大鼠不同部位采血血清肌酸激酶及其同工酶检测结果

2014-03-04施嘉琛丁晓静

实验动物与比较医学 2014年1期

关键词：同工酶肌酸激酶部位

李红, 施嘉琛, 杨奕, 丁晓静

(北京市疾病预防控制中心, 北京 100013)

大鼠不同部位采血血清肌酸激酶及其同工酶检测结果

李红, 施嘉琛, 杨奕, 丁晓静

(北京市疾病预防控制中心, 北京 100013)

目的比较大鼠不同部位血清肌酸激酶(CK)及其同工酶(CK-MB)检测结果是否存在差异。方法用免疫抑制法检测大鼠不同部位采集的血清中CK和CK-MB活性，并进行比较。结果大鼠不同部位采集的血液其血清CK和CK-MB检测结果均差异极显著。结论毒理学动物实验前后采血部位应统一，在检测结果未达到互认时，使用各自动物模型的空白组和实验组数据进行分析比较。

肌酸激酶; 肌酸激酶同工酶; 免疫抑制法; 大鼠血清

肌酸激酶(Creatine kinase，CK)主要存在于骨骼肌、心肌和脑组织中，有三种形式的同工酶(Creatine kinase isoenzyme)，其中混合单体的肌酸激酶同工酶（CK-MB）主要来源于心肌[1]。当骨骼肌、心肌和脑组织发生损伤时，CK和CK-MB活性会有不同程度的升高。在横纹肌溶解症(Habdomyolysis，RM)时, CK升高超过参考区间上限10倍[2]。急性心肌梗死(A cute m yocard ia l infarction, AM I)后2～4 h CK活性开始增高, 3～6 h CK-MB活性开始增高[1]。CK和CK-MB的升高对诊断AM I具有很高的价值[3]。AM I死亡率高, 严重危害人类健康。如能及早确诊并介入治疗, 对挽救濒死心肌、改善预后、降低急性期病死率等具有重要意义, 利用大鼠实验模型进行相关研究的文献已有报道[4～8]。本实验比较不同部位采集的大鼠血样其血清中CK和CK-MB活性的差异, 旨在获得客观、真实及准确的大鼠血清CK和CK-MB检测结果, 以确保RM和AM I相关研究的大鼠实验模型建立。

1 材料与方法

1.1 仪器设备

日立全自动样品处理生化分析系统(包括离心、开盖、在线分柱、7600生化分析仪模块)(日立高新技术有限公司, 日本)。

1.2 试剂、Trucal U复合校准品和TruLab质控血清

Diasys为德国诊断系统(上海)有限公司产品。CK和CK-MB测定试剂盒使用国际临床化学学会(IFCC)和德国临床化学学会(DGKC)推荐的连续监测法。试剂盒购自北京日新兴业仪器有限公司。CK货号: 14116002101，CK-MB货号: 14116502101，Trucal U复合校准品货号: 591009910064, Trulab N (正常值)质控血清货号: 590009910061, Trulab P(高值)质控血清货号: 590509910061。

1.3 血样

来源于正常健康体检人肘前静脉血清238例;清洁级6～8周龄W istar大鼠[SCXK(军)2007-004]由军事医学科学院实验动物中心提供，其中大鼠眼内眦血清97例(雌性大鼠48只，雄性大鼠49只), 大鼠腹主动脉血清76例(雌雄各半), 大鼠股静脉血清105例(雌性大鼠52只, 雄性大鼠53只)。

1.4 实验方法

在7600生化分析仪上进行校准，质控合格后首先进行健康人血样检测，确认本实验室建立的CK和CK-MB检测方法。采集大鼠眼內眦静脉、腹主动脉、大鼠股静脉血样，同条件检测血清中CK和CK-MB活性。使用5 m l黄帽分离胶真空采血管进行血样采集，真空采血管由积水医疗(中国)有限公司提供。预制条码，由全自动样品处理系统直接进入生化分析仪进行检测。已剔除溶血、乳糜血的标本。

1.5 统计方法

自动化系统输出的所有实验数据直接使用SPSS16.0软件包进行方差分析统计处理。

2 结果

2.1 健康人血清CK 和CK-MB

健康人静脉血清CK: 104.35±74.73 U/L, CK-MB: 13.00±5.63 U/L。

2.2 大鼠血清CK 和CK-MB

大鼠眼内眦静脉、腹主动脉、股静脉不同部位取血的血清CK和CK-MB相互比较差异均极显著(表1)。

表1 大鼠不同部位采集的血清中CK和CK-M B的检测结果

3 讨论

3.1 健康人血清的检测，确认实验室检测方法

CK是由M和B两种亚单位组成的二聚体, 在细胞质中有3种同工酶的形式存在: 2个B单体(CK-BB), 2个MM的单体(CK-MM)，M B的单体混合体(CK-MB)。在细胞线粒体内还有另一种CK-M t同工酶。虽然这几种同工酶分子量相同，催化相同的化学反应。但其分子结构和来源不同，骨骼肌中CK-MM占绝大部分，CK-BB来源于大脑和消化道，而CK-MB来源于心肌[1]。Diasys试剂盒提供的健康人参考范围，男性CK值＜171U/L、女性＜145 U/L，CK-MB＜24U/L。健康人血清的检测符合理论CK＞CK-MB。确认了本实验室建立的CK和CK-MB检测方法。

3.2 大鼠不同部位取血的血清检测

大鼠不同部位取血的血清CK和CK-MB检测结果差异很大，王沛[9]的研究从颈总动脉取血，检测结果CK为1022.50±266.82 U/L，CK-MB为343. 15±102.11 U/L。詹皓等[10]报道, 断头处死取血, CK检测结果为2267.8±563.1 U/L, CK-MB为3827.6 ±819.8 U/L。这些研究表明与本实验室检测结果均有较大差异，原因可能是动脉血、静脉血与混合血(股静脉取血、断头取血取到的是混合血)存在较大差异。另外实验室不是互认实验室，存在实验室间的检测差异。

从大鼠眼內眦静脉和腹主动脉取血的血清，检测结果CK-MB大于CK。Diasys是检测人血清CK和CK-MB的专用试剂, 原理属于免疫抑制法测定。CK-MB采用多克隆抗体将M亚基抑制, 测定B亚基的活力, 其结果乘以2, 即为CK-MB活性。检测人血清也会出现CK-MB＞CK的异常情况[11～13], 当人血清中出现的巨CK 或CK -BB 及其他成份时, 由于它们不受抗M 亚基抗体抑制, 其活性已完全测出, 再乘以系数2, 就可能出现CK-MB升高或高于总CK 的现象。赵利军等[14]检测结果, CK为(0.42±0.6) ×103U/L，CK-MB为0.55±0.12×103U/L。詹皓等[10]的检测结果都同样出现CK-MB大于CK情况。

目前在国内尚未有大鼠专用检测试剂情况下，造成大鼠眼內眦静脉和腹主动脉取血的血清检测结果CK-MB大于CK，干扰物是否和造成人血清检测干扰物一致，真正的原因还应做进一步探讨。

检测动物血样的实验室所用试剂、生化分析仪、反应温度和采血部位以及麻醉剂都存在较大差异。因此，在毒理学动物实验中，实验前后血样采集部位应一致。在检测结果未达到互认时，使用各自动物模型的空白组和实验组数据进行分析比较，建立实验室内部参考范围。

[参考文献]

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[3] 宋艳. CK和CK-MB在急性心肌梗死诊断中的临床意义[J]. 中华实验诊断学, 2012, 16 (6):1079-1080.

[4] 李子佳, 李应东, 赵信科, 等. 当归、红芪超滤膜提取物对急性心肌缺血大鼠CK及CK-MB的影响[J]. 现代中西医结合杂志, 2011, 20(8):933-934.

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[6] 曾林, 李劲松, 曲在屏, 等. 大鼠实验性甲亢心肌内肌酸激酶变化的免疫组化研究[J]. 实验动物科学与管理, 1999, 16(1):8-10.

[7] 侯莉娟, 刘晓莉, 乔德才. 大鼠游泳运动疲劳模型建立的研究[J]. 实验动物科学与管理, 2005, 22(1):1-3.

[8] 吴军, 任晓丽, 林飞燕, 等. 急性拘束冷应激对大鼠血清中几种生化指标含量的动态观察[J]. 实验动物与比较医学, 2010, 30(3):205-208.

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