脑出血微创术后自体骨髓间充质干细胞动员对神经功能恢复的影响

2014-03-21胡炜杨枫唐尤佳

中国医科大学学报 2014年5期

关键词：动员分值干细胞

胡炜，杨枫，唐尤佳

（九江市第一人民医院神经外科，江西九江332000）

脑出血微创术后自体骨髓间充质干细胞动员对神经功能恢复的影响

胡炜，杨枫，唐尤佳

（九江市第一人民医院神经外科，江西九江332000）

目的观察微创术后骨髓间充质干细胞（BMSCs）动员对脑出血术后神经功能的影响。方法将脑出血患者45例随机分为对照组（n=20，行常规立体定向手术治疗）和治疗组（n=25，术后3～5 d时行BMSCs动员）。术前及术后1、3、6个月行NIHSS量表、FIM量表评分，术前、术后2周测定外周血CD133+、CD34+细胞数，术后1个月及6个月行肝肾功能检查。结果2组术后NIHSS、FIM分值均显著高于术前（P＜0.05），治疗组术后NIHSS、FIM分值均显著高于对照组（P＜0.05）。术后2周，治疗组外周血CD133+、CD34+细胞在单核细胞中的比例明显高于对照组（P＜0.05）。术后1个月及6个月2组肝肾功能检查指标均正常。结论脑出血微创术后尽早进行BMSCs动员，可促进神经功能恢复，提高患者的生活能力和质量。

微创；干细胞动员；神经功能修复

高血压脑出血为常见病，病残、病死率高，严重威胁人类的健康。美国卒中协会自发性脑出血治疗指南（2010年）指出：微创手术能够明显降低脑出血患者死亡率，但神经功能改善则无显著性差异。如何进一步改善患者的神经功能已经成为临床新难题。

研究表明，骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells，BMSCs）可以在脑中成活并向受损部位迁移，增殖分化为神经细胞，从而促进神经功能的恢复［l，2］。而动员自体BMSCs修复损伤神经的方法，以其无创伤性及不必体外分离、纯化、扩增等特点受到广泛关注。

临床上有关立体定向术后BMSCs动员治疗脑出血的报道较少。本研究通过在脑出血急性期对基底节、丘脑高血压脑出血患者立体定向血肿引流后行BMSCs动员，观察了术后BMSCs动员对患者神经功能的影响。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选择我科收治的基底节、丘脑高血压脑出血患者45例。其中，男33例，女12例。按入院单双日分为2组：（1）治疗组（n=25）：男19例，女6例，年龄39～65岁，平均（52.62±10.70）岁。血肿量25～66 mL，平均（32.5±12.32）mL。出血至手术时间8～24 h 20例，24～72 h 5例，平均（30.15±11.45）h；（2）对照组（n=20）：男14例，女6例，年龄34～61岁，平均（54.34±9.35）岁。血肿量32～58 mL，平均（33.5± 14.68）mL。出血至手术时间8～24 h 13例，24～72 h 7例，平均（27.15±9.82）h。

诊断标准：脑出血的诊断符合全国第4次脑血管病学术会议通过的诊断标准［3］，并经过颅脑CT检查证实。

纳入标准：（1）经颅脑CT检查证实的脑出血患者；（2）生命体征稳定；（3）入院时格拉斯哥评分（GCS）6～13分且血肿稳定；（4）出血至手术时间：8～72 h；（5）对治疗方案知情同意者。

1.2 方法

所有患者均接受常规脱水降颅压、营养脑组织、预防肺部感染等药物治疗。对照组：行立体定向血肿腔置管引流手术。治疗组：在立体定向血肿腔置管引流手术的基础上，术后3～5 d开始行自体BMSCs动员。以重组人粒细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte-colony stimulating factor，rhG-CSF）和（或）重组人粒—巨噬细胞集落刺激因子（recombinant human granulocyte/macrophage-colony stimulating factor，rhGM-CSF）2.5 μg/kg皮下注射，2次/周，共6次。应用动员剂前检查血常规和凝血功能，若白细胞数＜20×109/L，继续使用动员剂；若白细胞数≥20×109/L，暂停注射，隔日复查后根据情况应用，总注射次数不变。动员后第4、24周检测肝肾功能。

1.3 指标检测及疗效评定

以美国国立卫生院神经功能缺损评分量表（NIHSS）、功能独立性评定量表（FIM）评估患者神经功能恢复情况和生活能力。2组分别于术前及术后1、3、6个月行NIHSS量表、FIM量表评分并对比分析。采用流式细胞仪测定各组术前及术后2周外周血CD133+、CD34+细胞数（即内皮祖细胞，endothelial progenitor cells，EPCs），通过检测其在外周血单核细胞（mononuclear cells，MNCs）中的比例判断动员的BMSCs数量，评估干细胞动员效果。术后1个月及6个月时行生化全套检查。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 2组基线资料的比较（表1）

2组患者在性别、年龄、NIHSS、入院时GCS、出血量、出血至手术时间等方面无显著差异（P＞0.05），具有可比性。

表1 2组患者年龄、NIHSS、GCS、出血量、手术时间等基线值的比较Tab.1 Comparison of the baseline value of age，NIHSS，GCS，bleeding，and operative time between the two groups

2.2 2组NIHSS评分、FIM评分比较

如表2所示：2组间术前NIHSS评分比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。2组术后1、3、6个月NIHSS评分较术前均降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；术后1、3、6个月治疗组NIHSS评分均低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；组内术后6个月与3个月比较，对照组NIHSS评分差异无统计学意义（P＞0.05），而治疗组NIHSS评分差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2 2组患者治疗前后NIHSS评分量表评分比较Tab.2 Comparison of NIHSS score pre and postoperative bewtween two groups

1）compared with preoperation，P＜0.05；2）compared with treated group，P＜0.05；3）compared with 3 months postoperation，P＜0.05.

如表3所示：2组手术前FIM分值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。2组术后FIM分值均高于术前，术后1个月FIM分值均显著高于术前（P＜ 0.05），且随着时间的延长差异性愈加显著；组内比较，术后6个月FIM分值显著高于术后1个月（P＜0.05）。治疗组术后1、3、6个月FIM分值显著高于对照组，术后3、6个月时的2组FIM分值差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 2组术前及术后2周外周血CD133+、CD34+细胞计数

表3 功能独立性评定（FIM）比较Tab.3 Comparison of FIM pre and postoperative between two groups

1）compared with preoperation，P＜0.05；2）compared with treated group，P＜0.05；3）compared with 1 month postoperation，P＜0.05.

如表4所示：2组患者术前外周血CD133+、CD34+细胞在MNCs中的比例无统计学差异（P＞0.05）；术后2周时，治疗组外周血CD133+、CD34+细胞在MNCs中的比例明显高于对照组（P＜0.05）。

表4 各组不同时间点CD133+、CD34+细胞计数（%MNCTab.4 CD133+CD34+cell counts at different time points in each group（%MNC

1）compared with treated group，P＜0.05.

2.4 不良反应及安全性评价

所有患者均完成治疗过程，并获得6个月随访。干细胞动员期间有3例患者感乏力及低热，停用rhG-CSF/rhGM-CSF后恢复正常。12例患者出现轻度凝血功能异常，主要为D-二聚体轻度升高。动员后第7、14、21天肝肾功能检查均正常，动员患者术后1、6个月各项生化指标正常。

3 讨论

研究证实BMSCs具有向不同组织“横向分化”的潜能，表现出很强的可塑性［4］。但是因干细胞移植存在伦理、细胞来源、移植损伤及排斥等问题，限制了其临床应用。BMSCs动员因无创、无免疫排斥、无需干细胞提取、培养、扩增，目前逐渐成为研究热点。BMSCs动员指骨髓中的干细胞受某些因素的刺激后向外周血迁移的现象。组织缺血、创伤时，这些BMSCs在各种因子诱导下可以向损伤组织迁移，称为“归巢”［5］。“归巢”后的自体BMSCs可分化为神经细胞，促进局部血管生成，从而促进局部的神经功能重建［6～8］。

动员的BMSCs主要为MNCs，后者可以进一步分化产生EPCs，故可以通过测定EPCs在MNCs中的比例间接评价动员的效果。本研究应用流式细胞仪测得2组患者术前外周血CD133+、CD34+细胞在MNCs中的比例无统计学差异（P＞0.05），术后2周时，治疗组该比例则明显高于对照组（P＜0.05）。说明以rhG-CSF/rhGM-CSF进行自体BMSCs动员有效。术前NIHSS评分组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。各组术后1、3、6个月NIHSS评分较术前均降低且差异有统计学意义（P＜0.05）；术后1、3、6个月治疗组NIHSS评分均低于对照组且差异有统计学意义（P＜0.05）；组内术后6个月与3个月比较，对照组NIHSS评分差异无统计学意义（P＞0.05），而治疗组差异有统计学意义（P＜0.05）。说明随时间延长2组患者的神经功能均逐渐恢复，而治疗组患者的神经功能恢复较对照组有明显的优势，术后3个月后，对照组神经功能恢复变缓，而治疗组患者神经功能则仍有恢复。

术前FIM分值组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。术后1个月2组FIM分值均显著高于术前（P＜0.05），且随时间延长差异性愈加显著；组内比较，术后6个月FIM分值显著高于术后1个月（P＜0.05）。治疗组术后1、3、6个月FIM分值显著高于对照组，术后3、6个月时的2组FIM分值差异有统计学意义（P＜0.05）。说明随时间延长2组患者的生活能力均逐渐恢复，而治疗组患者的生活能力恢复情况明显优于对照组。

干细胞移植治疗脑出血的最佳时机目前尚未明确，有学者认为在出血后急性期脑组织局部存在的兴奋性神经递质、自由基以及炎性因子等有促进细胞增殖和趋化的作用，但却不利于移植物的存活［9～11］。但是，如选择在发病数月后再行干细胞移植或动员，则错过了神经组织早期修复时机。本研究中，于脑出血早期即进行立体定性引流手术，并选择术后3～5 d开始进行干细胞动员，即脑内血肿引流完毕后尽早开始干细胞动员。目的是尽可能避免血红蛋白和凝血酶等神经毒性介质对动员的干细胞的影响，同时让干细胞尽早参与到神经组织修复过程中。

本研究中，所有患者均完成治疗过程，并获得6个月随访。干细胞动员期间有3例患者感乏力及低热，发生率12%，停用rhG-CSF/rhGM-CSF后恢复正常。12例患者出现轻度凝血功能异常，主要为D-二聚体轻度升高，考虑和脑出血后患者处于高凝状态并伴有纤溶功能亢进有关［12］。其余干细胞动员患者未见异常，且术后1、6个月检查各项生化指标正常。表明rhG-CSF/rhGM-CSF进行干细胞动员安全、可靠。

综上所述，微创术后自体BMSCs动员的开展可望在明显降低患者死亡率的基础上，进一步有效改善高血压脑出血患者神经功能，提高患者生活能力和质量，值得进一步临床推广。

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（编辑王又冬）

4位整数应分节

部分科技期刊对于4位数字采用了不分节的做法，依据是GB/T 15835-2011《出版物上数字用法》中的“四位以内的整数可以不分节”的条款；然而，这一条款既逻辑混乱，也是错误的。

GB/T 1.1《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编写规则》从1987年版开始，经历1993、2000年版到2009年版，始终坚持4位整数应分节的条款：“任何数，均应从小数点符号起，向左或向右每3位数字为一组，组间空1/4个汉字的间隙，但表示年号的四位数除外。示例：23 456 2 345 2. 345 2.345 6 2.345 67 2008（年号）。”GB/T 7713-1987《科学技术报告、学位论文和学术论文的编写格式》也早就规定：“大于999的整数和多于三位数的小数，一律用半个阿拉伯数字符的小间隔分开，不用千位撇。”根据这2个标准，无论在论文的行文还是图、表、公式中，对于≥4位的整数，均应采用三位分节法以小间隙分节，不用千分撇。

（郝远）

ImpactofAutologous Bone Marrow MesenchymalStem CellMobilization on NeurologicalFunction Recovery after CerebralHemorrhage Minimally Invasive Surgery

HU Wei，YANGFeng，TANGYou-jia
（DepartmentofNeurosurgery，FirstPeople′s HospitalofJiujiang City，Jiujiang 332000，China）

ObjectiveTo observe the effects of autologous bone marrow mesenchymal stem cell mobilization on neurological function recovery after cerebralhemorrhage minimally invasive surgery.MethodsTotally 45 patients with cerebralhemorrhage were randomly divided into two groups：including 20 cases in controlgroup whom received stereotactic surgery，and BMSCsmobilization was carried out3 to 5 days postoperation in the treated group（25 cases）.NIHSS scale and FIMscale were performed before the operation and 1，3，6 months postoperation.Preoperative and 2 weeks postoperative CD133+CD34+cell count was measured in peripheral blood；postoperative liver and renal function of 1，6 months were performed.ResultsPostoperative NIHSS，FIM scores were significantly higher than preoperative ones in two groups（P＜0.05），postoperative NIHSS scores and FIM scores in treated group were significantly higherthan thatofcontrolgroup（P＜0.05）.Two weeks postoperation，the proportion ofCD133+CD34+cells in mononuclear cells in peripheral blood of treated group was significantly higher than the control group（P＜0.05）.Postoperative liver and renal function of 1，6 months were normal.ConclusionBMSCs mobilization can be performed as early as possible after minimally invasive surgery of cerebralhemorrhage，which can promote the recovery ofneurologicalfunction，improve the capacity and quality oflife withoutadverse reactions.

minimal invasive；stem cell mobilization；neurological functional recovery

R651.1

0258-4646（2014）05-0437-04

胡炜（1971-），男，副主任医师，博士. E-mail：zzdxhuw@163.com

2014-02-02

网络出版时间：