HPLC法测定寒湿痹阻型外敷制剂中绿原酸的含量

2014-03-21赵紫亮杨春辉张小东

长春中医药大学学报 2014年3期

赵紫亮，杨春辉，张小东，闻辉，王沛

(长春中医药大学，长春130117)

寒湿痹阻型外敷制剂(由萆薢、木瓜、乌药等中药精制而成)，是本课题组将临床应用多年，疗效十分理想的口服协定处方制剂的改型制剂，具有活血祛瘀、健骨补肾之功，局部外敷，可直接吸收，并减少口服药物的不良反应。本研究对该外敷制剂中的药效成分——绿原酸建立一个含量测定方法，以求为该新制剂的制备提供理论支撑［1-2］。

1 仪器与试药

1.1 仪器高效液相色谱仪:Waters公司;SK-3200H超声清洗器:上海科导仪器有限公司;AL-204型电子天平:上海科导仪器有限公司。

1.2 药品与试剂绿原酸:中国药品生物制品检定所(批号:110753-200413);寒湿痹阻型外敷制剂是由本研究室自制(由萆薢、木瓜、乌药等药经提取后，加入适当辅料，制成)。阴性对照品，由本研究室自制;用于高效液相的试剂均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱分析条件色谱柱:Autanlit C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－0.5‰三氟乙酸水溶液(24∶76);流速:1.0 mL/min;检测波长:327 nm;柱温:30℃;理论塔板数不低于10 000。

2.2 对照品(标准品)溶液的制备取经80℃干燥至恒重的绿原酸对照品8 mg，精密称定，置于25 mL容量瓶中，用流动相(甲醇－0.5‰三氟乙酸水溶液)溶解，并加至刻线，摇匀，即得(每1 mL中约含绿原酸0.32 mg)储备液。

2.3 样品(供试品)溶液的制备取制剂适量，研细，取约1.5 g，精密称定，加70%乙醇40 mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加流动相5 mL溶解，用0.45 μm微膜滤过，取滤液，作为制剂样品供试品。

2.4 阴性对照品溶液制备按处方比例称取除木瓜外的其他药物，按制备法制成的阴性对照品，取阴性对照品适量，研细，按2.3项下操作，最终制得阴性对照品溶液。

2.5 标准曲线的制备精密吸取2.2项下的绿原酸对照品(标准品)储备液，精密量取储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。制成含绿原酸0.16～1.6 mg/ mL的一组待测液，分别吸取20 μL进样，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量为横坐标，相应的峰面积为纵坐标。以浓度对峰面积进行线性回归。求得回归方程为:Y=4 407 504.55X－1 248 761.6;r=0.999 7。结果表明绿原酸进样量在0.32～1.92 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.6 精密度实验精密吸取对照品溶液(储备液稀释10倍0.032 mg/mL)20 μL进样，连续进样6次，测定色谱峰面积。计算得精密度试验 RSD值为0.20%，结果表明实验仪器有良好的精密度。

2.7 稳定性实验取供试品适量，精密称定，依照供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，室温(20℃)下放置分别于0、2、4、8、16、24 h内待测组分峰面积，结果分别为428329、425866、414280、413020、407271、407144。计算样品溶液含量，RSD值为0.55%。结果表明，供试品溶液在24 h内是稳定的。

2.8 加样回收率实验采用加样回收法，取已知含量的样品，精密称定，分别精密加入一定量的绿原酸对照品，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按上述测定方法进行测定，计算回收率，结果平均回收率为99.66%，RSD为0.415%。

2.9 样品测定分别取批号为100501、100502、100503、100601、100602、100603的制剂6批样品，测定结果见表1。