奥沙利铂静脉输液的刺激性、过敏性和溶血性研究

苏晨霞，李健和，易利丹，彭六保

(1.湖南省新化县孟公镇中心卫生院，湖南新化 417605；2.中南大学湘雅二医院药学部，湖南长沙 410011)

奥沙利铂(oxaliplatin)为第三代铂络合物类抗肿瘤药物，适用于经过氟尿嘧啶治疗失效之后结直肠癌转移的病人，可单独或联合氟尿嘧啶使用[1]。为避免医护人员在对注射用奥沙利铂或奥沙利铂注射液配制过程中交叉污染和发生差错事故(注射用奥沙利铂或奥沙利铂注射液临用时须重新配制，可能错选溶剂，如选用常用的0.9%氯化钠注射液，而奥沙利铂与各种浓度的氯化钠有配伍禁忌)，作者在参考相关专利[2，3]的基础上研制开发了奥沙利铂静脉输液，并获得了新药证书，技术转让药厂。现将在研制、开发过程中进行的过敏性、溶血性、血管刺激性和热原实验研究报道如下, 以期为安全用药提供依据。

1 药物、仪器和动物

1.1 药物和仪器 奥沙利铂静脉输液(规格 100 ml∶100 mg奥沙利铂和5.1 g甘露醇，批号 20111220，中南大学湘雅二医院药学部研制提供)。0.9%氯化钠注射液(批号 20111022，湖南中南科伦药业有限公司)。L-600台式低速自动平衡离心机(湘仪离心机仪器有限公司)； HH-420型三用恒温水箱(上海乔跃电子有限公司)。

1.2 动物 豚鼠, 雌雄兼用, 体重(294.7±21.9) g；新西兰兔, 雌雄兼用,体重1.8～2.5 kg。上述实验动物均购自长沙市天勤生物技术有限公司，实验动物生产许可证号: SCXK(湘)2009-0012。

2 方法和结果

根据化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则(2005年)附录方法进行以下实验。

2.1 过敏性实验 采用自动全身性过敏反应(active systemic anaphylaxis，ASA)，豚鼠18只，根据体重按随机数字表法分为3组，每组6只，分别腹腔注射奥沙利铂静脉输液、1%鸡蛋清或0.9%氯化钠注射液各0.5 ml，隔日注射一次，共3次，使豚鼠致敏。于首次注射后14 d及21 d，每组各取3只动物，分别从后肢静脉注射奥沙利铂静脉输液、1%鸡蛋清或0.9%氯化钠注射液各1.0 ml激发，观察注射后30 min 内豚鼠有无用爪搔鼻、喷嚏、咳嗽、竖毛、干呕、抽搐、呼吸困难、休克和死亡等过敏反应症状。并按照指导原则全身致敏性评价标准分为过敏反应阴性、弱阳性、阳性、强阳性和极强阳性。结果显示，腹腔注射1%鸡蛋清的豚鼠，在首次注射后第14天(d 14)和d 21，静脉注射1%鸡蛋清后2 min内，全部出现竖毛、呼吸困难、痉挛、抽搐、休克等反应, 并在注射后10 min 内全部死亡，为过敏反应极强阳性。腹腔注射0.9%氯化钠注射液或奥沙利铂静脉输液的所有豚鼠，在静脉注射0.9%氯化钠注射液或奥沙利铂静脉输液后30 min内均未见明显异常表现, 为过敏反应阴性。该实验表明，奥沙利铂静脉输液的过敏反应呈阴性。

2.2 溶血性实验 用常规的体外试管法(肉眼观察法)进行溶血性实验。家兔心脏穿刺采血15 ml，用竹签搅拌以除去纤维蛋白，然后转入刻度离心管内，再用0.9%氯化钠注射液洗涤5次，每次加0.9%氯化钠注射液10 ml，混匀后560×g离心15 min，弃去上清液，直到上清液不显红色为止。然后按所得红细胞的容积，用0.9%氯化钠注射液配制2%的红细胞混悬液，供实验用。

取7个试管并编号，加入2%的红细胞混悬液2.5 ml， 然后于第1～5管中依次加入奥沙利铂静脉输液0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 ml和0.9%氯化钠注射液2.0、2.1、2.2、2.3、2.4 ml, 第6管加0.9%氯化钠注射液2.5 ml作阴性对照, 第7 管加2.5 ml无菌水作为阳性对照。将各管轻轻混匀, 置37 ℃恒温水浴箱中观察4 h。1 h内每隔15 min观察一次，1 h后每隔1 h观察一次，共7次，观察各管有无溶血及凝聚现象。结果显示，在混匀后0.25、0.5、0.75、1、2、3和4 h，7号管均为澄明红色溶液，管底无细胞残留，为全溶血。6号管上层液体为无色澄明, 未发生溶血现象；红细胞逐渐沉于管底, 经振摇后可均匀散开, 说明亦无红细胞凝聚现象。试管1～5与6号管一样，上层液体为无色澄明,沉于管底的红细胞经振摇后可均匀散开，既未发生溶血，亦未发生红细胞凝聚现象。

2.3 血管刺激性实验 取新西兰兔16只，体重(2.1±0.3) kg，雌雄兼用，按体重随机分为对照组和用药组，每组8只，分别自耳缘静脉注射0.9%氯化钠注射液10 ml/kg和奥沙利铂静脉输液10 ml/kg。注射后24 h，对注射部位进行肉眼观察，然后每组取4只家兔以注射部位为中心，剪下兔耳(含血管)3～5 cm，面积9～15 cm2，放入0.4%甲醛的溶液中固定，石蜡包埋，横断面切片(5～7 μm厚)，苏木素-伊红染色，进行组织病理学检查。另4只家兔于静脉注射给药后7 d，进行肉眼观察和组织病理学检查。肉眼观察：注射部位有无红、肿、增厚、硬结及溃疡等现象，红、肿程度分为0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度。病理学检查：观察静脉注射部位血管内有无血栓形成；血管壁内、中、外膜是否完整，血管壁有无变性、坏死；血管周围组织有无水肿及炎症细胞浸润等改变。每项指标按病变程度分轻、中、重三级，计1、2、3分，每组兔的每项指标分值相加得该组兔该项指标的总积分，除以家兔数，即得该组家兔该项指标的平均分值，然后根据血管刺激性评价标准进行评价。

结果显示，兔耳缘静脉注射奥沙利铂后24 h，注射部位未见明显的红、肿，亦未见明显的增厚、硬结、溃疡，与0.9%氯化钠注射液对照组比较，无明显差异。7 d后观察也未见明显的变化。病理组织学检查：给药后24 h，对照组家兔的各项指标均为0分；奥沙利铂组1只家兔血管周围组织轻度水肿(1分)，2只家兔血管周围有极少量炎症细胞浸润(各1分)，其余各项指标均为0分，奥沙利铂组的平均积分为0.75分。给药后7 d，对照组和奥沙利铂组兔的各项指标均为0分。表明奥沙利铂对血管有轻度刺激性，是可以恢复的。

2.4 热原实验 按《中华人民共和国药典》2010年版二部附录Ⅺ D热原检查法[4]进行实验。 新西兰兔，实验前测体温2次(测量时肛温计插入肛门的深度约6 cm，时间不得<1.5 min)，间隔30 min。选择体温在38.0～39.6 ℃，两次体温之差<0.2 ℃的健康家兔3只，两次体温的平均值为该兔的正常体温。于第二次测正常体温后15 min内，自耳缘静脉缓慢注入预热至38 ℃的奥沙利铂静脉输液10 ml/kg。然后每隔30 min测定其体温1次，共6次。以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔的体温升高度数。每只家兔体温升高<0.6 ℃，3只家兔体温升高总度数<1.3 ℃，不必复试。

结果显示，3只家兔注射前的体温分别为39.0、39.2、38.9 ℃，注射奥沙利铂静脉输液后的最高体温分别为39.4、39.5、39.1 ℃，体温分别升高0.4、0.3、0.2 ℃，奥沙利铂静脉输液热原检查符合规定。

3 讨论和结论

实验结果表明，奥沙利铂静脉输液过敏实验呈阴性，未产生溶血作用，对血管有轻度的刺激作用，热原实验合格。另外，本品恒温加速实验6个月和长期留样实验12个月，除在光照、高温60 ℃条件下pH值略有升高、有关物质有所增加(但仍在<1.0%的合格范围内)，以及高温60 ℃条件下颜色略有加深外，其他指标均无明显变化，其稳定性良好[5]。这些均表明作者研制开发的奥沙利铂静脉输液符合临床安全性方面的要求。

【参考文献】

[1]Ibrahim A，Hirschfeld S，Cohen M H,etal. FDA drug approval summaries: oxaliplatin[J]. Oncologist，2004，9(1)：8-12.

[2]Ibrahim H,Mauvernay R Y.Pharmaceutically stable preparation of oxaliplatinum：US，5716988[P].1998-02-10.

[3]Kaplan M A,Phusanti L,Perrone R K,etal.Stablized solutions of platinum(Ⅱ)antitumor agents：US，2128641[P]. 1995-02-12.

[4]国家药典委员会. 中华人民共和国药典. 2010年版 二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录 Ⅺ D.

State Pharmacopoeia Committee. Pharmacopoeia of the People’s Republic of China.2010 ed. Volume 2[S]. Beijing：Chinese Medical and Science Press,2010：Appendix Ⅺ D. In Chinese.

[5]苏晨霞，李健和，易利丹，等. 奥沙利铂静脉输液处方工艺优化及其稳定性考察[J].中国药房，2013，24(13)：1201-1204.

Su ChenXia，Li JianHe，Yi LiDan，etal. Optimization of formulation and technology of oxaliplatin intravenous infusion and its stability study[J].China Pharmacy，2013，24(13)：1201-1204. In Chinese with English abstract.