两种定量测定人血白蛋白中辛酸钠含量方法的比较

李荣贞，赵 军，李庆英，王 彬，王 霞，李 伟

（1.山东生物制品研究所，山东泰安271000；2.山东泰邦生物制品有限公司，山东泰安271000）

两种定量测定人血白蛋白中辛酸钠含量方法的比较

李荣贞1，赵 军1，李庆英1，王 彬2，王 霞2，李 伟2

（1.山东生物制品研究所，山东泰安271000；2.山东泰邦生物制品有限公司，山东泰安271000）

目的建立一种准确性高，简便快速的方法，对人血白蛋白中间品的辛酸钠含量进行质量控制；方法通过采用气相法和乙醚萃取法，分析比较T公司20批制品。结果乙醚萃取法与气相法相比，回收率均在97%～101%的范围内，相对误差小于2%，萃取法与气相法差异无统计学意义（P＞0.05）。结论此法简便快速，结果可靠，可应用于中间产品辛酸钠含量的测定。

辛酸钠含量；乙醚萃取法；气相法

长期以来，辛酸钠广泛作为血液制品的保护剂［1，2］，用以增加白蛋白的稳定性，已被证明是安全可靠的，现行2010年版《中国药典》（三部）人血白蛋白中辛酸钠的定量测定方法为气相色谱法，成品质量指标要求含量为0.140～0.180 mmol·g－1蛋白质［2］，由于气相色谱法样品预处理时间长，针对血液制品中间产品的质量控制，无法及时反映生产状态，为车间提供即时的实验数据。因此为更好的控制中间品质量，服务于生产，确保成品质量，我们对用乙醚萃取法检测人血白蛋白制品中辛酸钠含量的可靠性进行验证，并与气相法检测的结果进行比较，证明乙醚萃取法结果的可靠性。

1 材料

1.1 待检样品 T公司人血白蛋白制品，201301～201320连续20批次。

1.2 主要试剂 1 mol·L－1盐酸；乙醚（市售分析纯）；正丁醇（市售分析纯）；混合溶解液（无水乙醇：吐温－80∶水＝5∶0.5∶94.5）；1%酚酞指示剂；0.01 mol·L－1氢氧化钠滴定液。

1.3 仪器 分液漏斗、岛津GC－14C气相色谱仪。

2 方法

2.1 乙醚萃取法 取纯化水19 mL，置250 mL分液漏斗中，依次准确加入20%供试品溶液1 mL，1 mol·L－1盐酸0.2 mL，摇匀后加入乙醚15 mL及正丁醇1 mL，振摇约15 s，静置分层，弃去水层，醚层用水洗两次，每次15 mL，将醚层转入100 mL三角瓶中，用混合溶解液15 mL充分洗涤分液漏斗后一并转入三角烧瓶中，振摇混匀后加入1%酚酞指示剂2～3滴，用氢氧化钠滴定液（0.01 mol·L－1）滴定至淡粉红色即为终点，同时用纯化水作空白，并配制标准辛酸钠水溶液作回收试验，回收率在97%～101%范围内。

V：样品消耗氢氧化钠滴定液（0.01 mol·L－1）量，mL；V0：空白消耗氢氧化钠滴定液（0.01 mol·L－1）量，mL；M：氢氧化钠滴定液摩尔浓度，mol·L－1；c：蛋白浓度，%；V1：供试品取样量，mL。

2.2 气相色谱法 参照2010年版《中国药典》（三部）附录ⅥK辛酸钠测定法。

3 结果与讨论

用两种方法对20批人血白蛋白制品进行了辛酸钠含量的测定（结果见表1），乙醚萃取法所测定的20批人血白蛋白的回收率均在97%～101%的范围内，统计学结果表明：两种方法最大相对偏差均不超过2%（气相色谱法最大允许误差为2%），检测结果无显著差异（P＜0.05）。由此可见乙醚萃取法与现行的2010年版《中国药典》（三部）附录ⅥK GC法测定辛酸钠含量结果具有高度的一致性。

表1 两种方法的实验结果对比

4 结论

辛酸钠是人血白蛋白生产过程中加入的稳定剂，现行2010年版《中国药典》（三部）规定用GC法检测人白成品，辛酸钠含量每1 g蛋白质中应为0.140～0.180 mmol，由于质量指标要求范围较窄，血液制品生产企业为确保成品辛酸钠含量符合规定，在制品分装前对半成品进行辛酸钠含量测定，而现行《中国药典》中规定的方法，样品处理时间过长，不能即时反映结果。通过实验分析，乙醚萃取法准确性与可靠性良好，简便快速，可用于血液制品人血白蛋白中间产品辛酸钠含量的质量控制，确保成品辛酸钠含量符合《中国药典》的规定。

在检测过程中应注意下列几点：①随着混合溶解液放置时间延长，空白耗碱量会逐渐增高，混合溶解液使用期限不得超过2个月；②萃取过程中要注意振摇的速度和幅度，振摇太轻，萃取不完全，导致实验结果偏低，振摇过度，容易发生乳化现象，导致结果偏高；如遇乳化现象，两相比重相近难以分离时，可采用延长静止时间或加少量电解质（如氯化钠）破乳，使两相分离；③若溶液呈碱性而产生乳化，加入少量稀硫酸或采用过滤等方法除去；④接近终点时一定要摇匀，避免局部浓度过高造成假终点；⑤每次试验必须用0.04 mmol·L－1的辛酸钠做回收试验，回收率在97%～101%范围内，试验成立，否则试验不成立。

［1］邹莉，邹炜，彭良俊，等.辛酸钠对人免疫球蛋白中病毒的灭活效果［J］.中国生物制品学杂志，2012，25（5）：585－588.

［2］Horowitz B，Piёt MP，Prince AM，et al.Inactivation of lipid enveloped viruses in labile blood derivatives by unsaturated fatty acids［J］.Vox Sang，1988，54（1）：14－20.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（三部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

Study on two methods of sodium caprilate assay determ ination in human serum album in

LIRong-zhen1，ZHAO Jun1，LIQing-ying1，WANG Bin2，WANG Xia2，LIWei2

（1.Shandong Institute of Biological Products，Taian 271000，China；2.Shandong Taibang Biological Products Co.Ltd.，Taian 271000，China）

ObjectiveTo establish an accurate and rapid method to detect sodium caprylate during the process of human serum albumin（HSA）.M ethods20 samples of company T was analyzed with ether extraction and gas chromatography（GC）.ResultsThemean recovery ranged from 97%to 101%and RSD was less than 2%.ConclusionThe results showed that this method was rapid，convenient and accurate，which could meet the quality control during the production of HSA.

Sodium caprylate assay；Ether extraction；Gas chromatography

R927.2

A

2095－5375（2014）02－0085－002

李荣贞，女，研究方向：生物制品质量控制，E－mail：lrc7098＠163.com