鸭大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

金艳丽 （江苏省新沂市动物卫生监督所 221400）

鸭大肠杆菌病是鸭的常发病，常混合或继发于其他疾病，发病鸭多以败血症为主，主要病理变化表现为心包炎、肝周炎、气囊炎。近年来，随着我国畜牧业的发展，兽医临床上抗菌药物被广泛应用，导致大肠杆菌耐药不断增加，治疗效果下降。许多养殖户往往凭经验甚至是乱用药，不仅疗效差，且容易造成耐药性和药物残留。因此，对当地分离的大肠杆菌菌株进行抗生素的敏感试验很有必要。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源 2013年5月新沂市马陵山镇某养殖户送检的病死鸭。

1.1.2 培养基的制备 麦康凯琼脂购自青岛海博生物技术有限公司，批号20110524。各种糖及mR、VP、吲哚试验、枸橼酸盐利用试验和硫化氢试验微量发酵管，购自青岛海博生物技术有限公司，批号20090816。营养肉汤、VP试剂等参考文献配置[1]。

1.1.3 试验动物 9日龄雏鸭10只，购自城区某养鸭专业户，饲养3d后用于作动物致病性试验。

1.1.4 药敏纸片 药敏纸片购自青岛海博生物技术有限公司，批号200100125。

1.2 方法

1.2.1 流行病学调查 5家养殖户均在新沂市马陵山镇一条小河边养殖，水质污染严重，5个鸭场养殖量均在10000左右，饲养方式原始、简单，卫生状况不好，每天都有8-12只蛋鸭死亡，产蛋率低，用多种抗生素治疗均不理想，鸭群整体精神状态差。

1.2.2 病理剖检 病理剖检可见纤维素性心包炎，心包膜明显增厚，其上沉着白色或黄色纤维素性附着物。肝脏肿大，表面膜附着纤维素性样物。

1.2.3 细菌的分离培养和镜检 无菌取病送检病鸭肝脏、心血接种于营养肉汤培养基，37℃增菌培养24h。然后将培养物在麦康凯琼脂平板上划线接种，37℃培养24h，观察细菌的培养特性，革兰氏染色结果。再钩取典型菌落接种鲜血琼脂斜面37℃培养24h，4℃保存。

1.2.4 细菌的生化试验 参考文献[1]进行细菌生化试验。

1.2.5 致病性试验 取分离菌接种营养肉汤，37℃培养18h。将10只雏鸭分为两组，每组5只，第一组为于皮下接种注射纯培养物0.2ml/只(约含细菌0.6亿/只)，第二组注射灭菌肉汤0.2ml/只。接种24h后观察试验动物的发病及死亡情况。

1.2.6 细菌的药敏试验 取细菌纯培养物密集划线接种于整个普通琼脂平板上，将药敏片依次均匀贴放到平板上。每个平板放5片，各纸片中心相距约24mm，纸片距平板边缘约15mm，各纸片间距离相等。将平板倒置于37℃温箱培养24h，然后观察药物的抑菌情况，并测定各种药物抑菌圈的大小。

2 试验结果

2.1 细菌特性及镜检结果

细菌在普通肉汤中均生长良好，均匀混浊，管底有灰白色沉淀，轻摇呈云雾状；在麦康凯琼脂培养基上生长出周围粉红色，中心深红色的菌落。该菌经革兰氏染色可见红色中等大小，两端钝圆的球杆菌，多单个散在排列。

2.2 生化试验结果

该细菌能够发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇，产酸产气；发酵蔗糖，不产气；吲哚试验和mR试验阳性；VP试验、柠檬酸盐利用试验、硫化氢试验和尿素分解试验为阴性(表1)结合培养特性及镜检结果，鉴定为大肠杆菌。

表1 离菌株的生化试验结果

2.3 致病性试验结果

雏鸭在细菌接种后24h内死亡4只，而剩下的在48h后也死亡。剖检发现雏鸭有肝周炎，心包积液，心包膜有轻微的纤维素性渗出等病变。从死亡雏鸭的肝脏和心血中，分离到了大肠杆菌。而对照组无异常表现。

2.4 药物敏感试验结果

所分离菌株对呋喃妥因、阿米卡星和痢特灵3种药物高度敏感，对先锋噻肟、菌必治和庆大霉素中度敏感，而对四环素、环丙沙星等药物表现为耐药性(见表2)。

表2 分离的大肠杆菌药敏试验结果 （mm）

3 讨论

根据分离培养菌的特性、染色特点及生化试验结果，该细菌鉴定为大肠杆菌。经动物试验表明该分离菌株有较强的致病性。大肠杆菌病是一种常发病，但是却难于控制，这不仅因为其血清型多，各血清型间无交叉保护性，而且不同血清型对药物的敏感性不一致[2,3]。不同地区的大肠杆菌对药物敏感性也各不一致[4,5]。本次药敏试验结果表明分离菌对呋喃妥因、阿米卡星和痢特灵3种药物高度敏感，对先锋噻肟、菌必治和庆大霉素中度敏感，而对四环素、环丙沙星等药物表现为耐药性，表明当地鸭大肠杆菌分离株对常见的药物均有较强的耐药性。由于大肠杆菌极易产生耐药性，且介导其产生耐药的质粒具有遗传性，所以一般不建议采用抗生素低剂量长期预防用药，临床最好使用经实验筛选的敏感性药物治疗剂量作治疗性用药，病愈后应及时停止使用以防耐药性的产生[6,7]。此外，使用高敏药物时，应按说明给药，避免超量和滥用，每个疗程应在4d以上较好。当畜主按照药敏试验结果使用了高敏药物呋喃妥因5d后，病情得到了很好的控制。

4 结论

大肠杆菌为一种条件性致病菌，鸭发大肠杆菌病除了环境卫生条件差外，还与饲养密度、混群饲养、种蛋污染的因素有关[5]。为减少此病发生，主要措施是改善饲养管理，做好鸭舍的环境卫生工作，保持合理放养密度，鸭棚保持良好的通风条件，采用全进全出饲养方式。塘水清洁，定期换水，饮水、饲料要卫生消毒，特别是当天气骤变时要防止寒风侵袭，导致鸭体质下降而引发本病。种蛋要及时收集并清洁表面的污物，入孵前进行熏蒸或浸泡消毒。接种大肠杆菌灭活疫苗可以有效地预防本病的发生。由于大肠杆菌的血清型多且比较复杂，在生产中应考虑使用当地分离株制备灭活的自家苗或多价疫苗免疫预防。

大肠杆菌耐药谱很广，而且易产生或获得耐药性，因此在生产中使用药物进行预防和治疗时，要定期更换药物或几种药物交替应用。最有效的方法是根据分离细菌的药敏试验结果来选用有效的药物进行治疗。

[1]姚火春.兽医微生物学实验指导[m].北京: 中国农业出版社, 2002.

[2]刘柱江, 赵来兵.鸭大肠杆菌油佐剂灭活苗的研制[J].中国家禽, 2002, 24(8): 25-26.

[3]高松, 刘秀梵, 张如宽等.我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定[J].畜牧兽医学报, 1999, 30(2): l64-l71.

[4]黄瑜, 李文杨.番鸭大肠杆菌病的诊治[J].中国兽医杂志, 2000, 26(12): 34-35.

[5]程方俊, 周廷宣, 田晋红等.重庆养鸭场雏鸭大肠杆菌分离鉴定及药敏试验[J].西南农业大学学报, 2006, 28(6): 1107-1110.

[6]刘永松, 韦兵, 汤社护等.产蛋鸭大肠杆菌疾病的诊治及结果分析[J].中国动物检疫, 2007, 24(l2):33.

[7]周作勇, 胡世君, 王芝英等.鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验[J].西南师范大学学报(自然科学版), 2009, 34(6): 159-161.