饲用转基因豆粕对牛奶营养成分的影响及奶中外源基因转移检测

史雪萍 毕慧娟 周 茜 刘 斌 王述柏

（青岛农业大学动物科技学院 山东 青岛 266109）

近年来我国大豆进口总量迅速增长，进口品种主要为转基因大豆。虽然我国还没有批准任何转基因大豆品系进行商业化种植，但我国已经成为转基因大豆的使用与消费大国[1]。饲料安全是动物源性食品安全的重要影响因素，随着转基因饲料的广泛应用，转基因饲料安全成为饲料质量安全的重要组成部分[2]。转基因饲料外源基因在动物体内如何代谢是很多学者关注的问题，对饲用转基因饲料畜禽的产品质量及外源基因转移检测是评价转基因饲料饲用安全性的检测指标之一。本试验随机选择7个奶牛场，检测精料外源基因种类并分析其营养成分，同时检测了牛奶中的主要营养成分，旨在为转基因饲料安全性评价体系的建立提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 材料 随机选择青岛周边7个奶牛场，每个牛场采集奶牛精料4份，牛奶样品5份(取自5头牛)，牛场分别编号为1、2、3、4、5、6、7。

1.2 主要仪器设备 台式离心机(Eppendorf 5810R, Germany)、实时荧光定量PCR仪(master cycle realplex4, Eppendorf, 德国)、微量移液器(Eppendorf Research，Eppendorf, 德国)、分光光度计(BioPhotometer plus, Eppendorf, 德国)、KDN-120C凯氏定氮仪(上海纤检仪器有限公司)等。

1.3 检测指标与方法

1.3.1 奶牛精料和牛奶营养成分含量测定 主要检测奶牛精料中的水分、粗蛋白、粗纤维、粗灰分、钙和总磷含量，水分的测定参照GB6435-86，粗蛋白质的测定参照GB6432-1994，粗脂肪的测定参照GB6433-2006，粗纤维的测定参照GB/T6434-2006，粗灰分的测定参照GB/ T6438-2007。牛奶中干物质、粗蛋白和钙含量，参见饲料分析文献方法。

1.3.2 奶牛精料和牛奶中外源基因检测 奶牛精料DNA提取方法：采用GenoDNA Plant mini Kit-Genomic DNA Isolation kit试剂盒(Ambiogen安比奥生物科技有限公司，中国)提取精料DNA，采取荧光定量PCR法检测牛奶和牛精料中外源基因。核酸质量检测：分别取40μl DNA溶解液，用TE缓冲液稀释25倍后，用紫外分光光度计测其在A260，A280nm波长处的光吸收值。精料DNA和牛奶DNA纯度以OD260/280表示，A260/A280值分别为1.92和1.80，均大于1.70(比值在1.7～2.0之间较好)，符合PCR检测要求。外源基因检测：采用实时荧光PCR仪检测提取核酸的外源基因。反应条件：在96孔 PCR反应板的反应孔中，依次加入2.5ul 10×PCR缓冲液，2.0ul 4×dNTP (2.5 mmol/L)，0.5ul 20pmol/ul引物F，0.5ul 20pmol/ul引物R，0.2ul TaqDNA聚合酶(5U/ul)，2.0ul mgCl2(25mmol/ L)，0.5～2.0ul(10～50ng)DNA模板，0.5ul 20pmol/ul探针，加入去离子水使反应体积达到25ul。PCR反应的设置为95℃，10min；95℃，5s；60℃，60s进行45个循环。

2 结果及分析

2.1 奶牛精料中营养成分含量

7个牛场奶牛精料的常规营养成分含量见表1。

表1 奶牛精料的常规营养成分含量 (%)

由表1可知，各奶牛场精料的营养成分含量有不同程度差异，粗蛋白质、粗纤维含量各场差异不显著(P>0.05)；水分含量范围为7.37%～10.21%、粗灰分含量在7.28%～9.15%范围内、钙含量在7.28%～9.15%范围内、总磷含量在0.41%～ 0.73%范围内，上述指标不同牛场间差异达显著水平(P<0.05)。

2.2 牛奶营养成分含量测定

7个牛场牛奶营养成分含量见图1。7个牛场牛奶中营养成分含量差异不显著(P>0.05)。

图1 7个牛场牛奶营养成分含量

2.3 牛精料和牛奶外源基因检测结果

牛精料和牛奶中外源基因检测结果显示，1、2、3、7号牛场精料中含转基因豆粕GTS40-3-2和2704品系外源基因，4、5、6号含转基因豆粕GTS40-3-2品系外源基因。牛奶中均未检测到相应外源基因。

3 讨论

马永喜等研究表明，肉鸡饲喂转基因豆粕日粮，其胸肌和腿肌中检测不到豆粕外源基因。王长康等报道，饲喂转基因豆粕日粮的蛋鸡和番鸭的血液、肌肉和内脏器官、蛋、粪便中没有发现转基因成分。朱元招等研究表明，生长猪饲喂转基因豆粕日粮，其肌肉、肝脏、脾脏和胸腺中未发现外源基因。赵志辉 等用转基因水稻饲喂大鼠也得出了类似结论。Phipps等对饲喂青贮Bt玉米的牛奶进行了检测，所检测奶样中不存在转基因DNA片段。Jennings等研究表明，饲喂转基因豆粕猪肌肉中未发现外源基因存在。一般情况下从食糜中释放出的裸露DNA在消化道内能够迅速降解，但有报道认为动物饲料中的某些DNA可以逃逸动物体内核酸酶的作用而发生转移，怀孕母鼠可把外源DNA通过胎盘转移到胎儿的体细胞中并可整合到染色体组内。本试验结果表明，所调查7个牛场精料中均含有转基因豆粕外源基因，牛奶中均未检测到相应外源基因，且牛奶主要营养成分没有显著差异。

4 小结

本试验研究表明，7个牛场精料常规营养成分有不同程度差异，粗蛋白质、粗纤维含量各场差异不显著(P> 0.05)；水分、粗灰分、钙、总磷含量不同牛场间差异显著(P<0.05)。牛奶中的干物质、粗蛋白质和钙含量7个牛场之间差异不显著(P>0.05)。4个牛场精料中含转基因豆粕GTS40-3-2和2704品系外源基因，3个牛场精料中含转基因豆粕GTS40-3-2品系外源基因。牛奶中均未检测到相应外源基因。

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