D组）、D组（壮骨颗粒组），A、B组喂服生理盐水、C组喂服钙尔奇-D、D组喂服壮骨颗粒。喂药12周后处死取材，检测大鼠离体股骨骨密度和血清钙、磷、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（BGP）、雌二醇（E2）等的浓度。 结果 A组大鼠毛皮颜色光泽，饮食、活动均正常；B组大鼠毛皮颜色无光泽，饮食量减少，活动次数降低，体重高于A组（P<0.01），与发生骨质疏松症时出现的脾肾阳虚标准相符；C、D组大鼠毛皮颜色光亮，饮食量增加，活动次数增多，体重高于A组（P<0.05）。B组股骨骨密度及血清E2水平均显著低于A组（P<0.05），C、D组双侧骨密度水平显著高于B组（P<0.05）。4组间的血清钙、磷水平差异无统计学意义（P>0.05）；B组血清BGP测定结果显著高于A组（P<0.05），C、D组也明显高于A组（P<0.01），而与B组差异无统计学意义（P>0.05）；C、D组血清ALP较A组明显升高（P<0.01）。 结论 壮骨颗粒可以提高骨质疏松大鼠的骨密度及BGP、E2水平，增强成骨细胞活性，促进骨形成，抑制骨吸收。

[关键词] 骨质疏松症；骨密度；壮骨颗粒

[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（c）-0008-04

骨质疏松症是老年常见病，多与老年人体重、体脂及体内激素有关，是由于较少的骨矿含量、骨小梁数量，再加上骨组织显微结构衰退引起的，易导致骨折，属于全身性骨病[1]。据相关资料显示，有>15%的50岁城市骨质疏松症老年妇女出现椎体压缩骨折，>20%的70岁以上老年人出现不同程度的椎体压缩性骨折[2-3]。现代医学主要从抑制骨吸收和促进骨形成两方面进行治疗，虽然有一定疗效，但存在着价格昂贵、副作用较大等弊端[4]。本文从中医理论出发，结合现代医学知识，在对骨质疏松症病机再认识的基础上，提出补肾健脾活血法，创制了壮骨颗粒，从动物实验方面进行初步研究。

1 材料与方法

1.1 动物与分组

6个月龄雌性SD大鼠40只，体重（210±20） g，由西安交通大学动物实验中心提供。随机将40只大鼠分为4组，各10只，分别为A组（假手术对照组）、B组（去卵巢对照组）、C组（钙尔奇-D组）、D组（壮骨颗粒组）。大鼠饲养在清洁级屏障系统动物房里，定期清洁，定时通风，保持干燥，饲养房保持安静，室温维持在18～25℃，湿度40%～70%，饲养条件一致。

1.2 药品

壮骨颗粒（由淫羊藿、补骨脂、山茱萸、党参等组成）由青岛中医医院制剂室提供；钙尔奇-D颗粒由江苏惠氏药业有限责任公司生产，生产批号：国药准字号第H10950029号。采用青霉素钠（华北制药股份有限公司，国药准字H13020657）注射，800 000 U/瓶。

1.3 试剂与仪器

由北京中生生物工程高科技术公司提供钙、磷、碱性磷酸酶（ALP）试剂。由北京北免东雅生物技术研究所提供血清雌二醇（E2）、骨钙素（BGP）试剂盒。主要实验器材有XD811生化分析仪，FT.613型自动计算125I放免测量仪，721分光光度计，DPX.I Q型双能X线骨密度仪。

1.4 模型建立

所有大鼠用10%水合氯醛（350 mg/kg，腹腔麻醉），全麻后，腹位固定大鼠，B、C、D组取脊柱旁两侧肋脊角纵向切口摘除双侧卵巢，A组大鼠将卵巢周围脂肪部分切除，逐层缝合切口。大鼠术后采取青霉素进行肌内注射，200 000 U/次，2次/d，共3 d，将大鼠隔离分别放置笼子中，1周后拆线。每组大鼠在饮水、吃食时均在相同条件下。术后7 d，C组灌胃钙尔奇-D 1.5 g/（kg·d），D组灌胃壮骨颗粒2 g/（kg·d），A、B组灌胃等体积生理盐水2 ml/（kg·d）。

1.5 取样

连续给药12周，称重后停药取样，采取摘除眼球方法，取5 ml血液，3000 r/min离心15 min，分离血清，将其保存在抗凝管中，放置于-20℃环境下保存。选取大鼠双侧股骨，将股骨表面上的软组织和软骨去除，用生理盐水浸湿的纱布包裹做好标记备用。

1.6 观测指标及方法[5]

1.6.1 一般状况观察 定期每天对大鼠毛色、饮食及活动情况进行详细观察并记录；每周称量一次体重。

1.6.2 血生化指标 采用终点法对大鼠的血清钙、血清磷水平进行检测；采用动态法对大鼠血清ALP水平进行检测；采用放射免疫法对血清BGP、E2水平进行检测。

1.6.3 骨矿密度（BMI） 测定双侧股骨骨密度可采用Lunar公司生产的双能X线骨密度仪，骨密度值采用单位面积内的骨矿物质含量表示（g/cm2）。

1.7 统计学分析

应用SPSS 18.0统计学软件处理数据，数据用x±s表示，采用q检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组大鼠术后12周一般情况的比较

A组大鼠毛皮颜色光泽，饮食、活动均正常；B组大鼠毛皮颜色无光泽，饮食量减少，活动次数降低，体重高于A组（P<0.01），与发生骨质疏松症时出现的脾肾阳虚标准相符；C、D组大鼠毛皮颜色光亮，饮食量增加，活动次数增多，体重高于A组（P<0.05），可见，采用壮骨颗粒可明显改善骨质疏松症大鼠脾肾阳虚症状（表1、图1）。

2.2 4组大鼠股骨头骨密度及血清E2检测情况的比较

B组股骨头骨密度及血清E2水平均显著低于A组（P<0.05）。C、D组双侧骨密度水平显著高于B组，差异有统计学意义（P<0.05）（表2）。

3 讨论

骨质疏松症是老年人常见病症，属于代谢性骨病，在中医中属于“骨萎”“骨痹”“腰背痛”“骨枯”等范畴[6-7]。近年来，老年性骨质疏松发病率不断提升，由骨质疏松引起的畸形、疼痛及骨折等症状显著影响老年人的身心健康，使老年人生活质量下降[8]。在原发性骨质疏松症中，常见病症类型为绝经后骨质疏松症，是由于妇女绝经导致激素缺乏引起。女性在缺乏雌激素后，易导致骨代谢紊乱。骨吸收和骨形成的耦联会遭到严重破坏，当女性骨吸收大于骨形成时，会降低骨量，改变骨微细结构，从而引发骨质疏松症[9-10]。

通常临床上治疗骨质疏松症时，多联合应用药物。常用药物包括制剂雌激素、降钙素、双磷酸盐类，以及维生素D3、钙剂等基础用药，但应用这些药物时多会受到成本、并发症等限制[11-12]。骨质疏松症治疗时采用补肾中药疗效日渐显著，成本较低，使中药得到重点研究。

在本研究中，B组股骨骨密度及血清E2水平均显著低于A组（P<0.05），其表现与临床上将人卵巢切除以及自然绝经后症状相似。B组血清ALP、BGP测定水平均显著高于A组（P<0.05），表明通过建立的实验模型得出骨形成及骨吸收均增强的骨代谢高转换状态，与相关参考文献表述相同。C、D组较B组骨密度均明显提高，说明壮骨颗粒与钙尔奇-D能够避免大鼠去卵巢后发生骨量丢失现象。每组大鼠通过12周治疗后，C、D组体重均明显增加，表明采用壮骨颗粒对大鼠胃肠吸收功能起到有效的促进作用，增加了动物体重。BGP是一种非胶原蛋白，由骨细胞合成分泌引起，通常认为BGP是评价成骨功能的较特异的参数。BGP在骨细胞间质沉积的同时，也释放入血，血中BGP与骨中BGP含量呈密切正相关关系，从而在查看骨形成情况时，可以监测血中BGP的含量。血清ALP由成骨细胞和肝脏合成，当肝功能正常时，可以采用ALP检测骨形成情况。本研究中，C、D组血清BGP和ALP均明显高于A组（P<0.01），说明壮骨颗粒能维持去卵巢后高的骨形成状态。

壮骨颗粒是针对骨质疏松“肾亏脾虚”这一病理机制，以中医“肾主骨”“补先后天”理论为原则组方而成[13]。方中淫羊藿、杜仲等起到显著的补肾壮阳、强筋健骨之功效，黄芪等起到健脾益气功效，从而使脾肾同时得到强健，起到壮骨充髓作用，强筋丰肌。同时又配以三七等起到活血化瘀、行气止痛之功效，达到促进成骨过程、提高骨矿含量、改善骨小梁质量、有效治疗骨质疏松症的目的。现代药理研究表明，淫羊藿有明显增强性腺功能、促进性功能的作用，可以抑制成骨细胞凋亡，促进骨形成，减少骨吸收[14]，改善骨质疏松症的病理形态学改变[15]。杜仲有类激素样作用，能增进大鼠骨髓生成和增加其骨质的强度，从而促进骨形成且能较好地维持骨生物力学[16]。本实验结果证明，壮骨颗粒能够明显提高模型大鼠骨密度及血清E2、BGP、ALP含量，达到防治骨质疏松症的目的。

[参考文献]

[1] 刘忠厚.骨质疏松学[M].北京：科学出版社，1998：142-143.

[2] 赵刚，胡侦明，郭立民，等.骨质疏松性脊柱骨折与椎体强化[J].昆明医学院学报，2007，28（4）：124-128.

[3] 张立娟.淫羊藿苷对成骨细胞凋亡的影响[J].同济大学学报：医学版，2008，29（1）：30-33.

[4] 刘仕杰.淫羊藿苷对去卵巢骨质疏松症雌鼠的疗效及机理初步研究[J].中国中医基础医学杂志，2012，18（3）：271-272.

[5] 葛文杰.杜仲对去势雌性骨质疏松大鼠骨代谢、骨生物力学的影响[J].山东中医药大学学报，2009，33（5）：417-419.

[6] 师晶丽，赵永华，梁健姿，等.补肾壮骨胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松症骨密度和相关细胞因子的影响[J].世界中医药，2008，3（2）：110-112.

[7] 李东涛，李富玉，王剑，等.骨质疏松症中医证候疗效评价方法研究[J].中医杂志，2013，54（13）：134-135.

[8] 章才干.壮骨止痛胶囊治疗骨质疏松症40例[J].中医杂志，2013，54（16）：129-130.

[9] 曾英，莫新民，雷晓明，等.壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症骨密度及相关生化指标的影响[J].湖南中医药大学学报，2008，28（2）：216-217.

[10] 邵玉，黄海，周丽，等.补肾壮骨冲剂对去势骨质疏松大鼠骨组织形态学的影响[J].广州中医药大学学报，2011， 28（1）：264-265.

[11] 田丙坤，邢玉瑞，张丹.固本活血壮骨颗粒对去卵巢大鼠血清IGF-1和IL-1β影响的实验研究[J].中国中医基础医学杂志，2011，19（5）：178-179.

[12] 武密山，李恩，赵素芝，等.抗骨松颗粒对去卵巢大鼠骨质含量和生物力学的影响[J].中国老年学杂志，2008， 28（23）：154-155.

[13] 曾英，莫新民，彭琼辉，等.壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症无机元素的影响[J].中国中医基础医学杂志，2008，19（7）：57-59.

[14] 刘玉全，蔡莹.GM颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用[J].时珍国医国药，2008，19（8）：226-227.

[15] 李晓昊，林宁，邓伟民，等.补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨质疏松症骨组织计量学的影响[J].中国骨质疏松杂志，2012，18（2）：561-562.

[16] 莫新民，曾英，金红，等.壮骨止痛胶囊对去卵巢雌性骨质疏松症大鼠相关激素与细胞因子影响的实验研究[J].中国中医基础医学杂志，2008，14（8）：109-111.

（收稿日期：2013-12-13 本文编辑：郭静娟）

3 讨论

骨质疏松症是老年人常见病症，属于代谢性骨病，在中医中属于“骨萎”“骨痹”“腰背痛”“骨枯”等范畴[6-7]。近年来，老年性骨质疏松发病率不断提升，由骨质疏松引起的畸形、疼痛及骨折等症状显著影响老年人的身心健康，使老年人生活质量下降[8]。在原发性骨质疏松症中，常见病症类型为绝经后骨质疏松症，是由于妇女绝经导致激素缺乏引起。女性在缺乏雌激素后，易导致骨代谢紊乱。骨吸收和骨形成的耦联会遭到严重破坏，当女性骨吸收大于骨形成时，会降低骨量，改变骨微细结构，从而引发骨质疏松症[9-10]。

通常临床上治疗骨质疏松症时，多联合应用药物。常用药物包括制剂雌激素、降钙素、双磷酸盐类，以及维生素D3、钙剂等基础用药，但应用这些药物时多会受到成本、并发症等限制[11-12]。骨质疏松症治疗时采用补肾中药疗效日渐显著，成本较低，使中药得到重点研究。

在本研究中，B组股骨骨密度及血清E2水平均显著低于A组（P<0.05），其表现与临床上将人卵巢切除以及自然绝经后症状相似。B组血清ALP、BGP测定水平均显著高于A组（P<0.05），表明通过建立的实验模型得出骨形成及骨吸收均增强的骨代谢高转换状态，与相关参考文献表述相同。C、D组较B组骨密度均明显提高，说明壮骨颗粒与钙尔奇-D能够避免大鼠去卵巢后发生骨量丢失现象。每组大鼠通过12周治疗后，C、D组体重均明显增加，表明采用壮骨颗粒对大鼠胃肠吸收功能起到有效的促进作用，增加了动物体重。BGP是一种非胶原蛋白，由骨细胞合成分泌引起，通常认为BGP是评价成骨功能的较特异的参数。BGP在骨细胞间质沉积的同时，也释放入血，血中BGP与骨中BGP含量呈密切正相关关系，从而在查看骨形成情况时，可以监测血中BGP的含量。血清ALP由成骨细胞和肝脏合成，当肝功能正常时，可以采用ALP检测骨形成情况。本研究中，C、D组血清BGP和ALP均明显高于A组（P<0.01），说明壮骨颗粒能维持去卵巢后高的骨形成状态。

壮骨颗粒是针对骨质疏松“肾亏脾虚”这一病理机制，以中医“肾主骨”“补先后天”理论为原则组方而成[13]。方中淫羊藿、杜仲等起到显著的补肾壮阳、强筋健骨之功效，黄芪等起到健脾益气功效，从而使脾肾同时得到强健，起到壮骨充髓作用，强筋丰肌。同时又配以三七等起到活血化瘀、行气止痛之功效，达到促进成骨过程、提高骨矿含量、改善骨小梁质量、有效治疗骨质疏松症的目的。现代药理研究表明，淫羊藿有明显增强性腺功能、促进性功能的作用，可以抑制成骨细胞凋亡，促进骨形成，减少骨吸收[14]，改善骨质疏松症的病理形态学改变[15]。杜仲有类激素样作用，能增进大鼠骨髓生成和增加其骨质的强度，从而促进骨形成且能较好地维持骨生物力学[16]。本实验结果证明，壮骨颗粒能够明显提高模型大鼠骨密度及血清E2、BGP、ALP含量，达到防治骨质疏松症的目的。

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[8] 章才干.壮骨止痛胶囊治疗骨质疏松症40例[J].中医杂志，2013，54（16）：129-130.

[9] 曾英，莫新民，雷晓明，等.壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症骨密度及相关生化指标的影响[J].湖南中医药大学学报，2008，28（2）：216-217.

[10] 邵玉，黄海，周丽，等.补肾壮骨冲剂对去势骨质疏松大鼠骨组织形态学的影响[J].广州中医药大学学报，2011， 28（1）：264-265.

[11] 田丙坤，邢玉瑞，张丹.固本活血壮骨颗粒对去卵巢大鼠血清IGF-1和IL-1β影响的实验研究[J].中国中医基础医学杂志，2011，19（5）：178-179.

[12] 武密山，李恩，赵素芝，等.抗骨松颗粒对去卵巢大鼠骨质含量和生物力学的影响[J].中国老年学杂志，2008， 28（23）：154-155.

[13] 曾英，莫新民，彭琼辉，等.壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症无机元素的影响[J].中国中医基础医学杂志，2008，19（7）：57-59.

[14] 刘玉全，蔡莹.GM颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用[J].时珍国医国药，2008，19（8）：226-227.

[15] 李晓昊，林宁，邓伟民，等.补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨质疏松症骨组织计量学的影响[J].中国骨质疏松杂志，2012，18（2）：561-562.

[16] 莫新民，曾英，金红，等.壮骨止痛胶囊对去卵巢雌性骨质疏松症大鼠相关激素与细胞因子影响的实验研究[J].中国中医基础医学杂志，2008，14（8）：109-111.

（收稿日期：2013-12-13 本文编辑：郭静娟）

3 讨论

骨质疏松症是老年人常见病症，属于代谢性骨病，在中医中属于“骨萎”“骨痹”“腰背痛”“骨枯”等范畴[6-7]。近年来，老年性骨质疏松发病率不断提升，由骨质疏松引起的畸形、疼痛及骨折等症状显著影响老年人的身心健康，使老年人生活质量下降[8]。在原发性骨质疏松症中，常见病症类型为绝经后骨质疏松症，是由于妇女绝经导致激素缺乏引起。女性在缺乏雌激素后，易导致骨代谢紊乱。骨吸收和骨形成的耦联会遭到严重破坏，当女性骨吸收大于骨形成时，会降低骨量，改变骨微细结构，从而引发骨质疏松症[9-10]。

通常临床上治疗骨质疏松症时，多联合应用药物。常用药物包括制剂雌激素、降钙素、双磷酸盐类，以及维生素D3、钙剂等基础用药，但应用这些药物时多会受到成本、并发症等限制[11-12]。骨质疏松症治疗时采用补肾中药疗效日渐显著，成本较低，使中药得到重点研究。

在本研究中，B组股骨骨密度及血清E2水平均显著低于A组（P<0.05），其表现与临床上将人卵巢切除以及自然绝经后症状相似。B组血清ALP、BGP测定水平均显著高于A组（P<0.05），表明通过建立的实验模型得出骨形成及骨吸收均增强的骨代谢高转换状态，与相关参考文献表述相同。C、D组较B组骨密度均明显提高，说明壮骨颗粒与钙尔奇-D能够避免大鼠去卵巢后发生骨量丢失现象。每组大鼠通过12周治疗后，C、D组体重均明显增加，表明采用壮骨颗粒对大鼠胃肠吸收功能起到有效的促进作用，增加了动物体重。BGP是一种非胶原蛋白，由骨细胞合成分泌引起，通常认为BGP是评价成骨功能的较特异的参数。BGP在骨细胞间质沉积的同时，也释放入血，血中BGP与骨中BGP含量呈密切正相关关系，从而在查看骨形成情况时，可以监测血中BGP的含量。血清ALP由成骨细胞和肝脏合成，当肝功能正常时，可以采用ALP检测骨形成情况。本研究中，C、D组血清BGP和ALP均明显高于A组（P<0.01），说明壮骨颗粒能维持去卵巢后高的骨形成状态。

壮骨颗粒是针对骨质疏松“肾亏脾虚”这一病理机制，以中医“肾主骨”“补先后天”理论为原则组方而成[13]。方中淫羊藿、杜仲等起到显著的补肾壮阳、强筋健骨之功效，黄芪等起到健脾益气功效，从而使脾肾同时得到强健，起到壮骨充髓作用，强筋丰肌。同时又配以三七等起到活血化瘀、行气止痛之功效，达到促进成骨过程、提高骨矿含量、改善骨小梁质量、有效治疗骨质疏松症的目的。现代药理研究表明，淫羊藿有明显增强性腺功能、促进性功能的作用，可以抑制成骨细胞凋亡，促进骨形成，减少骨吸收[14]，改善骨质疏松症的病理形态学改变[15]。杜仲有类激素样作用，能增进大鼠骨髓生成和增加其骨质的强度，从而促进骨形成且能较好地维持骨生物力学[16]。本实验结果证明，壮骨颗粒能够明显提高模型大鼠骨密度及血清E2、BGP、ALP含量，达到防治骨质疏松症的目的。

[参考文献]

[1] 刘忠厚.骨质疏松学[M].北京：科学出版社，1998：142-143.

[2] 赵刚，胡侦明，郭立民，等.骨质疏松性脊柱骨折与椎体强化[J].昆明医学院学报，2007，28（4）：124-128.

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[4] 刘仕杰.淫羊藿苷对去卵巢骨质疏松症雌鼠的疗效及机理初步研究[J].中国中医基础医学杂志，2012，18（3）：271-272.

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[6] 师晶丽，赵永华，梁健姿，等.补肾壮骨胶囊对去卵巢大鼠骨质疏松症骨密度和相关细胞因子的影响[J].世界中医药，2008，3（2）：110-112.

[7] 李东涛，李富玉，王剑，等.骨质疏松症中医证候疗效评价方法研究[J].中医杂志，2013，54（13）：134-135.

[8] 章才干.壮骨止痛胶囊治疗骨质疏松症40例[J].中医杂志，2013，54（16）：129-130.

[9] 曾英，莫新民，雷晓明，等.壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症骨密度及相关生化指标的影响[J].湖南中医药大学学报，2008，28（2）：216-217.

[10] 邵玉，黄海，周丽，等.补肾壮骨冲剂对去势骨质疏松大鼠骨组织形态学的影响[J].广州中医药大学学报，2011， 28（1）：264-265.

[11] 田丙坤，邢玉瑞，张丹.固本活血壮骨颗粒对去卵巢大鼠血清IGF-1和IL-1β影响的实验研究[J].中国中医基础医学杂志，2011，19（5）：178-179.

[12] 武密山，李恩，赵素芝，等.抗骨松颗粒对去卵巢大鼠骨质含量和生物力学的影响[J].中国老年学杂志，2008， 28（23）：154-155.

[13] 曾英，莫新民，彭琼辉，等.壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症无机元素的影响[J].中国中医基础医学杂志，2008，19（7）：57-59.

[14] 刘玉全，蔡莹.GM颗粒对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用[J].时珍国医国药，2008，19（8）：226-227.

[15] 李晓昊，林宁，邓伟民，等.补肾壮骨颗粒对去势大鼠骨质疏松症骨组织计量学的影响[J].中国骨质疏松杂志，2012，18（2）：561-562.

[16] 莫新民，曾英，金红，等.壮骨止痛胶囊对去卵巢雌性骨质疏松症大鼠相关激素与细胞因子影响的实验研究[J].中国中医基础医学杂志，2008，14（8）：109-111.

（收稿日期：2013-12-13 本文编辑：郭静娟）