藏药“俄色”的薄层色谱研究

夏冬梅，李敏，王道清，杨冰月，卢道会

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藏药“俄色”的薄层色谱研究

夏冬梅，李敏，王道清，杨冰月，卢道会

目的：建立藏药“俄色”的薄层色谱鉴别方法。方法：通过对提取试剂及展开系统进行系统的考察，建立以根皮素对照品为对照、以氯仿-甲醇-甲酸(8:2:0.1)为展开系统的薄层色谱鉴别方法。结果：不同批次俄色药材在与对照色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，能够有效的对“俄色”进行鉴别。结论：首次建立了藏药“俄色”的薄层鉴别方法，该方法的Rf值适中，斑点清晰，具有较好的适应性，重现性好，为完善其质量标准奠定了基础。

]俄色；根皮素；薄层色谱

藏药“俄色”，来源于蔷薇科苹果属陇东海棠系植物变叶海棠 Malus toringoides ( Rehd.) Hughes 或花叶海棠Malus transitoria ( Batal.) Schneid 的干燥叶，始载于《晶镜本草》，具有保肝利胆、除腻涤滞、攻坚化积等功效，现代研究表明，“俄色”具有降血脂、降血压、降血糖的功效[5～8]。分布于我国西藏、四川、青海、甘肃等地。金强[9]等人，通过对四川阿坝州苹果属植物野生资源调查，发现变叶海棠和花叶海棠在阿坝州均有分布。2012年全国第四次中药资源普查发现，变叶海棠和花叶海棠在甘孜州资源分布也十分广泛。

在前期，通过对其化学成分分析，分离出根皮素单体化合物，现代药理研究表明，根皮素具有抗癌、保护心血管、抗氧化、抑制骨质疏松等活性[10～14]。因此，本文以根皮素为对照品，对“俄色”进行了系统的薄层色谱研究，以便为该民族药的科学鉴定、质量控制以及合理开发提供依据。

1 实验材料

1.1 材料来源

药材样品均为2011年从四川省甘孜州收集而得，经成都中医药大学中药鉴定教研室李敏教授鉴定为蔷薇科苹果属植物变叶海棠 Malus toringoides (Rehd.) Hughes 和花叶海棠Malus transitoria (Batal.) Schneid的干燥叶 。具体情况见表1。

表1 实验样品来源表

BY-6 2011/07/30 甘孜州炉霍县仁达乡BY-7 2011/08/15 甘孜州炉霍县仁达乡BY-8 2011/08/30 甘孜州炉霍县仁达乡BY-9 2011/09/8 甘孜州炉霍县仁达乡BY-10 2011/09/28 甘孜州炉霍县仁达乡花叶海棠 HY-1 2011/05/15 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡HY-2 2011/05/30 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡HY-3 2011/06/15 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡HY-4 2011/06/30 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡HY-5 2011/07/15 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡HY-6 2011/07/30 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡HY-7 2011/08/15 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡HY-8 2011/08/30 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡HY-9 2011/09/3 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡HY-10 2011/09/28 甘孜州炉霍县格鲁坝子乡

1.2 试药与试剂

根皮素对照品（自制对照品，纯度99.7%），硅胶G(青岛海洋化工厂)，羧甲基纤维素钠（成都市科龙化工试剂厂），其余试剂均为分析纯。

2 试验方法

2.1 提取溶剂及制样方法的考察

①称取变叶海棠叶粉末3 g，加水50 mL，超声提取30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇溶解。

②称取变叶海棠叶粉末3 g，加40%乙醇溶液50 mL，超声提取30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇溶解。

③称取变叶海棠叶粉末3 g，加60%乙醇溶液50 mL，超声提取30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加2mL甲醇溶解。

④称取变叶海棠叶粉末3 g，加80%乙醇溶液50 mL，超声提取30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解。

⑤称取变叶海棠叶粉末3 g，加无水乙醇溶液50 mL，超声提取30 min，过滤，滤液蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解。

⑥称取3 g变叶海棠粉末，加40%乙醇50 mL超声提取1 h，过滤，滤液蒸干后加水10 mL溶解，水液加乙酸乙酯振摇提取两次，每次20 mL，合并乙酸乙酯，蒸干，用2 mL甲醇溶解。

⑦称取3 g变叶海棠粉末，加40%乙醇50 mL超声提取30 min，过滤，滤液蒸干后加水10 mL溶解，石油醚（60～90℃）洗涤两次，每次20 mL，弃去石油醚液，水液加乙酸乙酯振摇萃取两次，每次20 mL，合并乙酸乙酯，蒸干，用2 mL甲醇溶解。

将上述7种溶剂的提取液点于硅胶G薄层板上展开，结果表明，方法②的色谱斑点清晰，斑点多，根皮素的斑点大，且制样方法简单。

2.2 称样量的考察

取变叶海棠叶粉末3、2、1、0.5 g，分别加入40%的乙醇50 mL，超声30 min，滤液蒸干，残渣加2 mL甲醇溶解。

结果表明，称样量0.5 g色谱斑点清晰，颜色适中，分离度最好。

2.3 提取溶剂用量的考察

称取变叶海棠叶粉末0.5 g，加40%乙醇溶液20 mL、30 mL、40 mL、50 mL，进行超声提取，过滤，取续滤液，蒸干加2mL甲醇溶解。

结果表明，溶剂用量为20mL的色谱斑点颜色较浅，效果较差，溶剂用量为30 mL、40 mL、50 mL的色谱斑点清晰，效果较好，且差别不大，故选用40%乙醇30 mL提取。

2.4 展开剂的考察

①乙酸乙酯:丁酮:甲酸:水=5:3:1:1；②氯仿:甲醇:乙酸=8:2:0.1；③ 乙酸乙酯:丁酮:甲醇:水=5:3:1:1；④ 甲苯:乙酸乙酯:丙酮:甲酸:水=2.5:4.5:4.5:0.85:0.6；⑤氯仿:甲醇:甲酸=8:2:0.1；以上5个展开系统展开前须先用展开剂饱和30 min后，上行展开。

结果表明，以氯仿:甲醇:甲酸（8:2:0.1）分离度最好，斑点清晰，Rf值适中。

2.5 点样量的考察

对照品、样品点样量分别为3.5 μl，7 μl、10 μl、15 μl，于硅胶G薄层板上展开，结果表明，对照品、样品的点样量均在7 μl时分离效果好，斑点清晰。

2.6 方法的确定及样品鉴别

取本品粉末0.5 g，加40%乙醇溶液25 mL，超声30 min，滤过，蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取根皮素对照品，加甲醇制成每l mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB)试验，吸取供试品溶液、对照品溶液各7μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-甲酸（8:2:0.1）为展示剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

取变叶海棠和花叶海棠各10批，按上述试验方法，薄层鉴别图见图1、2。结果表明，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的亮蓝色荧光斑点。

图1 不同批次的变叶海棠薄层色谱图

图2 不同批次的花叶海棠薄层色谱图

3 讨论

3.1 目前藏药“俄色”尚没有建立其质量标准，也没有有关薄层色谱鉴别研究的报道，本文从药材质量的控制研究出发，首次建立了藏药“俄色”的薄层色谱鉴别方法，该方法对“俄色”中根皮素的鉴别有较好的适应性，该方法简便，重现性较好，为藏药“俄色”质量标准的建立奠定了良好的基础。

3.2 以上“俄色”各样品薄层色谱中，变叶海棠样品薄层色谱中，BY-6、BY-8、BY-9、 BY-10样品在与对照品色谱相应的位置上，亮蓝色荧光斑点较弱；花叶海棠样品薄层色谱中，HY-1、HY-3、HY-4、HY-10号样品在与对照品色谱相应的位置上，亮蓝色荧光斑点较弱，其余主要色谱斑点的荧光强弱有一定差异，这可能与样品的采收时间、地理位置不同有关。

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[6] 苹果属花楸苹果组植物的新用途[P].中国专利,200810170831. 8,2008-10-17.

[7] 苹果属花楸苹果组植物的新用途[P].中国专利,2008101708 33.7,2008-10-17.

[8] 炉霍县林业开发总公司.一种预防高原反应的胶囊剂的制备方法及用途[P].中国专利,200810166068 .1,2008-10-17.

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（责任编辑: 胡慧玲）

The research of Tibetan medicine "Ese" with TLC

/XIA Dong-mei, LI Min, WANG Dao-qing, YANG Bing-yu, LU Dao-hui//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China )

Objective: To establish TLC identifcation method for Ese. Method: By means of systematic investigation on extraction reagent and the developing solvent, TLC identifcation method with phloretin as reference substance, and chloroformmethanol-formic acid (8:2:0.1) as developing solvent was established. Result: Different batches of “Ese” had fuorescent spots of the same color as phloretin. Conclusion: The method of TLC on Tibetan medicine “Ese” is frstly established. The Rf value is moderate and the spots are clear. The method is adaptable and reproducible, which provides a basic for the quality control of “Ese”.

Ese; phloretin; TLC

R 284

A

1674-926X(2014)02-007-03

全国第四次资源普查(No：2012-H-100)；四川省2013年藏药材质量标准研究

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，四川 成都 611137

夏冬梅(1988-)，女，硕士研究生，研究方向：中药品种、质量与资源研究

Tel:13568832468 Email:674991089@qq.com

李敏（1962-），教授，博士生导师，研究方向：中药品种、质量及资源研究

Tel:13980038316 Email:028limin@163.com

2013-10-31