顶空气相色谱法测定达托霉素中有机溶剂残留量

刘世娟，郝贵周，徐 健

（鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂276006）

顶空气相色谱法测定达托霉素中有机溶剂残留量

刘世娟，郝贵周，徐 健

（鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂276006）

目的建立顶空气相色谱法测定达托霉素中有机溶剂乙醇、乙腈含量的方法。方法以DB－WAX毛细管柱为分离柱，采用程序升温，检测器为FID。结果线性关系良好，方法精密度、重复性均符合要求。结论该方法可用于达托霉素原料中残留溶剂乙醇和乙腈的含量测定。

顶空气相色谱法；达托霉素；溶剂残留量；测定

达托霉素由Lilly公司研发，从玫瑰孢链霉菌发酵液中提取得到的一个环脂肽类抗生素。它不仅具有新颖的化学结构，而且其作用机制特殊：达托霉素可扰乱细胞膜对氨基酸的转运，从而阻碍细菌细胞壁肽聚糖的生物合成，改变细胞质膜的性质；另外，它还能通过破坏细菌的细胞膜，使其内容物外泄而达到杀灭细菌的目的。达托霉素除了能作用于大多数临床相关革兰氏阳性菌外，更重要的是它在体外对已呈现甲氧西林（methicillin）、万古霉素和利奈唑烷等耐药性质的分离菌株具有强力活性［1］。在生产过程中会用到乙醇和乙腈，为控制药品质量，需要对其残留溶剂进行测定和控制。按照《中国药典》2010年版［2］中对残留溶剂的要求，乙醇含量不得过0.5%，乙腈含量不得过0.041%。笔者在本试验中建立了顶空毛细管气相色谱法［3，4］，测定乙醇和乙腈在达托霉素中的残留量，方法灵敏、准确。

1 仪器与试药

Agilent7890A型气相色谱仪，FID检测器，化学工作站和CTC Analytics型顶空进样器，DB－WAX毛细管色谱柱。达托霉素原料（山东新时代药业有限公司，批号：120901、120902、121001）。乙醇与乙腈为色谱纯，N，N－二甲基甲酰胺为色谱纯。

2 方法

2.1 供试品溶液及对照品溶液的配制 精密称取本品约0.5 g，置20 mL顶空瓶中，精密加N，N－二甲基甲酰胺5mL使溶解，密封，作为供试品溶液；分别精密称取乙醇499.9 mg、乙腈40.6 mg，置同一100 mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。精密量取对照品储备液5 mL，置50 mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2 色谱条件 顶空进样条件：顶空平衡温度85℃，平衡时间30 min，采样针温度90℃。

气相色谱条件：DB－WAX毛细管柱（30 m×0.53 mm，1μm），进样口温度：200℃，检测器温度：250℃；柱温：40℃，保持14 min，以40℃·min－1升温至200℃，保持7 min。载气为氮气；柱流量：3 mL·min－1，分流比：1∶1；进样量：1 mL。两个主峰的理论板数及分离度均符合《中国药典》2010年版的有关规定，结果见如图1。

图1 GC色谱图

2.3 线性关系考察 分别精密量取“2.1”项下的对照品储备液3、4、5、6、7 mL，分别置50 mL量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，得系列浓度溶液。分别精密量取5 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，按“2.2”项下色谱条件测定。分别以浓度C（mg·mL－1）为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归，两组分在其浓度范围内线性关系良好，结果见表1。

2.4 精密度试验 取对照品溶液5 mL，置20 mL顶空瓶中，按“2.2”项下色谱条件测定，连续进样6次，乙醇与乙腈峰面积的RSD分别为1.22%、2.96%。

2.5 检测限试验 将对照品溶液浓度逐级降低后，依法测定，直至信噪比接近3∶1，计算最低检测浓度，结果见表1。

表1 两组分回归方程，线性范围（n＝5），最低检测浓度

2.6 回收率试验 取已知溶剂残留量的达托霉素（批号：120901）约0.5 g，精密称定，置20 mL顶空瓶中，共9份，按照各种溶剂残留限度的80%、100%、120%3个水平对9份样品进行加标，即加入0.4、0.5和0.6 mL对照品储备液，并加N，N－二甲基甲酰胺使成5 mL，每个水平重复3次，按“2.2”项下的色谱条件进行测定，计算乙醇的平均回收率为98.3%，乙腈的平均回收率为105.6%，RSD分别为1.49%和3.32%。

2.7 样品测定 分别量取对照品溶液与供试品溶液各5 mL，置于20 mL顶空瓶中，按“2.2”项下色谱条件测定。记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中各溶剂的残留量，结果3批样品（批号：120901、120902、121001）的乙醇浓度分别为0.06%、0.05%和0.08%，乙腈均未检出。

3 讨论

使用顶空进样法，考察了顶空平衡温度分别为80℃、85℃和90℃，平衡时间分别为15 min、30 min和45 min时各成分的出峰情况，结果见表2，结果表明顶空温度85℃，顶空平衡时间30 min时效果理想；比较了DB－624毛细管柱和DB－WAX毛细管柱，DB－WAX毛细管柱峰形好并且理论板数高，因此选用DB－WAX毛细管柱，结果见图2。通过对3批达托霉素原料中溶剂残留量的测定，结果均符合《中国药典》2010年版要求。

表2 顶空温度与时间选择试验结果

图2 DB－624色谱柱对照品溶液GC色谱图

［1］Debono M，Abbott BJ，Molloy RM，et al.Enzymatic and chemical modifications of lipopeptide antibiotic A21978C：the synthesis and evaluation of daptomycin（LY146032）［J］.JAntibiot（Tokyo），1988，41（8）：1093－1105.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录ⅧP.

［3］任英，刘延凤.顶空气相色谱法测定吡非尼酮中有机溶剂残留量［J］.药学研究，2013，32（5）：271－272.

［4］许国旺.现代实用气相色谱法［M］.北京：化学工业出版社，2004：25－42.

Determination of residual organic solvents in daptomycin by headspace gas chromatography

LIU Shi-juan，HAO Gui-zhou，XU Jian
（Lunan Pharmaceutical Group Co.，Ltd.，Linyi276006，China）

ObjectiveTo establish amethod for the determination of residualethanol and acetonitrile in daptomycin by headspace gas chromatography.MethodsThe DB－WAX capillary column was adopted，temperature programming and FID detector was used.ResultsThe two compositions had good linear relationship and the precision and reproducibility of themethod were in accord with the requests.ConclusionThismethod could be used to determine residual ethanol and acetonitrile in daptomycin.

Headspace gas chromatography；Daptomycin；Residual solvents；Determination

R927.11

：A

2095－5375（2014）07－0389－003

刘世娟，女，研究方向：药物分析，E－mail：13666398795＠163.com