之江菌素对人工感染鸡白痢的防治试验

2014-03-18尹小良浙江省绍兴市越城区东湖镇农业综合服务中心312001

山东畜牧兽医 2014年12期

尹小良（浙江省绍兴市越城区东湖镇农业综合服务中心 312001）

张红（浙江省医学科学院浙江杭州）

鸡白痢沙门氏菌病(Pullorum Disease，PD.简称鸡白痢)是由鸡白痢沙门氏杆菌引起，是雏鸡常见的、危害性很大的传染病，发病率和死亡率高，是危害最大的传染病之一。目前，对鸡白痢除检疫净化外，抗菌药物的应用仍然是预防和治疗的重要手段[1]。之江菌素是由浙江省农业科学院研制的一种抗畜禽白痢新抗生素，其产生菌为玫瑰黄链霉菌杭州亚种( Streptomyces roseoflavus subsp.hangzhouensis n.subsp.)[2，3]。急性毒性、慢性毒性等试验表明之江菌素系一低毒安全的抗生素，具有较强的开发前景。本文主要报道其对人工感染鸡白痢的防治效果。

1 材料与方法

1.1 试验菌株鸡白痢沙门氏菌菌株C79-14和之江菌素均由浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所提供。

1.2 试验动物 5日龄健康江村黄鸡。按常规饲养，自由采食及饮水。

1.3 培养基配方 LB培养液：蛋白胨10g、酵母粉5g、水1000ml、pH7.2、分装试管，每管3ml。121℃灭菌30min，备用。LB固体培养基：蛋白胨10g、酵母粉5g、琼脂粉15g、水1000ml、pH7.2。121℃灭菌30min，备用。

1.4 仪器高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、生化培养箱、721可见分光光度计。

1.5 试验方法（1）人工诱发雏鸡白痢模型的建立。用接种针从C79-14斜面中蘸少许菌苔接种于LB培养液，于37℃生化培养箱中培养至菌液浓度OD600分别为0.55、0.65，备用。腹腔注射5日龄健康雏鸡，0.3ml/只，各重复5只。接种后观察各组试验鸡的精神、采食、饮水、粪便、呼吸等临床表现，对死亡鸡进行病例剖检，对内脏器官作细菌分离培养。根据鸡死亡率，确定合适的接种剂量。（2）沙门氏菌的分离鉴定。取病死鸡肝、肠道等少量组织，接种于LB固体培养基平皿，37℃下培养24h，随机挑取10个单菌落，根据菌落形态特征、显微特征、革兰氏染色以及在麦康凯琼脂上的生长特征和生化特性进行鉴定。（3）之江菌素对鸡白痢的防治。在人工鸡白痢模型的基础上研究之江菌素对其防效。挑取5日龄健康雏鸡随机分为3组，每组50只。1组为健康对照组，注射生理盐水0.3ml/只，正常喂养。2、3、4组为感染组，均注射OD600为0.65的C79-14菌液0.3ml/ 只。其中2组为感染对照组，正常喂养；3组为之江菌素组，饲料中添加0.4%之江菌素；4组为痢特灵组，饲料中添加0.02%痢特灵。接种后观察14d，记录各组试验鸡的精神、食欲、饮水、粪便、呼吸等临床症状，称重，并记录发病和死亡的情况。

1.6 防效评价指标死亡：试验中出现鸡白痢病的典型症状并死亡，且经剖检有典型的病变特征者为感染死亡，以此计算各组的死亡率。防治有效：用药后，试验鸡表现为精神状态、食欲等有明显好转，体重较用药前增加者则判定之江菌素防治感染有效。存活数占试验总数的百分率为防治有效率。相对增重率按试验组组与健康对照组增重之比计算，其中健康对照组设为100%。

2 结果

2.1 人工感染鸡白痢模型的建立试验雏鸡接种C79-14后，临床症状主要表现为精神不振、羽毛蓬乱、排白色浆糊状稀便、肛门周围绒毛脏乱，甚至结成粪球堵塞肛门，部分因排粪困难而发出尖叫声，气喘，张口呼吸不久即死亡。解剖死亡鸡，发现肝肿大、充血或有条纹状出血，肺紫红色或暗红色，呈出血性肺炎病变，腹腔内有较多的淡黄色粘液。根据试验结果，OD600为0.65的菌液腹腔注射时，试验鸡死亡率约为50%，确定其为合适的接种剂量和途径。

2.2 沙门氏菌的鉴定 LB培养基表面长出光滑、湿润、隆起、半透明、形态一致的小菌落，大小约1.5 mm。单菌落革兰氏染色阴性，显微镜下菌体呈杆状、两端钝圆。在普通LB液体培养基中均匀混浊生长；在麦康凯琼脂上生长，菌落呈透明；血清学检测均呈鸡白痢沙门氏菌阳性反应，鉴定为沙门氏菌。

2.3 之江菌素的防效健康对照组的鸡在试验观察期间内未见发病，全部存活。之江菌素和痢特灵组与感染对照组相比，临床症状减轻。给药14d后各组鸡的死亡率、有效率及增重率见表1。

由表1 可见0.4%之江菌素对鸡白痢的有效率为94.0%，相对增重率分别为82.1%，均高于0.02%痢特灵。