脂质体降低尼美舒利肝脏毒性的初步研究

刘 聪，陈新梅，袁玉芳

（山东中医药大学药学院，山东济南250355）

脂质体降低尼美舒利肝脏毒性的初步研究

刘 聪，陈新梅，袁玉芳

（山东中医药大学药学院，山东济南250355）

目的考察尼美舒利脂质体对肝脏的影响作用。方法小鼠随机分为生理盐水对照组、尼美舒利溶液组及尼美舒利脂质体组，各组分别灌胃相应药物，21 d后处死并检测小鼠肝脏中ALT和AST活性，同时观察肝组织病理变化。结果NIM溶液组小鼠与对照组小鼠相比，谷草转氨酶和谷丙转氨酶均明显升高，分别为（250.11± 31.64），（234.01±29.59），P＜0.01；脂质体组小鼠与溶液组相比，谷草转氨酶和谷丙转氨酶均降低，分别为（207.33±25.77），（198.44±24.70），P＜0.05；小鼠肝脏病理切片显示脂质体组小鼠肝损伤程度明显低于溶液组小鼠。结论脂质体能显著降低尼美舒利的肝脏毒性。

尼美舒利；脂质体；肝脏保护

尼美舒利（nimesulide，NIM）是一种新型的非甾体类抗炎药，因其具有显著的抗炎、镇痛和解热作用而在世界各国内均有应用。但尼美舒利口服血药浓度波动较大、半衰期较短（t1／2＝3.3 h），需要频繁服药，并且由于其肝损伤作用限制了使用［1～3］。本课题的研究以降低NIM的肝毒性及减少其服药次数为目的将NIM制成脂质体［4］。脂质体系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体，具靶向性、低毒性、缓释性等特点，本研究考察了NIM脂质体对肝脏的影响，以期提高NIM临床用药的安全性。

1 材料

1.1 仪器 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；UV－3010紫外分光光度计（日本岛津）；JA－2003型电子天平（上海天平仪器厂）；XSP－2C光学显微镜（上海长方光学仪器有限公司）；KQ－250E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药 ALT试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：C009－1130915）；AST试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：C010－1130911）；总蛋白测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：WO11131009）；尼美舒利原料药（武汉大华伟业医药化工有限公司，批号：XH201301248002，纯度99%）；蛋黄卵磷脂（上海太伟药业有限公司）；胆固醇（南京奥多福尼生物科技有限公司，进口分装）。

1.3 动物 KM系清洁级小鼠共48只，体重26～32 g，雌雄各半。由山东中医药大学实验动物中心提供，证书编号：SCXK（鲁）2013－0003。

2 方法与结果

2.1.1 药物制备 将尼美舒利原料药溶于蒸馏水中，制成浓度为2 mg·mL－1的溶液备用；薄膜分散法制备NIM脂质体［4］，NIM含量为2 mg·mL－1。所有灌胃药物现用现制。

2.1.2 动物分组 试验动物雌雄各半，随机分为生理盐水对照组、NIM溶液组及NIM脂质体组，小鼠饲养于22℃、60%相对湿度的环境中，自由进食和饮水，一周后开始试验。

2.1.3 试验数据的测定 小鼠每天灌胃两次，每次0.4 mL。小鼠连续灌胃21 d后禁食12 h，脊柱脱臼处死，小鼠解剖后取肝脏称重，计算肝指数（肝指数＝肝脏重量／小鼠体重）；肝脏分两部分，一部分用来测定肝脏中的谷草转氨酶（Aspartate transaminase，AST）和谷丙转氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）的含量，另一部分肝脏作病理切片。试验数据以±s表示，计量资料用统计分析软件SPSS 19.0进行单因素方差分析，P＜0.05为差异具统计学意义，结果见表1。

表1 小鼠肝指数及肝脏中ALT、AST含量

由表1可见，对于肝指数，溶液组和脂质体组与对照组之间均无显著性差异，即尼美舒利脂质体与尼美舒利溶液对小鼠的肝指数均无明显影响。而对于肝脏中的ALT和AST含量，脂质体组和溶液组分别与正常组比较，具有极显著性差异；脂质体组与溶液组进行比较，数据亦具有统计学意义。即尼美舒利脂质体与尼美舒利溶液相比，能显著减少小鼠肝脏内AST和ALT的含量。

2.1.4 肝脏病理切片 小鼠肝脏病理切片后HE染色，镜下观察病理改变，结果见图1。生理盐水对照组小鼠肝小叶结构清晰，肝索排列规则，肝细胞未见明显异常；尼美舒利溶液组中肝脏结构紊乱，小叶间界限不清，偶有小灶性炎细胞浸润并有大片肝组织损伤，其中以空泡变性为主，受损面积超过一半；尼美舒利脂质体组细胞变形明显减少，且几乎未见有炎细胞出现。脂质体组和溶液组与对照组比较均有明显差异。

图1 各组小鼠肝脏病理切片结果（HE，×200）

3 讨论

本研究结果表明，尼美舒利所致急性肝损伤模型中小鼠肝组织内，ALT和AST活性明显升高。肝细胞明显变性坏死，表明尼美舒利引起小鼠严重的急性肝损伤。尼美舒利脂质体组小鼠与尼美舒利溶液组小鼠相比其肝酶（ALT、AST）活性明显偏低。而通过对小鼠肝脏的大体观察、组织学观察及肝组织的分级评分可以看出，在尼美舒利脂质体组中，肝脏大体病变及肝细胞变性、坏死及炎症浸润等病变明显偏轻，进一步证明了尼美舒利脂质体与尼美舒利溶液相比，尼美舒利脂质体对小鼠肝脏具有预防保护作用。这些结果为尼美舒利制备成脂质体化提供了重要的理论根据。

脂质体降低NIM肝毒性的机理可能是脂质体具囊泡结构，包裹NIM分子，使其缓慢释药，从而减少了瞬时NIM浓度过大对肝脏的损伤；另一方面，因为脂质体囊壳中含较多磷脂双分子层，而被囊壳包裹的NIM分子会迅速分布至脂肪组织中，从而延长NIM分子在肝脏内代谢的时间，因此而降低NIM对于肝脏的损伤。这些推测还需进一步的试验验证。

［1］梁玉华，刘劲.19例尼美舒利所致肝脏损害的调查分析［J］.海南医学，2011，22（19）：34－35.

［2］韩松瑛，刘树森，玄延花，等.尼美舒利引起严重肝损伤致死尸检1例［J］.临床与实验病理学杂志，2008，24（4）：508－509.

［3］傅明健，杨正兵，向丹沙，等.尼美舒利致药物性肝炎1例［J］.职业卫生与病伤，2002，17（4）：299.

［4］张娜娜，陈新梅，战旗，等.尼美舒利脂质体的制备及质量评价初步研究［J］.药学研究，2013，32（11）：651－652，659.

The prelim inary inquiry of liposomes reduce nimesulide liver toxicity

LIU Cong，CHEN Xin-mei，YUAN Yu-fang
（College of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China）

ObjectiveTo explore the influence of nimesulide liposomes to liver.MethodsMethods of test animals were randomly divided into control group，nimesulide solution group and nimesulide liposome group.Each group were orally administered drugs accordingly，21 d after testing animalswere sacrificed and liver tissue ALT and AST activity observed pathological changes in Liver tissue.ResultsThe nimesutide solution group ofmicewas compared with the control group ofmice whose serum aspartate，alanine aminotransferase were significantly increased，respectively（250.11±31.64），（234.01± 29.59），P＜0.01；Mice with liposome and solution mice compared to their aspartate transaminase，alanine aminotransferase were low，respectively（207.33±25.77），（198.44±24.70），P＜0.05；Microscopic observation ofmouse liver biopsy，liver damage liposome group ofmice was significantly lower extent.ConclusionLiposomes reduced liver toxicity nimesulide.

Nimesulide；Liposomes；Liver protection

R965

：A

2095－5375（2014）07－0382－003

山东中医药大学2014年SRT项目（项目编号：2014144）。本项目于山东中医药大学大学生创新创业训练平台完成

刘聪，男，研究方向：中药学，E－mail：DD_liucong＠126.com

陈新梅，女，博士研究生，副教授，研究方向：药剂学的教学与科研，Tel：13065016189，E－mail：xinmeichen＠126.com