环洞庭湖区鸭场禽流感免疫调查及抗体检测情况

黄建龙，王昌建，朱春霞，邓国华，范仲鑫，何世成，王卫国，唐小明，汪洪冰，刘道新

（1.湖南省动物疫病预防控制中心，湖南 长沙410014；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江 哈尔滨150001）

禽流感（AI）是由正黏病毒科流感病毒属A型禽流行性感冒病毒引起的一种禽类传染病，主要在鸡、鸭、鹅、鸽等家禽和野生禽中传播，是严重危害养禽业的重要病毒性疫病[1]。2003年以来，H5N1亚型高致病性禽流感在全球传播，导致大量家禽和野生鸟类死亡。

在我国主要通过广泛疫苗的免疫接种来控制家禽禽流感发生与流行。但部分禽类（特别是水禽）疫苗接种后所诱导的免疫应答水平不高，其原因是什么尚不清楚。开展家禽禽流感血清学监测对真实准确掌握家禽禽流感的免疫水平、查明隐患、切实有效的禽流感免疫防控具有十分重要的意义。洞庭湖区水禽养殖量较大，因此，2011-2013年，我们运用科学的监测方法，通过采样血清样品和检测，掌握洞庭湖区水禽（肉鸭、蛋鸭、种鸭）禽流感免疫抗体水平，并对免疫应答水平不高的原因进行调查（疫苗的质量、种类、免疫程序等），更好地指导养殖户免疫禽流感，使本省水禽免疫达到更高水平，结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 禽流感病毒H5亚型的标准抗原、阴性和阳性血清，均购自哈尔滨维科生物技术开发公司；0.1mol/L、pH7.2 PBS和l%鸭红细胞悬液为自制。

1.2 方法

1.2.1 目标群 目标群为在洞庭湖区周围的县市水禽存栏量为200羽以上的养殖场（户）。

1.2.2 抽样方法 采用多级抽样的方法，通过WinEpiscope2.0软件中的Samples-Estimate Percentage计算（随机抽样；置信水平为90%，可接受误差为10%，预期场群间免疫合格率为80%），我们每次需要抽取44个养鸭场（群）。根据洞庭湖在湖南分布的特点，分为东洞庭湖、南洞庭湖和西洞庭湖，每次釆靠近东洞庭湖、南洞庭湖和西洞庭湖各1个县，这样每个县每次需要采集15个场。然后估计鸭子个体免疫抗体合格率为90%，可接受误差为15%，置信水平为90%，通过WinEpiscope2.0软件计算，需在每个场采11只鸭子的血清进行禽流感H5免疫抗体的检测。

1.2.3 血清检测方法 血凝抑制试验（HI），试验严格按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T18936-2003）的规定操作。

1.2.4 判定标准 免疫合格个体：按照《高致病性禽流感诊断技术》国家标准（GB/T 18936-2003），通过血凝抑制试验（HI）检测，抗体效价≥24。免疫合格群体：免疫合格个体数量占群体总数的70%（含）以上。

1.2.5 统计分析 应用Microsoft Excel软件进行统计分析。

2 结果

2.1 鸭场禽流感H5抗体检测情况 2011年11月、2012年3月、11月和2013年6月，先后4次对洞庭湖区的鸭场进行禽流感监测，在195个鸭场采了鸭血清1 948份，用血凝和血凝抑制试验检测，有150个场禽流感免疫抗体合格，群体合格率为76.92%，有1 515份血清禽流感H5抗体合格，个体合格率为77.77%，见表1。

2.2 鸭场养殖情况调查 对洞庭湖区的水禽养殖情况，包括养殖结构、养殖种类、饲养水平、禽流感等疫苗免疫情况、生物安全措施等情况进行调查，调查发现，洞庭湖区以养蛋鸭为主，鸭场混养情况比较严重，有鸡、鸭混养，有鸡、鸭、鹅混养，有鸡、鸭、猪混养，有鸭、其他动物（野鸟）混养，并且很多的养殖户对鸭场的消毒意识比较淡薄，基本上都进行禽流感免疫，有部分场出现免疫副反应，见表2。

表1 鸭场禽流感H5抗体检测

表2 环洞庭湖地区鸭场养殖情况调查

3 讨论与分析

3.1 2011年11月、2012年3月、11月和2013年6月，这4次所采的鸭血清禽流感H5抗体个体合格率分别为90.7%、59.6%、94.0%和60.86%，抗体水平差异显著，经初步分析，这与根据洞庭湖区鸭子的饲养特点和鸭子的免疫程序有关。调查显示：养鸭户一般在8～9月份购进鸭苗进行饲养，禽流感疫苗一般是在9～10月份开始注射，到11月时鸭的禽流感抗体水平较高。一般养殖户在蛋鸭60日龄左右对其进行第1次免疫，然后在产蛋前进行第2次免疫，在我们所釆的蛋鸭场（户），为了不影响蛋鸭的产蛋，有的在产蛋半年以后都不进行再一次的加强免疫，这就存在很长时间的免疫空白期。有研究表明，经过禽流感油乳疫苗4次以上免疫接种的成年水禽,其有效抗体水平维持时间也就达3～5个月左右[2]。因此，到了3月份如果不进行加强免疫抗体水平就很低。其实大部分水禽对禽流感疫苗的免疫应答较差，经常出现首免后大群中20%左右的水禽无应答，15%左右的抗体水平在23以下，而二免后才产生较好的抗体水平，并且首免和二免的时间间隔不能太长，建议在首免后10周的时间内进行二次免疫，这样就可使鸭获得一个较长的免疫保护期[3]。有研究显示：在种鹅产蛋的1～2 h后，对其进行禽流感免疫，可最大限度地减小对当天的产蛋影响和对第2天的蛋在其体内的形成[4]。因此，可鉴见用于鸭子在产蛋期的禽流感免疫。

3.2 我们在调查中发现，洞庭湖区鸭场混养情况比较严重，有鸡、鸭混养，有鸡、鸭、鹅混养，有鸡、鸭、猪混养，有鸭、其他动物（野鸟）混养。并且我们对其消毒情况调查显示，很多的养殖户对鸭场的消毒意识比较淡薄。我们在鸭场鸭拭子和环境拭子中都检测到有禽流感病毒，隐形带毒的鸭子肠道内AIV含量特别高，并在粪便中大量排出，这种混养方式和消毒状况很容易导致病毒的扩散，有可能使该地区的候鸟或留鸟感染禽流感病毒，从而加速病毒的重组和变异。

[1] 甘孟侯.禽流感[M].2版.北京：中国农业出版社，2002.

[2] 张新民，郇秀荣，陈勇.水禽禽流感防制的误区及对策[J].家禽科学，2008.9（30）：36．

[3]陈建红，张济培，刘佑明，等.水禽禽流感免疫防控关键技术与措施之二—水禽禽流感免疫监测应注意的问题；中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集[C].北京：中国畜牧兽医学会禽病学分会编，2008.

[4]黄开华，柏庆荣，陈慧.扬州鹅种鹅场H5亚型禽流感免疫效果监测评估[J].水禽世界，2012，6：32-34.