醋莪术配方颗粒质量标准研究

聂英军，傅超美，傅舒，廖婉，严鑫，甘彦雄

·炮制制剂·

醋莪术配方颗粒质量标准研究

聂英军，傅超美，傅舒，廖婉，严鑫，甘彦雄

目的：建立醋莪术配方颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法对醋莪术配方颗粒进行定性分析，采用高效液相色谱法对醋莪术中的姜黄素进行含量测定。结果：建立的薄层色谱图中可检视出醋莪术清晰的特征斑点；姜黄素在0.017μg～0.17μg范围内呈良好线性关系，回归方程为：Y=1.1595X－0.0123，R=0.9998，平均回收率为97.33%（RSD为1.8%）。结论：本方法操作简便、科学、重现性好，可以有效控制醋莪术配方颗粒质量。

]醋莪术；质量标准；薄层色谱；高效液相色谱；姜黄素

醋莪术配方颗粒为姜科植物蓬莪术(Curcumap -haeocaulisVal.)的醋制品通过提取、分离、浓缩、干燥、成型等工艺环节制得的一种现代制剂[1～4]。单味中药配方颗粒和传统中药饮片相比，具有体积小、便于携带和保存、质量更稳定可控等优点。虽然中药配方颗粒具有明显优势，但研究基础还很薄弱[5～7]。市售醋莪术配方颗粒的成分含量差异较大，本文旨在建立醋莪术有效的质量标准，以期为醋莪术配方颗粒的质量控制奠定基础[8,9]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-10AT高效液相色谱仪（SPD-10AT紫外检测器、LC-10AT色谱泵，江申JS-3030色谱工作站）。

1.2 试药

姜黄素(批号：120420)、莪术二醇（批号：120514）、吉马酮（批号：120228）、莪术醇(批号：120304)、莪术二酮（批号：120611），均购于四川省维克奇生物科技有限公司；水为高纯水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

1.3 药材

醋莪术饮片分别购于四川新荷花饮片有限公司（批号：1300521）、重庆太极集团（批号：1301106）、四川德仁堂饮片有限公司（批号：130614）。药材经成都中医药大学中药标本中心卢先明教授鉴定为姜科植物蓬莪术（Curcumaphaeocaulis Val.）的干燥根茎，符合《中国药典》2010年版一部“莪术”项下有关规定。醋莪术配方颗粒由实验室自制。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 对照品溶液制备 取莪术二酮、莪术醇、吉马酮、莪术二醇对照品，加入无水乙醇制成每1 mL含莪术二酮0.09 mg、莪术醇0.11 mg、吉马酮0.08 mg、莪术二醇0.1 mg的溶液，作为混合对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液制备 取醋莪术配方颗粒0.5 g，加石油醚(30 ℃～60 ℃)10 mL，超声30分钟，离心，滤过，取上层清液挥干，加无水乙醇定容至1 mL，作为供试品溶液。另取醋莪术饮片6 g，以相同方法制备对照药材溶液。

2.1.3 阴性溶液 取糊精适量，加无水乙醇制成每1 mL含糊精0.1 mg的溶液。

2.1.4 薄层色谱试验 按《中华人民共和国药典》2010年版薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯（80:20）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，在紫外光灯(365 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，具有相同颜色斑点，而阴性对照无干扰。结果见图2。

图1 醋莪术饮片薄层色谱鉴别

由本实验对比结果可知：薄层色谱展开斑点分离度较好，Rf值在0.3～0.8之间，阴性对照无干扰。

2.2 姜黄素HPLC含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Dikma Diamonsil C18柱（Dikma公司，5 μm，4.6 mm×250 mm）；检测波长：420 nm；流动相：乙腈-4%冰醋酸溶液(45：55)；流速1 mL．min-1；柱温30 ℃；进样量10 μL。对照品、供试品色谱图见图2、图3。

2.2.2 对照品溶液制备 精密称定姜黄素对照品，置于15 mL容量瓶中，加入甲醇使其溶解，补重稀释至刻度，制成浓度为0.0085 mg．mL-1的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液制备 精密称定醋莪术配方颗粒0.5g（过2号筛），置于具塞三角烧瓶中，加入50 mL甲醇，称重，使用超声处理40 min(40 KHz，250 W)，称重，加入甲醇至刻度，滤过，将滤液转移于蒸发皿之中，重复提取两次，将溶剂挥干，再加入5 mL甲醇溶解残渣，滤过，定容于5 mL容量瓶中。

图2 姜黄素对照品HPLC色谱图

图3 醋莪术配方颗粒HPLC色谱图

2.2.4 线性关系考察 精密吸取浓度0.0085 mg．mL-1的姜黄素对照品溶液2,4,8,10,14,20 μL，使用上述色谱条件进行测定，采集峰面积数值，以峰面积的平均值作为纵坐标，以姜黄素含量作为横坐标，可得标准回归曲线，以进样量X（μg），峰面积数值Y为坐标轴，进行线性回归得回归方程：Y=1.1595X－0.0123，R=0.9998。结果表明：姜黄素在0.017 μg～0.17μg范围内呈良好线性关系。

2.2.5 精密度 精密吸取姜黄素对照品溶液10 μL，连续6次进样，采集峰面积数值，由试验结果可知，姜黄素峰面积的相对标准偏差较小，RSD为0.11%，精密度良好。

2.2.6 稳定性 精密吸取姜黄素对照品溶液、醋莪术配方颗粒供试品溶液，置室温下保存0,2,4,6,8,12,18 h时间进样，每次进样10 μL，采集峰面积数值，由试验结果可知，姜黄素对照品峰面积RSD为1.28%，醋莪术配方颗粒供试品峰面积RSD为0.635%，对照品与供试品在18 h内稳定性均较好。

2.2.7 重复性 取同批次样品6组，按照拟定的含量测定方法进行操作，各进样10 μL。由试验结果可知，姜黄素峰面积RSD为2.06%，重复性良好。

2.2.8 加样回收率考察 精密称取醋莪术配方颗粒6组，每组1 g，每组加入姜黄素对照品0.0450 mg，以“2.2.1”项下含量测定方法进行测定，结果见表1。

表1 加样回收率考察结果（n=6）

由试验结果可知，平均回收率为97.33%，姜黄素峰面积RSD为1.8%，加样回收率较好。

2.2.9 样品测定 精密称定不同批次制得的醋莪术配方颗粒，每批次三份，每份1g，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样10 μL，采集峰面积数值，经计算得姜黄素含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

三个批次配方颗粒中的姜黄素平均含量为0.0479 mg．g-1。

3 讨论

本实验按照《中国药典》2010版一部莪术项下的鉴别方法进行实验，能检视出莪术的特征斑点，但斑点分离度较差，经过调整展开剂类型，使用环己烷-醋酸乙酯（80:20）为展开剂展开后，比较药典方法TLC图谱结果，发现环己烷-醋酸乙酯（80:20）为展开剂的谱图中姜黄素鉴别斑点清晰，展开效果更好，综合评价后，选择其为薄层展开剂。

姜黄素作为醋莪术配方颗粒的评价指标性成分，通过实验结果可知，该方法科学准确，具有较好的重现性，能够很好的控制醋莪术配方颗粒的质量。

以醋莪术配方颗粒中姜黄素含量作为评价指标成分，分别考察了提取方式（超声、回流、索式）、提取溶剂（70%乙醇、水、不同浓度甲醇）、超声时间，超声频率，最终确定加入50 mL甲醇，超声处理40 min(40 KHz，250 W)。通过实验结果可知，该方法科学准确，具有较好的重现性，能够很好的控制醋莪术配方颗粒的质量。

[1] 张廷模.临床中药学[M].北京:中国中医药出版社,2006:567.

[2] 廖婉,傅超美,章津铭,等.醋莪术对气滞血瘀证血液流变学影响的表征及谱效相关性研究[J].中成药,2013,35(2):330.

[3] 廖婉,傅超美,章津铭,等.醋莪术饮片HPLC指纹图谱研究[J].中药材,2012,35(10):1582.

[4] 廖婉,傅超美,章津铭,等.醋莪术饮片质量控制方法的研究[J].华西药学杂志,2012,27(4):447.

[5] 苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民卫生出版社,2000:287,742,890.

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[7] 覃葆,曾春晖,荣玲芝,等.不同炮制方法对广西莪术的质量研究[J].时珍国医国药,2009,20(9):2247.

[8] 王琰,慕邹.姜黄属常用中药的研究进展[J].中国药学杂志,2001,36(2):80.

[9] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草(第8卷) [M].上海:上海科学技术出版社,1999;626.

[10] 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010:257.

（责任编辑：何瑶）

Research on the quality standards of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar

/NIE Ying-jun, FU Chao-mei, FUShu, LIAO Wan, YAN Xin, GAN Yan-xiong// ( Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective: To establish the quality standards of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar. Method: Thin layer chromatography (TLC) was used in qualitative analysis of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar. High performance liquid chromatography (HPLC) method was applied in the content determination of curcumine in dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar. Result: The characteristic spots of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar were clearly detected in the established TLC chromatography. Curcumine had good linear relationship within the concentration range of 0.017μg～0.17μg. The regression equation was: y=1.1595x-0.0123( R =0.9998). The average recovery was 97.33% (RSD was 1.8%). Conclusion: The method is simple, scientifc, and good reproducibility, and can effectively control the quality of dispensing granules of Ezhu prepared with vinegar.

Ezhu prepared with vinegar; quality standards; Thin layer chromatography; High performance liquid chromatography; curcumine

R 283.6

A

1674-926X(2014)02-008-03

四川省科技支撑计划（2013S20123）；四川省中医药管理局科技专项（2012-E-041）；四川省科技创新苗子工程资助项目（20133006）

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

聂英军，硕士在读，主要从事中药新制剂、新技术与新工艺研究 Email:389916897@qq.com

傅舒，助教，主要从事中药新制剂、新技术与新工艺研究 Email:fushu317@126.com

2013-12-01