板蓝根中多糖的分离以及高效液相色谱分析

陆广马

(百色食品药品检验所，广西 百色 533000)

多糖是一类天然高分子化合物，广泛存在于动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中[1]。多糖用作药物始于上个世纪40年代，随着化学和生物学的发展和分离技术的提高，对糖类的研究再次成为人们关注的焦点。板蓝根是我国最常见也是最著名的中药之一，我国学者对其报道较多，主要有抗病毒、抗炎、清除氧自由基、免疫调节等作用[2-3]。当前对糖类的分析方法主要是以色谱技术为基础的方法，另外是非色谱法——酶学方法。尽管酶学方法非常灵敏和具有很高的特异性，但易受到样品中污染物引起的干扰。因此相比较而言，色谱技术在当前得到广范使用[4]。本文运用高效液相色谱法检测板蓝根中的葡萄糖。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料

板蓝根药材采集于江苏省连云港市灌南县板蓝根药材生产基地，粉碎后过40目筛备用。色谱工作站为Metrohm IC-Net、超声波清洗器、隔膜真空泵、旋转蒸发器RE.52A、78-1型磁力加热搅拌器、恒温箱、电炉、磁力搅拌器、恒温水浴锅、真空干燥箱、超纯水系统、电子天平、万能粉碎机。

试剂:葡萄糖标样购于Sigma公司，NaOH购自天津市瑞金特化学品有限公司，80%乙醇、95%乙醇、无水乙醇、乙醚、冰乙酸、丙酮均为重庆川东化工(集团)公司生产。

1.2 板蓝根多糖提取

取一定量的板蓝根粉末，加入五倍量80%乙醇，回流2h，抽滤，残渣烘干。称取脱脂后板蓝根粉末5.0g，用10倍量水超声提取(40℃，100W，30min)，提取后离心取样。

1.3 标准葡萄糖溶液配制

精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖标准品100mg，置入100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度摇匀待用。

1.4 色谱分析

分离柱:METROSEP CARB1(150mm ×4.0mm);淋洗液:6mmol/L NaOH溶液，再生液:200mmol/L NaOH;流速:1.0mL/min，进样量:20μL，柱温:32℃。

1.5 标准曲线绘制

在优化的色谱条件下，分析标准溶液，得到葡萄糖线性回归方程为:Y=41.56X+20.06，r=0.9996，葡萄糖的最低检测限为0.125mg/L。

2 结果

2.1 提取分析结果

超声提取得到粗多糖，得率为95.78%，显示了良好的效果。

2.2 重现性试验

按照上述优化后的色谱条件，用20 mg/L的葡萄糖连续进样5次，得到葡萄糖的峰高测定值的相对标准偏差(RSD)为 5.80%，保留时间的相对标准偏差 RSD为2.10%。

2.3 加标回收率试验

移取2.5mL 1000mg/L葡萄糖储备液，定容。移取板蓝根粗多糖水解液5mL，加入50.0mg/L葡萄糖标准溶液1mL，并用1mol/L乙酸溶液定容至10mL，色谱分析计算加标回收率。结果显示样品的加标回收率为 95.9%～96.3%，均高于 95.5% 。见表 1。

2.4 样品检测实验

将板蓝根水解液用玻塞漏斗减压抽滤，得到的滤液按照上述优化后的色谱条件进行色谱分析，样品在前6min内均有系统峰出现，确定样品中含有葡萄糖，并定量检测出200mg样品中含葡萄糖0.1069mg。

3 讨论

当前板蓝根应用比较广泛，报道也比较多。研究认为板蓝根70%乙醇提取液对二甲苯所致小鼠耳肿胀有明显抑制作用，可降低内毒素刺激小鼠巨噬细胞株引起的相关活性，抑制炎症反应相关基因的表达。板蓝根中含吲哚、嘌呤、嘧啶类成分，因此其可以发挥清热解毒的作用[5-6]。

糖类是自然界中存在最多的有机化合物，也是重要的生物高分子化合物和信息物质。现在人们逐渐将微波、超声波、酶法等应用于药用植物中多糖成分的提取[7]。多糖的提取是根据多糖溶于水或酸、碱、盐溶液而不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂的特点，从不同材料中提取。我们超声提取得到了粗多糖，得率为95.78%，显示了良好的提取效果。同时在检测中我们发现，在冷水浸提条件下，多糖的提取含量低;在沸水浸提条件下，虽然得到粗多糖含量很高，但单糖的含量降低。在温水浸提条件下所得的单糖含量最高，可广泛应用于日常生产研究。

在多糖的检测中，常用方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法、高效毛细管电泳法等。气相色谱法分析需要较烦琐的样品前处理过程，液相色谱法需先通过柱前衍生，毛细管电泳法缺乏直接的检测信号等，离子色谱法费用比较高。高效液相色谱法具有简单、快速、灵敏度高、结果准确等突出优点，对多糖的分析具有一定的参考及实际应用价值[8]。

总之，本文建立了中药中多糖的分离以及高效液相色谱分析方法，可作为中药中多糖提取方法的参考。

[1]徐晗，方建国，刘云海.板蓝根最新研究进展[J].中草药，2003，4(34):10-11.

[2]刘依，韩鲁佳.微波技术在板蓝根多糖提取中的应用[J].中国农业大学学报，2002，7(2):27.

[3]袁强，袁弘.文蛤多糖对小鼠调节血糖和抗应激功能的影响[J].中国现代应用药学杂志，2007，24(2):113-114.

[4]张元琳，顾小红，李德远，等.当归多糖对亚急性辐射损伤小鼠的防护作用研究[J].食品科学，2007，28(2):305-308.

[5]吴琼，郑成，宁正祥，等.碱溶性银耳粗多糖的提取及其清除自由基作用的研究[J].食品科学，2007，28(6):153-155.

[6]刘贝贝，李小定，潭正林，等.菜籽饼粕中多糖的酸提取工艺优化[J].农业工程学报，2006，22(11):213-216.

[7]谢红旗，周春山，杜邵龙，等.酶法提取、超滤分离香菇多糖新工艺研究[J].食品科学，2007，28(4):217-219.

[8]TOMMASO RI CATALDI，MASSIMILIANO ANGELOTTI，GIULIANA BIANCO.Determination of mono-and disaccharides in milk and milk products by high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection[J].Analytica Chimica Acta，2003，485(2):43-49.