CXCL16在系统性红斑狼疮患者外周血清中的表达及意义

秦沐婷，王晓非

（中国医科大学附属盛京医院风湿免疫科，沈阳110004）

CXCL16在系统性红斑狼疮患者外周血清中的表达及意义

秦沐婷，王晓非

（中国医科大学附属盛京医院风湿免疫科，沈阳110004）

目的探讨CXCL16在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血清中表达水平及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测来自系统性红斑狼疮（SLE）患者（34名）的47份血清和正常对照组14份血清CXCL16水平，收集被检者同批次实验室指标，计算SLE活动指数（SLEDAI），进行统计分析。结果SLE患者血清中CXCL16水平高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.04）；具有面部皮损SLE患者血清CXCL16水平较无皮损组高、肾脏损伤SLE患者血清CXCL16水平高于无肾损伤组，差异均有统计学意义（均P＜0.04）；病情相对活动SLE患者（SLEDAI≥10）血清CXCL16水平较相对缓解组（SLEDAI＜10）高，差异有统计学意义（P＜0.04）；12例经治疗SLE患者SLEDAI评分及血清CXCL16水平减低，差异有统计学意义（均P＜0.04）。结论CXCL16参与SLE的发病过程且与疾病严重程度有一定相关性；CXCL16可能参与了SLE患者皮肤炎症和肾脏损害的发病过程；血清CXCL16水平变化对于判断SLE治疗效果有一定参考意义。

红斑狼疮；系统性；趋化因子；CXCL16

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种多种因素互相作用下以T、B淋巴细胞异常活化产生大量自身抗体，临床表现多样，常造成多系统损害为特征的慢性自身免疫性疾病。细胞趋化因子在参与炎症和免疫应答过程中起重要作用，趋化因子CXCL16以可溶分泌型（Soluble CXCL16，S-CXCL16）和跨膜膜结合型（Transmembrane CXCL16，TM-CXCL16）两种形式存在，既可以以可溶形式参与激活的T淋巴细胞趋化作用，又可以与其受体CXCR6结合促进炎症进展，已证实在肾炎［1］、肺部疾患［2］、动脉粥样硬化［3］等多种炎性病变组织中表达。目前已有CXCL16与类风湿关节炎、干燥综合征等结缔组织疾病相关探索研究。国内外关于CXCL16与SLE尚缺乏相关性研究，本文通过检测SLE患者外周血清CXCL16表达水平，旨在探讨其水平变化与SLE发病机制和疾病活动程度关系及其临床意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象及其分组

根据美国风湿病学会（ACR）2009年制订的SLE分类标准，收集来自34名SLE患者血清，其中男1例，女34例，病程3月～32年，平均年龄37.43±14.34岁（18岁～67岁）；正常对照组血清14例取自同期健康体检者，女14例，男1例，平均年龄42.21±8.84岁（22岁～63岁）；SLE患者组与正常对照组的年龄、性别构成无明显差异；入组人群入院检查均未发现肿瘤或感染性疾病。

将SLE患者分为肾脏损伤组（16例）与非肾脏损伤组（19例）；血液损伤组（19例）与非血液损伤组（16例）；有关节肿痛组（16例）与无关节肿痛组（19例）；有面部皮损组（21例）与无面部皮损组（14例）；有雷诺现象组（14例）与无雷诺现象组（20例）；肾脏损伤标准为蛋白尿（24 h尿蛋白定量＞0.4 g/d）或管型尿，除外其他疾病导致肾损伤；血液损伤标准为有溶血性贫血伴网织红细胞增多或白细胞＜4×109/L或血小板＜100×1012/L（以上指标至少2次且除外药物影响）。

1.2 主要试剂及仪器

人CXCL16酶联免疫检测试剂盒购自R&D公司；酶标仪为瑞士帝肯公司Rain-bow型。

1.3 标本采集

获得研究对象同意情况下，采清晨空腹静脉血3 mL，离心（3 000 r/min，10 min）后取上清，置PC管中-20℃保存，同批检测。

1.4 CXCL16的测定

采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法，标本加入预包被人CXCL16单克隆抗体酶标孔中，温育，加入生物素标记的抗CXCL16抗体，与链霉亲和素-HRP结合，加入底物，酸化，严格按照试剂盒说明书程序进行操作。酶标仪440 nm处测OD值，绘制标准曲线，计算CXCL16浓度值。

1.5 资料收集

记录患者血常规、尿常规、CRP、ESR、抗ds-DNA抗体、ANA滴度、补体C3、补体C4、24小时尿蛋白定量等实验室指标由我院检验科协助完成，异常判定均参考同期该检查的正常值。同时收集整理患者其他临床资料，并计算患者SLEDA2评分。

1.6 统计学分析

2 结果

2.1 血清CXCL16的表达

结果显示SLE患者血清中CXCL16水平（2.41± 0.99 μg/L）高于正常对照组（1.37±0.30 μg/L），差异具有统计学意义（t=4.73，P＜0.000 1，图1）

图1 SLE患者与对照组血清CXCL16表达Fig.1 Expression of serum CXCL16 in SLE and normal control group

2.2 不同临床特征SLE患者血清中CXCL16水平表达

面部皮损组SLE患者血清中CXCL16水平较无皮损SLE患者组高、肾脏损伤组血清中SLE水平高于无肾损伤组，且差异均有统计学意义（均P＜0.04）；伴有关节肿痛症状SLE患者血清中CXCL16水平低于无关节肿痛患者、伴雷诺现象患者血清中CXCL16水平低于无雷诺现象患者，但差异无统计学意义（均P＞0.04），见表1。

2.3 SLE患者血清CXCL16与临床指标相关性分析

SLE患者血清中CXCL16水平与ESR（r=0.177，P=0.333）、CRP（r=-0.09，P=0.78）、抗ds-DNA滴度（r=-0.11，P=0.47）、ANA滴度（r=0.030，P=0.321）、IgG（r=0.03，P=0.87）、IgM（r=-0.02，P=0.89）、IgA（r=0.26，P=0.14）、C3（r=-0.189，P=0.346）、C4（r=-0.19，P=0.34）、24 h尿蛋白定量（r=-0.01，P= 0.94）均无相关性（均P＞0.04）。

2.4 SLE患者病情活动程度与血清中CXCL16水平相关性

采用2000年SLE疾病活动度评分（SLE disease activity index，SLEDAI）［4］对SLE患者病情活动评分。

参考SLEDAI将SLE患者分为基本无活动（SLEDAI=0～4）、轻度活动（SLEDAI=4～9）、中度活动（SLEDAI=10～14）、重度活动（SLEDAI≥14）4组，进行方差分析，比较浓度差异。总体比较4组患者血清中CXCL16水平有统计学差异（F=3.64P=0.023）（图2）。

将SLE患者按SLEDAI≥10分为相对活动组（22例），SLEDAI＜10分为相对缓解组（13例）。相对活动组血清CXCL16水平较相对缓解组高，浓度分别为（2.73±1.12 μg/L）及（1.90±0.43 μg/L），且差异具有统计学意义（P=0.017）。

表1 血清CXCL16表达与SLE临床特征的关系Tab.1 Correlation between the expression of serum CXCL16 and clinical manifestation of SLE

图2 CXCL16表达与SLEDAI关系Fig.2 Correlation between the expression of CXCL16 and SLEDAI

2.5 SLE患者治疗前后血清CXCL16水平比较

12例SLE初治患者应用糖皮质激素及免疫抑制剂治疗（其中2例患者仅接受糖皮质激素，7例患者接受糖皮质激素联合环磷酰胺，余3例患者接受糖皮质激素联合霉酚酸酯治疗），检测患者应用药物前及治疗2月后血清CXCL16水平，并对该患者重新进行SLEDAI评分；治疗后SLE患者血清CXCL16水平（1.91±0.43 μg/L）较治疗前（2.43±1.04 μg/L）明显减低，差异有统计学意义（P=0.023）；且治疗后SLE患者SLEDAI评分（9.42±3.68）相比治疗前（14.74±6.31）亦明显减低，差异有统计学意义（P= 0.021），见图3。

3 讨论

人CXCL16是由Matloubian于2000年首次报道［4］，由入侵部位的防御性免疫细胞产生的CXC家族趋化因子，CXCR6为CXCL16目前发现的唯一受体。TM-CXCL16在单核-巨噬细胞及树突细胞呈现高表达，炎性环境下，经去整合素样金属蛋白酶10（A disintegrin and metalloprotease 10，ADAM-10）及ADAM-17水解后，TM-CXCL16趋化功能区从细胞表面脱落，形成S-CXCL16［6］，募集炎性细胞聚集、黏附、穿过内皮细胞到达靶位点，激活单核-巨噬细胞产生大量免疫调节因子，诱导肝细胞产生大量急性反应蛋白。炎性条件下TM-CXCL16表达亦增强，将募集到的炎性细胞固定于炎性反应部位，加速炎症进展。本研究中SLE患者外周血清CXCL16表达水平升高，可能与CXCL16通过上述途径诱导并促进了炎症进展有关。

皮肤黏膜损害在SLE中发生率较高且表现多样，本研究显示伴有面部皮损SLE患者外周血清CXCL16表达水平增加。皮肤盘状红斑目前被认为是一种由Th1主导的疾病，Scholz［7］研究发现CXCL16可在人类及小鼠正常皮肤角质形成细胞表面表达，IFN-γ，TNF-α等细胞因子可诱导角质形成细胞表达CXCL16及CXCR6增加；S-CXCL16与表达CXCR6细胞特异性结合，促进Th1细胞浸润，提示可能在皮肤盘状红斑发病中发挥作用。本实验中肾脏损伤组SLE患者血清CXCL16表达亦有增加，可能与TM-CXCL16可在肾小球血管内皮细胞、肾足突细胞表达，肾小球浸润的炎性细胞对S-CXCL16产生强烈应答［8］有关。然而本研究中未发现CXCL16表达水平与患者尿蛋白定量有相关性，SLE患者肾脏损伤机制复杂，CXCL16可能与多种致病因子共同参与肾脏炎性损伤及病理改变。

图3 治疗前后CXCL16及SLEDAI变化Fig.3 Changes of CXC16 expression and SLEDAI before and after treatment

Th1/Th2失衡被认为参与SLE发病机制：Th1促进炎症发生，Th2对Th1作用逆向调控，抑制炎症进展，SLE病情活动度也与Th1/Th2比率有关。CXCR6主要在Th1细胞中表达，Th2细胞表达量很少［9］，CXCL16仅对高表达CXCR6的细胞产生趋化作用。本试验中按SLEDAI评分比较SLE患者血清CXCL16表达，结果显示随病情活动程度增高，血清CXCL16表达水平变化趋势相同；按SLEDAI=10分为水准将患者分为相对活动组及相对缓解组，相对活动组血清CXCL16水平明显高于相对缓解组，差异有统计学意义（P=0.017）。SLE患者经有效治疗随SLEDAI评分降低，外周血清CXCL16表达亦有减少，推测CXCL16可在一定程度上反应SLE病情活动程度，但灵敏程度有待进一步探究。实验中亦未发现血清CXCL16表达水平与CRP、ESR、补体C3/C4、ANA滴度、抗ds-DNA抗体滴度等病情活动相关的实验室指标具有相关关系，可进一步验证血清CXCL16反映SLE病情活动程度有限。但血清CXCL16水平变化是否可作为判断SLE治疗效果的参考指标之一，由于本实验存在病例数较少，统计学意义有限，有待扩大样本数量行进一步研究。

综上所述：CXCL16参与SLE的发病过程，与SLE皮肤黏膜损害、肾脏损伤可能相关，外周血清CXCL16表达水平在一定程度上反映疾病活动，但能否作为疾病活动程度、治疗效果的参考检测指标有待进一步探究。

［1］Riedel JH，Paust HJ，Turner JE，et al.Immature renal dendritic cells recruit regulatory CXCR6+invariant natural killer T cells to attenuate crescentic GN［J］.J Am Soc Nephrol，2012，23（12）：1987-2000.

［2］Day C，Patel R，CuiIlen C，et al.The chemokine CXCLl6 is highly and constitutively expressed by human bronchial epithelial［J］.Exp Lung Res，2009，34（4）：272-283.

［3］Oliver H，Thomas E，Nicholas JS，et al.SR-PSOX at sites predisposed to atherosclerotic lesion formation mediates monocyte-endothelial cell adhesion［J］.Atherosclerosis，2011，217（2）：371-378.

［4］Gladman DD，Ibañez D，Urowitz MB.Systemic lupus erythematosus disease activity index 2000［J］.J Rheumatol，2002，29（2）：288-291.

［5］Matloubian M，David A，Engel S，et al.A transmembrane CXC chemokine is a ligand for HIV-coreceptor Bonzo［J］.Nat Immunol，2000，1（4）：98-304.

［6］Paul G，Anja S，Nina S，et al.Tumoural CXCL16 expression is a novel prognostic marker of longer survival times in renal cell cancer patients［J］.Eur J Cancer，2009，44（3）：478-489.

［7］Scholz F，Schulte A，Adamski F，et al.Constitutive expression and regulated release of the transmembrane chemokine CXCL16 in human and murine skin［J］.J Invest Dermatol，2007，127（6）：1444-1444.

［8］Gabriela E，Garcia，Luan D，et al.Inhibition of CXCL16 attenuates inflammatory and progressive phases of anti-glomerular basement membrane antibody-associated glomerulonephritis［J］.Am J Pathol，2007，170（4）：1484-1496.

［9］Peeters MA，Chizzolini C.Cardiovascular risk in autoimmune and inflammatory disorders［J］.Rev Med Suisse，2011，7（291）：867-871.

（编辑 裘孝琦）

The Expression and ClinicalSignificanceofCXCL16 in Serum from Patientswith Systemic Lupus Erythematosus

QINMu-ting，WANGXiao-fei
（DepartmentofRheumatology and Immunology，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo investigate the levels and clinicalsignificance ofserum CXCL16 in patients with systemic lupus erythematosus.MethodsThe expression ofserum CXCL16 was measured by ELISA method in 34 patients with SLE（47 serum samples）and 14 normalcontrols.The correlation ofserum levels ofCXCL16 with clinicalactive index was analyzed.ResultsThe serum levelofCXCL16 in patients with SLEwashigherthan the normal controls（P＜0.04）.In addition，higher serum CXCL16 level was found in patients with cutaneous manifestations compared to others（P＜0.04）.Serum CXCL16 level in SLE patients with kidney damage was higher than these non-kidney damage ones（P＜0.04）.Serum CXCL16 levelin relatively active group（SLEDAI≥10）was higherthan these relatively release ones（SLEDAI＜10）（P＜0.04）.Both SLEDAIand the serum level of CXCL16 decreased after conventional treatment in 12 SLE patients（P＜0.04）.ConclusionThe SLE patients has high expression of CXCL16 in serum.CXCL16 may be involved in the process of pathogenesis of epithelial inflammation and renal damage.Variation of serum CXCL16 levelin SLE patientshasa certain reference value in monitoring therapeutic effects.

lupus erythematosus；systemic；chemokine；CXCL16

R493.24

A

0248-4646（2014）04-0300-04

辽宁省科学技术计划（2011224014）；沈阳市科学技术计划（F12-277-1-84）

秦沐婷（1989-），女，硕士研究生.

王晓非，E-mail：wangxf@sj-hospital.org

2014-02-19

网络出版时间：