徐氏肾炎灵胶囊抗大鼠肾炎的研究

徐 海 朱向军 郑 群 朱爱平 王传斌 雷钧涛

（1江苏盐城市第一人民医院财务科，盐城 224006；2江苏盐城市第一人民医院肾内科，盐城 224006；3江苏盐城市第一人民医院科教科，盐城 224006；4吉林医药学院药学系，吉林 132013）

徐氏肾炎灵胶囊系传统方剂，含益母草、牡丹皮、山萸肉、当归、紫草、半边莲、淮山药、玉米须、青蒿、牛膝、红花等药材，临床与实验均表明对急、慢性肾炎、肾病综合征有良好的治疗作用。笔者研制徐氏肾炎灵胶囊进行药效学研究，为新药报批及其临床应用提供试验依据。

1 材料与方法

1.1动物Wi s t a r大鼠90只 （吉林医药学院实验动物中心提供）， 体重180～220g。

1.2药品 徐氏肾炎灵胶囊内容药粉。由盐城市第一人民医院徐海提供，临用前以蒸馏水配制所需浓度。

1.3试剂 Freund完全佐剂 （美国西格玛公司）。肌酐、尿素氮、NO、SOD、MDA检测试剂盒 （南京建成公司）。

1.4 Wi s t a r大鼠肾炎模型复制方法 取wistar大鼠，雌雄各半，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，在无菌条件下剖开腹腔，结扎肾动脉，自结扎处向肾脏插管，剪断肾静脉，经插管用生理盐水反复冲洗肾脏，使之成灰白色，取下肾脏，取肾皮质用电动匀浆器磨成匀浆，每次取皮质匀浆10g，加弗氏完全佐剂20mL，缓缓加入生理盐水40mL置乳钵研匀，使乳化均匀完全。每只实验大鼠腹腔注射上述同种大鼠肾皮质加弗氏完全佐剂液，每次2mL/只，每周注射1次，历时6周。第五周注射结束开始给药。

1.5给药方案 模型成功大鼠随机分为：Wistar肾炎模型组、空白对照组、徐氏肾炎灵胶囊大、中、小剂量组分别相当于含生药2.7g/mL·100g， 1.35g/mL·100g，0.68g/mL·100g， 地塞米松组 （0.55g/mL·100g）， 每组各10只。正常对照组和模型组给予同体积蒸馏水，连续5d， 10d， 15d， 20d。

1.6一般观察指标 分别于给药不同时间测量各组大鼠的尿蛋白、体重、血清及尿中的肌酐和尿素氮，以及血及组织中的SOD和MDA水平，并检测毒性相关生化指标，同时在给药结束后对大鼠肾进行切片做病理分析。1.7数据处理 测量数据以均数或均数±标准差表示，组间比较采用t检验或χ2检验，以P＜0.0 5为有统计学意义。

2 结果

2.12 4 h尿蛋白定量 分别在给药处理后5d，10d，15d，20d测定1次。

表1 24h尿蛋白定量 （×10-2mg）

第34天注射第五针，35天开始给药，给药10天、15天时变化不明显，20天时模型组、高剂量组与中低剂量组、对照组差异明显。

2.2体重 每隔三天称体重一次，具体结果见下表。

表2 各组体重变化比较 （g）

从表中数据看出第4天注射第一针，第11天注射第二针，第19天注射第三针，第25天注射第四针，第34天注射第五针，35天开始给药，40天时注射佐剂的各组体重下降较明显而模型组不明显 (给药组l5g，模型组2g)，41天注射第六针，48天时注射佐剂的各组体重下降较明显 (给药组10g，模型组27g)。之后各组均持续增长到54天，到57天给药组均停止增长，模型组增2g，对照组增10g。地米组体重明显下降，动物状态也不好，说明激素类药物对本模型动物影响很大，第50天死一半，第51天全部处死，经解剖发现内脏全部病变。说明佐剂对动物体重有一定影响。

2.3肌酐

发布会上，昆明供电局党委发布的《“三个导向”助推责任落实，党的建设督导构建“昆供模式”》，解决责任“层层衰减”的案例，是推动党的建设工作责任制有效落实落地，进一步构建完善大监督体系的有力体现。该项目有效地实现党的建设工作重在日常、抓在时常、严在经常，书记项目、党员突击队等载体成为了党的建设融入中心、重点项目攻坚、推动生产经营的有力抓手，不仅带动了一批党的建设业务能手，还起到了助推企业发展的效果。

表3 各组血清及尿中肌酐水平比较 ）

表3 各组血清及尿中肌酐水平比较 ）

血清（μmol/L）尿（mmol/L）组别 对照组 模型组 地塞米松组120.84 103.59 96.24中剂量组 低剂量组128.75 113.53±22.66 ±12.38 ±10.83 ±11.54 ±38.52 ±12.85高剂量组107.24 6.98 9.86 7.75 9.43±6.10 ±2.70 ±1.61 ±2.64 8.98±2.96

对照组与模型组血清肌酐差异显著 (P≤0.05)说明此模型对血清肌酐有影响；中剂量、低剂量组与对照组无差异，说明此2组对改善血清肌酐效果明显；地米组与对照组差异显著 (P≤0.05)，说明地米对改善血清肌酐无效果。模型组、高剂量组、低剂量组尿肌酐升高明显，中剂量组升高不明显。

2.4尿素氮

表4 各组血清及尿中尿素氮水平比较 （，m m o l/L）

表4 各组血清及尿中尿素氮水平比较 （，m m o l/L）

组别 对照组 模型组 地塞米松组11.59 12.38 9.80血清尿 1561.27 1530.55 1170.55 1537.27±630 ±522 ±287 ±608中剂量组 低剂量组13.02 12.63±1.27 ±2.63 ±1.35 ±2.96 ±2.44 ±1.52高剂量组13.40 1836.25±546

地米组血清尿素氮明显降低，与各组均差异显著(P≤0.O5)，说明地塞米松对改善血清尿素氮效果明显。中剂量组尿尿素氮明显降低，与模型组差异显著(P≤0.05)，说明中剂量组对改善尿尿素氮效果明显。

2.5一氧化氮

表5 各组一氧化氮水平比较 （，μm o l/L）

表5 各组一氧化氮水平比较 （，μm o l/L）

组别 对照组 模型组 地塞米松组 高剂量组 中剂量组 低剂量组N0 53.72±10.83 79.50±22.40 92.99±29.36 48.32±11.96 55.33±19.38 78.12±23.87

对照组与模型组差异极显著 (P≤0.1)说明此模型对N0影响极大；各剂量组与对照组比差异显著 (P≤0.05)，高剂量降低，中剂量略有升高，低剂量升高明显。高、中剂量组与模型组比明显降低。

2.6S O D

表6 各组血清及尿中SOD水平比较 （，×1 03U/L）

表6 各组血清及尿中SOD水平比较 （，×1 03U/L）

组别 对照组 模型组 地塞米松组 高剂量组 中剂量组 低剂量组276.83 279.65 281.31 243.73 257.99 249.53血清 ±76.38 ±63.46 ±232.86 ±57.39 ±108.21 ±117.5组织 53.16 107.98 84.16 99.43 115.91 172.40±13.29 ±70.18 ±15.61 ±36.55 ±21.70 ±44.27

模型组、地塞米松组与对照组比略有增高，而三个剂量组均略有下降。各组与对照组比均有增高，中剂量组、低剂量组增高明显。

2.7MD A

表7 各组血清及尿中MDA水平比较 （，n m o l/m l）

表7 各组血清及尿中MDA水平比较 （，n m o l/m l）

组别 对照组 模型组 地塞米松组 高剂量组 中剂量组 低剂量组4.84 5.29 7.42 4.83 4.83 4.76±0.89 ±0.47 ±1.79 ±0.50 ±0.65 ±0.86血清组织 0.32 0.44 0.65 0.61 0.64 0.59±0.10 ±0.29 ±0.09 ±0.36 ±0.17 ±0.78

模型组、地塞米松组MDA明显增高，地塞米松组与各组均差异显著 (P≤0.05)；各剂量组与对照组无差异且略有降低。各组MDA均增高，地塞米松组与各剂量相接近，说明脂质过氧化增多。

2.8骨组织切片

图1各组骨组织切片HE染色结果

HE染色结果显示：造模后与对照组相比，模型组肾小球体积增大，内皮细胞数目增多，近曲小管上皮细胞肿胀，小管管腔狭小，上皮细胞中有大量的蛋白样物质沉积，证实肾脏发生玻璃样变性。治疗后，低剂量组与模型组比较，肾小球体积略缩小，近曲小管上皮细胞内蛋白沉积减少，上皮细胞玻璃样变性程度减轻。而中剂量组，肾小球大小与对照组基本相似，

近曲小管上皮中也未见蛋白沉积，肾小球和肾小管的结构基本恢复到正常状态，证实中剂量组药物能够改善和恢复肾脏结构。与中剂量组相比，高剂量组肾小管上皮细胞中有蛋白沉积，但玻璃样变的程度要轻于模型组。

2.9毒性指标 按所能配的最大浓度配制 (相当于人的10倍量)，一天给药3次，后常规饲养，每三天称重一次。观察14天后全部处死，取血清检测生化指标。

表8 两组体重变化比较 （g）

第七天体重略比第四天降低外，其他均正常。

表9 两组生化指标检测比较

表9 两组生化指标检测比较

注：ALT(丙氨酸氨基转移酶U/L)AST(天冬氨酸氨基转移酶U/L)GGT(谷氨酰转肽酶U/L)CRE(肌苷mmol/L)UN(尿素氮mmol/L)UA(尿酸μmol/L)

检测指标 ALT AST 57.95 139.33 UA 90.5±6.75 ±14.59 ±2.89 ±11.61 ±0.48 ±21.50 GGT 1.83 CRE 76.75 UN 7.58药物组正常组86.33 177.75 2.25 85.00 8.83 92.0±11.49 ±28.88 ±4.5 ±6.22 ±0.67 ±15.90

与正常组比尿酸基本未有变化，肌苷、尿素氮略有降低但未有显著性差异；ALT(丙氨酸氨基转移酶)、AST(天冬氨酸氨基转移酶)、GGT(谷氨酰转肽酶)有降低但差异不显著。

3 讨论

Heymann肾炎的临床过程和病理类型与人类膜性肾病十分接近，作为人类膜性肾病的动物模型得到广泛公认，制备该动物模型方法有主动型Heymann肾炎和被动型Heymann肾炎两种，已经证明，Heymann肾炎发病机制包括多种细胞因子、补体激活、膜攻击复合物形成、炎症细胞以及炎性介质合成增加，引发一系列炎症反应，最终导致肾小球基底膜损伤[1]。本研究采用了主动型Heymann肾炎模型，观察徐氏肾炎灵胶囊不同剂量对模型动物的影响，结果显示，徐氏肾炎灵胶囊各剂量组均可以降低肾炎大鼠尿素氮和尿蛋白。证实徐氏肾炎灵胶囊有对抗Heymann肾炎大鼠的蛋白尿作用。血清肌酐检测中发现对照组与模型组差异显著 (P≤0.05)说明此模型对血清肌酐有影响；中剂量、低剂量组与对照组无差异，说明此2组对改善血清肌酐效果明显；在Heymann肾炎的机制探讨中发现模型组大鼠尿蛋白量增加，各给药组伴有血清肾皮质SOD含量减少，组织SOD含量增多，说明Heymann肾炎大鼠尿蛋白形成可能与抗氧化能力有关。血清、组织MDA含量均增多，说明Heymann肾炎大鼠尿蛋白形成可能与脂质过氧化增多有关。模型组炎症因子NO有明显的升高，徐氏肾炎灵胶囊各剂量组N0含量与模型组比较有显著性差异，说明徐氏肾炎灵胶囊对于Heymann肾炎的治疗机制有炎症因子的表达参与，但具体影响因素不明。

HE染色结果显示：造模后与对照组相比，模型组肾小球体积增大，内皮细胞数目增多，近曲小管上皮细胞肿胀，小管管腔狭小，上皮细胞中有大量的蛋白样物质沉积，证实肾脏发生玻璃样变性。治疗后，低剂量组与模型组比较起来，肾小球体积略缩小，近曲小管上皮细胞内蛋白沉积减少，上皮细胞玻璃样变性程度减轻。而中剂量组，肾小球大小与对照组基本相似，近曲小管上皮中也未见蛋白沉积，肾小球和肾小管的结构基本恢复到正常状态，证实中剂量组药物能够改善和恢复肾脏结构。与中剂量组相比，高剂量组肾小管上皮细胞中有蛋白沉积，但玻璃样变的程度要轻于模型组。

综合以上切片和各种指标的观察，都能看出中剂量药物组对本肾炎模型有很好的治疗作用，低剂量组略有改变，高剂量组改变不明显。

毒性试验通过体重、生活状态观察未见异常；生化指标检测基本正常。

徐氏肾炎灵胶囊中的益母草、半边莲、玉米须，有清热、凉血、利尿、消肿的功效，现代药理研究证明能起到抑菌、抗炎、镇静、镇痛、减少尿中蛋白的析出[2]；牡丹皮、山萸肉、淮山药、青蒿有活血、散瘀、补脾胃、益肺肾，能明显改善血压、止泄、止久咳之功效；当归、牛膝、红花有活血、和血、祛瘀、强补肝肾，对肝肾不足、腰膝酸软、关节酸痛有显著治疗作用，故诸药合用有清利湿热、滋阴补肾、益气活血、消肿止痛等作用[3]。本研究结果表明，徐氏肾炎灵胶囊组的疗效明显优于西药对照组，说明徐氏肾炎灵胶囊具有对抗Heymamn肾炎大鼠蛋白尿作用，并有效降低血清肌苷，尿素氮与肾间质损伤程度，同时改善体重，有效控制复发。本研究为新药开发及其临床应用提供一定药理学依据。

[1]陈灏珠.内科学[M].第4版，北京：人民出版社，2008.

[2]陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，2006.

[3]徐淑云，卞如濂、陈修.药理学实验方法[M].北京：人民卫生出版社，2006.