上皮性卵巢癌组织Snail与Axl的表达及其意义

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(1 青岛大学医学院妇产科学教研室,山东 青岛 266021 2 烟台山医院产科; 3 青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院妇科)

卵巢癌是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一，其死亡率居恶性肿瘤之首。卵巢癌病理种类繁多，其中上皮性卵巢癌占所有类型卵巢癌的90%。侵袭、转移是目前卵巢癌治疗的一大难题，其发生、发展及浸润转移的分子机制尚不完全清楚。近年来大量研究结果显示，上皮间质转化(EMT)与肿瘤的浸润转移有关，而锌指转录因子Snail及受体酪氨酸激酶Axl均参与EMT过程[1-2]，并且两者之间可能通过某种信号通路相互联系。本文通过检测上皮性卵巢癌组织中Snail、Axl的表达及分析其与临床病理特征之间的关系，探讨Snail、Axl两种蛋白在上皮性卵巢癌组织表达的意义。

1 资料与方法

1.1 标本及来源

2011年7月—2012年10月，选取青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院手术切除、经病理检查确诊为上皮性卵巢癌组织标本56例，病人年龄25～76岁，平均53.4岁。术前均未行辅助放化疗。按照FIGO分期标准，Ⅰ期10例，Ⅱ期4例，Ⅲ期33例，Ⅳ期9例；分化程度：高分化11例，中分化18例，低分化27例；病理类型：浆液性腺癌29例，黏液性腺癌11例，子宫内膜样腺癌12例，透明细胞癌3例，混合性癌1例；有淋巴结转移31例，无淋巴结转移25例。

随机选取同期卵巢良性上皮性肿瘤组织56例及正常卵巢组织28例作为对照，其平均年龄分别是51.28、52.43岁。所有标本均经40 g/L甲醛溶液固定，常规脱水、石蜡包埋，4 μm厚度连续切片。

1.2 主要试剂

兔抗人Snail多克隆抗体、兔抗人Axl多克隆抗体(购自美国Abcam公司)，配制成1∶100、1∶50溶液；辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG，购自上海生工有限公司，配制成1∶100溶液；DAB酶底物显色试剂盒，购自福建迈新试剂公司；PBS缓冲液(pH 7.4)、二甲苯、枸橼酸盐抗原修复液、多浓度梯度乙醇、过氧化氢等试剂由为青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院病理科提供。

1.3 Snail、Axl蛋白表达检测

采用免疫组化SP法，按试剂盒说明书进行操作，用已知的阳性切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 结果判定标准

Snail蛋白主要定位于细胞核，出现黄色颗粒状染色为阳性；Axl蛋白主要定位于细胞质中，以细胞浆黄色染色为阳性。综合染色强度和阳性细胞百分率确定表达情况。①染色强度计分：无着色或染色不清，0分；浅黄色，1分；黄色，2分；棕黄色3分。②阳性细胞百分率计分：无阳性细胞，0分；阳性细胞1%～25%，1分；阳性细胞26%～50%，2分；阳性细胞51%～75%，3分；阳性细胞>75%，4分。每张切片计分等于染色强度计分乘以阳性细胞百分率计分，以0～2分为阴性，≥3分为阳性。

1.5 统计学处理

应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，数据间比较均采用χ2检验或者Fisher’s精确概率法，相关性分析采用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 卵巢组织中Snail、Axl表达比较

Snail在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为67.9%，其表达明显高于卵巢良性上皮性肿瘤组织(25.0%)及正常卵巢组织(21.4%),差异有显著性(χ2=20.677、16.132,P<0.01)。Axl在上皮性卵巢癌组织、卵巢良性上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织阳性表达率分别是58.9%、7.1%、4.0%，差异有显著性(χ2=31.226、20.596,P<0.05)。

2.2 上皮性卵巢癌组织中Snail、Axl的表达与临床病理参数之间的关系

Snail和Axl在FIGO分期晚、分化程度低、原发灶及有淋巴结转移的上皮性卵巢癌组织高表达，差异有显著性(χ2=2.635～12.143，P<0.05)；二者表达高低与病理类型无关(P>0.05)。见表1。

2.3 上皮性卵巢癌组织Snail与Axl表达的相关性

本文38例Snail表达阳性的上皮性卵巢癌组织中，33例Axl表达阳性。Spearman等级分析显示，Snail及Axl两种蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达呈正相关(r=0.692，P<0.05)。

表1上皮性卵巢癌组织Snail、Alx的表达与临床病理特征之间的关系(例)

临床病理参数nSnail表达+-χ2值P值Axl表达+-χ2值P值FIGO分期 Ⅰ～Ⅱ1468410 Ⅲ～Ⅳ4232105.3490.02629137.1080.009分化程度 G1113829 G218117108 G32723412.1430.00221611.5940.003发生部位 原发灶5638183323 转移灶423574.1390.0343394.2110.032淋巴结转移 有31256238 无2513125.2060.02310156.6860.010病理类型 浆液性乳头状腺癌29218209 黏液性腺癌117456 子宫内膜样腺癌128475 透明细胞癌32112 混合性癌1010.9940.331012.6350.105

3 讨 论

研究显示，EMT在胚胎发育、器官纤维化及恶性肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用[3]。EMT发生时会引起上皮细胞的极性丧失、细胞形态改变、细胞间的黏附力减低、运动转移能力增强，从而转变成间质细胞。近年来大量研究显示，EMT是引起恶性肿瘤侵袭转移的重要机制，并且在上皮性肿瘤早期阶段引起肿瘤浸润、转移[4]。

Snail是锌指转录因子家族中的一员，是一种转录抑制因子。Snail可通过与E-cadherin的E-box区域结合抑制E-cadherin表达，导致上皮细胞的黏附力降低，迁移能力增强而促进肿瘤的侵袭转移[5]。BLECHSCHMIDT等[6]研究显示， 在卵巢癌的原发灶中Snail表达增高，E-cadherin表达下调，这一现象在转移灶中更为明显，并且二者的表达与卵巢癌的临床病理分期及预后呈正相关。本文研究结果与其一致，Snail的表达与上皮性卵巢癌临床分期及发生部位有关， FIGO分期越晚，Snail的阳性表达率越高，且转移灶中的阳性表达率高于原发灶。有研究显示，Snail在正常胃黏膜组织中低表达，在组织分化级别低、临床分期晚、有淋巴结转移及脉管侵犯的胃癌组织中表达增强，并且与胃癌的组织分化程度、临床分期、有无淋巴结转移及血管侵犯呈正相关[7]。本文的研究结果显示，Snail蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达高于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织，差异有显著性，提示Snail可能在上皮性卵巢癌发生过程中起重要作用，Snail可能成为上皮性卵巢癌和卵巢良性上皮性肿瘤鉴别诊断的参考指标。本文结果显示，Snail在FIGO分期晚、组织分化级别低及有淋巴结转移的上皮性卵巢癌组织中高表达，而与其病理类型无关。说明Snail的高表达可能与上皮性卵巢癌的浸润转移及不良预后有关。Snail有望成为判断卵巢癌预后的指标之一。

Axl是一种受体酪氨酸激酶，存在于细胞膜上，可通过活化PI3K/Akt、MAPK、NF-κB、STAT3等多种信号途径参与肿瘤的形成及侵袭、转移。SUN等[8]研究显示，Axl及其配体Gas6在人类子宫内膜癌组织中表达明显高于正常子宫内膜组织。本文研究结果显示，Axl在上皮性卵巢癌组织中的表达阳性率高于良性上皮性卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织。李玉春[9]研究显示，上皮性卵巢癌组织和血清Axl浓度明显高于卵巢良性上皮性肿瘤组织和健康对照组，且上皮性卵巢癌病人术前血清Axl浓度与组织Axl蛋白表达有一定关系。说明Axl高表达可能提示肿瘤发生恶变，血清Axl的浓度测定对于鉴别卵巢肿瘤良恶性有一定的价值,可能会成为诊断上皮性卵巢癌新的肿瘤标志物。 RANKIN等[10]研究结果也显示，Axl在正常卵巢组织中不表达，在FIGO分期晚的卵巢癌组织及转移灶中较高表达。SHIEH 等[11]研究显示，Axl表达高低与肿瘤侵袭能力大小密切相关。本文结果显示，临床分期晚、有淋巴结转移的上皮性卵巢癌组织中Axl高表达，并随着组织分化级别的降低Axl的表达逐渐增强，且在肿瘤原发病灶的表达高于转移病灶，但在不同病理类型的上皮性卵巢癌组织中Axl的表达差异无显著性。说明Axl高表达可能与上皮性卵巢癌的浸润、转移有关，进而参与了肿瘤的发生、发展。

在EMT诱导恶性肿瘤发生与发展的过程中，Snail及Axl均可通过间接诱导EMT发生的上皮细胞标志物E-cadherin及间质细胞标志物Vimentin表达而诱导肿瘤细胞的浸润转移。Snail可抑制E-cadherin的表达，引起上皮细胞黏附力下降、细胞迁移能力增强从而发生EMT，转变成间充质细胞。Axl是EMT过程中与Vimentin有关的引起癌细胞迁移的关键因子，在肿瘤生长、浸润、转移及抗凋亡过程中发挥作用。ZHANG等[12]提出，Axl参与了乳癌EMT，是EMT的下游作用产物，并受Snail家族中Twist、Snail、Zeb2等转录调节因子的调节。本文的研究结果显示，Snail及Axl在上皮性卵巢癌组织中的表达呈正相关。说明Snail、Axl可能在EMT促进肿瘤细胞浸润转移中存在某些潜在的相互作用机制，两种蛋白在肿瘤发生发展过程中可能起着相辅相成共同促进的作用。

综上所述，Snail、Axl的异常高表达与上皮性卵巢癌的侵袭转移密切相关。

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[12]ZHANG Y X, KNYAZEV P G, CHEBURKIN Y V, et al. AXL is a potential target for therapeutic intervention in breast cancer progression[J]. Cancer Res, 2008,68(6):1905-1915.