HPLC法测定依诺沙星胶囊的溶出度

蔡 群，孔令洋，孙巧巧

（1.济宁市第一人民医院，山东济宁272100；2.济宁市药品检验所，山东济宁272100）

HPLC法测定依诺沙星胶囊的溶出度

蔡 群1，孔令洋2，孙巧巧2

（1.济宁市第一人民医院，山东济宁272100；2.济宁市药品检验所，山东济宁272100）

目的建立依诺沙星胶囊的溶出度测定方法。方法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.025 mol·L－1磷酸溶液（用三乙胺调节pH至3.0）－甲醇－乙腈（80∶10∶10）为流动相，检测波长为269 nm；分别采用HPLC法和药典规定的紫外对照品对照法测定依诺沙星胶囊的溶出度。结果依诺沙星在5～200μg·mL－1范围内线性良好（r＝0.999 9，n＝6），回收率为100.6%，RSD＝0.6%。结论本方法准确、灵敏、重现性好、可行。

溶出度；依诺沙星胶囊；紫外分光光度法；高效液相色谱法

依诺沙星是第三代的氟喹诺酮类抗生素，具有广谱、强效杀菌作用，与其他抗菌药物间并无明显交叉耐药，对多重耐药的肠杆菌科仍高度敏感。原标准收载的溶出度测定方法为紫外法测定，其缺点是专一性不强，灵敏度和准确度不高。测定的结果明显偏高，很可能是辅料及胶囊壳引起的干扰，而用高效液相色谱法可以很好的避免这种现象。

1 仪器和试剂

Agilent 1200 series高效液相色谱仪，TU－1800SPC紫外分光光度计，D－800LS溶出度仪，电子分析天平（BT25S d＝0.01 mg北京赛多利斯仪器系统有限公司），500型超声清洗机（山东济宁亨达超声设备有限公司）；甲醇（色谱纯），纯化水，乙腈（色谱纯），85%磷酸溶液，依诺沙星对照品（91.1%，中国药品生物制品检定所），3批依诺沙星胶囊（0.1 g，兖州生宝制药有限公司）。

2 方法

2.1 色谱条件 照依诺沙星含量测定项下色谱方法［1］：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.025 mol／L磷酸溶液（用三乙胺调节pH至3.0）－甲醇－乙腈（80∶10∶10）为流动相，流速：1 mL·min－1，柱温：30℃，检测波长为269 nm。

2.2 溶出方法 照溶出度测定法［1］（篮法），以稀盐酸溶液（稀盐酸24 mL加水至1 000 mL）900 mL为溶出介质，转速为100 rmp，温度设定37℃，依法操作，经30 min取样。

2.3 线性关系考察 精密称取依诺沙星对照品0.021 67 g置100 mL容量瓶中，加流动相溶解至刻度，摇匀，作为储备液。分别取2.5、5、10、25、50 mL置100mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成溶液。于上述6份溶液中分别取20μL进样测定。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程A＝150.724 1C－147.668，r＝0.999 9（n＝6）。结果表明，依诺沙星在5～200μg·mL－1浓度范围内，其浓度与吸收度呈现良好的线性关系。

2.4 辅料干扰试验 取约相当于一粒胶囊的辅料成分，置100 mL容量瓶中，加适量溶出介质，超声使其溶解，再加至刻度，摇匀，滤过（0.45μm微孔滤膜），取续滤液5 mL至50 mL容量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，高效液相下进样。在15 min内无明显色谱峰。

2.5 精密度试验 取“2.3”项下储备液，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成溶液，作为对照品溶液。重复进样5次，RSD＝0.12%。

2.6 稳定性试验 取“2.3”项下的50μg·mL－1对照品溶液，分别在1、2、4、6、8 h进行测定，RSD＝0.5%，结果表明，依诺沙星溶液在8 h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一批样品6份，加溶出介质溶解并稀释至50μg·ml－1的供试品溶液，分别进样测定，记录色谱图计算含量，结果RSD＝0.4%，表明该方法重复性良好。

2.8 回收率试验 按依诺沙星胶囊的80%、100%、120%分别精密称取依诺沙星对照品适量，与相应辅料混合均匀。照溶出度测定法（篮法）进行测定，30min后取样，滤过，取续滤液；另精密称取依诺沙星对照品适量，制成约50μg·mL－1的对照品溶液。外标法测定，计算回收率（见表1）。实验结果表明，本方法的回收率较好，平均回收率为100.6%（RSD＝0.6%，n＝9）。

表1 回收率试验测定结果

2.9 供试品溶出度测定 紫外分光光度法：取过滤后的溶出液适量，用溶出介质定量稀释成每1 mL中约含依诺沙星4μg的溶液，在268 nm的波长处测定吸光度；另取依诺沙星对照品适量，加溶出介质定量稀释成每1 mL中约含依诺沙星4μg的溶液，同法测定，计算每粒胶囊的溶出量。

高效液相色谱法：取过滤后的溶出液适量，用流动相稀释成50μg·mL－1溶液，照含量测定法进行测定（见表2、图1）。

图1 供试品溶液色谱图

表2 供试品测定结果

3 结果和讨论

3.1 结果 溶出度测定方法比较（见表3）。

表3 溶出度测定方法比较

3.2 讨论 原标准收载的溶出度测定方法简便易行，但其缺点是专一性不强，灵敏度和准确度不高［2］。如上表3所示，紫外法测定的结果明显偏高，很可能是辅料及胶囊壳引起的干扰，而用高效液相色谱法可以很好的避免这种现象。胶囊壳质量的不同，紫外吸收强度也各不相同，故UV法测定时常常有干扰。一般采用取6粒空白胶囊壳测定，以排除干扰（《中国药典》2010年版）。但笔者认为，严格按照样品测定的步骤，取6粒空白胶囊壳进行试验，工作量大，且由于干扰不一，会给测定结果带来误差。故仍建议采用HPLC法，而无需再进行胶囊壳的空白试验。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［2］孔令洋，孙巧巧，薛雯.HPLC法测定头孢羟氨苄胶囊的溶出度［J］.药学研究，2013，32（9）：515－516.

Determ ination of the dissolution of Enoxacin Capsules by HPLC

CAIQun1，KONG Ling-yang2，SUN Qiao-qiao2
（1.Jining First People′s Hospital，Jining 272100，China；2.Jining Institute for Drug Control，Jining 272100，China）

ObjectiveTo establish the assay method of dissolution test on Enoxacin Capsules.M ethodsA Phenomenex C18Column was used with themobile phase of0.025mol·L－1phosphoric acid（pH was adjusted to 3 with triethylamine）－methanol－acetonitrile（80∶10∶10）.The determination wavelength was 269 nm.The method of HPLC and the method of UV was compared.ResultsThe Enoxacin Capsules was linear within the concentration range of 5～200μg· mL－1（r＝0.999 9，n＝6）.The average recovery was100.6%and RSD was0.6%.ConclusionThe result shows that the method was accurat，reliable，recurrentwell，and can be used for the quality control.

Dissolution；Enoxacin Capsules；UV；HPLC

R927.11

A

2095－5375（2014）02－0096－003

蔡群，女，研究方向：医学检验，E－mail：konglingyang123＠eyou.com