绿色荧光裸小鼠主要脏器重量及脏器系数测定与比较

尤金炜, 张立波, 方 天, 田小芸, 刘彪, 梁 磊, 恽时锋

(南京军区南京总医院比较医学科, 全军实验动物科普与伦理教育基地,全国科普教育基地, 南京 210002)

绿色荧光裸小鼠主要脏器重量及脏器系数测定与比较

尤金炜, 张立波, 方 天, 田小芸, 刘彪, 梁 磊, 恽时锋

(南京军区南京总医院比较医学科, 全军实验动物科普与伦理教育基地,全国科普教育基地, 南京 210002)

目的 测定绿色荧光蛋白(GFP)转基因裸小鼠主要脏器重量及脏器系数。方法 选用6～8周龄GFP转基因裸小鼠及BALB/c裸小鼠雌雄各30只，用电子天平分别测定体质量和8个主要脏器重量，计算脏器系数，并进行性别间比较。结果 ①GFP转基因裸小鼠与BALB/c裸小鼠之间比较:雄性肾上腺、胰腺的质量组间差异极显著(P＜0.01)，心、肺的质量差异显著(P＜0.05)，脏器系数中肾上腺、胰腺差异极显著(P＜0.01);雌性体质量、心、肾、肺、胰腺的重量组间差异极显著(P＜0.01),肝、肾上腺的质量差异显著(P＜0.05),脏器系数中肝、脑、胰腺差异极显著(P＜0.01)。②GFP转基因裸小鼠雌雄组间比较，雄性鼠体质量明显大于雌性鼠(P＜0.01);心、肝、肾、胰的质量差异极显著(P＜0.01);雌雄间脏器系数比较，心、肾、肾上腺、脑间差异极显著(P＜0.01),胰腺系数间比较差异显著(P＜0.05)。结论 转基因GFP转基因裸小鼠的脏器重量、脏器系数在雄雌间有一定的差异，为相关的生物医学研究提供了基础数据。

GFP转基因; 裸小鼠; 脏器重量; 脏器系数

裸小鼠是先天性胸腺缺陷的突变小鼠，目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型，特别是在肿瘤学、免疫学等实验方面它有着特殊的价值。来源于水母的绿色荧光蛋白由于其具有荧光稳定、检测方便、对活细胞无伤害等优点，现已成为细胞生物学和分子生物学中应用最广泛的分子标记之一[1～3]。

转基因动物是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物[4]。GFP转基因裸小鼠经本科室工作人员通过多年的杂交、回交选育而成[5]。选育方法: 选择自带GFP转基因的C57BL/6小鼠与BALB/c裸小鼠杂交, 并与BALB/c裸小鼠回交并经逐代选育, 选育至第六代, 产生了GFP基因表达较为稳定的BALB/c绿色荧光裸小鼠。C57BL/6中插入的GFP绿色荧光蛋白基因序列号为: GenBank L29345.1，同时转入鸡β-actin启动子序列, 转入巨细胞病毒增强子, 以增强GFP基因表达。国内尚未查见该模型动物有关脏器重量和脏器系数的文献,本文报道其测定结果。

1 材料与方法

1.1 实验动物

GFP转基因裸小鼠及BALB/c裸小鼠均由本科选育，选取6～8周龄雄雌小鼠各30只 [SCXK(军) 2012-0014] 用于实验。

1.2 饲养管理及环境

实验小鼠均饲养在屏障设施中, 温度为20～26℃,相对湿度50%～70%，光照明暗交替12 h/d[SYXK(军)2012-0047]。

小鼠所食饲料为江苏协同医药生物工程有限责任公司提供60Co辐照饲料, 营养成份为: 水分9.4%、粗蛋白21.90%、粗脂肪6.73%、粗灰份6.3%、粗纤维2.54%、钙1.34%、磷0.96%, 饲料生产企业审查合格证号为: 苏饲审(2008)01008, 另每周加喂一次葵花籽。饮水为消毒的酸化水, 使用的垫料、笼盒等一切用具均径131℃ 5 m in高压预真空灭菌。

1.3 仪器

Sartorius CP224S型电子天平及常用解剖器械。

1.4 方法

小鼠称质量后摘眼球采血, 分离心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、胰, 剔除脏器表面的脂肪、筋膜，吸净表面的血迹后称重并计算脏器系数。

1.5 统计学分析

脏器重量以g为单位, 脏器系数以脏器重量/体质量×100%表示，使用SPSS13.0统计软件，采用t检验对数据进行差异显著性检验，统计结果以x- ± s表示。

2 结果

2.1 不同品系相同性别间比较

从表1、2可知, GFP转基因裸小鼠与BALB/c裸小鼠间比较，雄性肾上腺、胰腺的质量及肾上腺、胰腺的脏器系数组间差异极显著(P＜0.01),心、肺的质量差异显著(P＜0.05); 雌性体质量、心、肾、肺、胰腺的质量及肝、脑、胰腺的脏器系数组间差异极显著(P＜0.01), 肝、肾上腺的质量差异显著(P＜0.05)。

2.2 同品系不同性别间比较

从表1可知，雄性裸小鼠的体质量明显大于雌性，脏器重量比较，心、肝、肾、胰腺间差异极显著(P＜0.01); 其它脏器指标差异不显著。从表2可知，脏器系数的比较，雌雄鼠之间心脏、肾脏、肾上腺、全脑差异极显著(P＜0.01); 胰腺差异显著(P＜0.05); 其它指标差异不显著。

表1 GFP转基因裸小鼠与BALB/c裸小鼠脏器重量间比较 g

表2 GFP转基因裸小鼠与BALB/c裸小鼠脏器系数间比较 %

3 讨论

每个品系的动物都有其自身的生物学特性，实验动物作为现代科学技术中“活的试剂”、“活的精密仪器”，实验动物的脏器重量和脏器系数是动物主要的生物学特性之一，是鉴定其遗传品质的重要依据, 也是动物病理学、毒理学等方面研究的重要参考值，同时这些指标均是选择适宜实验动物的依据之一[6]。但由于实验动物品系、个体差异、来源、实验室条件和测定方法及测量仪器不同等因素, 各参考值也有很大差异, 为此, 需建立各实验室自己的实验动物生理指标数据背景资料[7]。本研究检测总结了GFP转基因裸小鼠的基础理论数据，为其在药物筛选、生物制品检定、药品的毒性试验及活体动物成像中的应用提供了基础数据。

从表1、2可知, GFP转基因裸小鼠与BALB/c裸小鼠间主要脏器比较中，心、肝、肺、肾、肾上腺、胰腺均有差异，其中胰腺重量和脏器系数在雌雄间均存在显著的差异(P＜0.01)，在研究过程中我们发现GFP转基因裸小鼠所有组织中胰腺是唯一的一个外观呈绿色的, GFP表达量较高，胰腺功能的变化与脏器重量的关系有待进一步的研究。

另外从表中可知，6～8周GFP转基因裸小鼠雄性鼠的体质量明显大于雌性鼠，这符合雄性动物生长速度快的规律。心脏、肝脏、肾脏、胰腺雄鼠明显大于雌鼠的，说明了性别对脏器重量是有一定的影响的。这与田小芸[8]等报道及王俊风[9]等报道所得出的结论部分一致。分析表明在年龄和环境相同的条件下出现上述差异性的可能原因是因为小鼠品种和性别的不同而造成的。

GFP转基因裸小鼠因自身含有标记蛋白与其他实验小鼠相比而具有明显的优势，本实验对GFP转基因裸小鼠进行了体质量、脏器重量、脏器系数等方面的检测，且与BALB/c裸小鼠进行了比较，积累的原始数据可为要采用GFP转基因裸小鼠从事生物医药研究的科研人员提供基础对照值。同时也为该品系小鼠标准化鉴定和质量控制提供依据，该小鼠的其他生物学特性还有待进一步研究。

[1] Yang M, Baranov E, Moossa AR, et al. Visualizing gene expression by whole-body fluorescence imaging [J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2000, 97:12278-12282.

[2] Yang M, Reynoso J, Jing P, et al. Transgenic nude m ice w ith ubiquitous green fluorescence protein expression as a host for human tumors[J]. Cancer Res, 2004, 64:8651-8656.

[3] Yang M, Reynoso J, Bouvet M, et al. Atransgenic red fluorescent protein-expressing nude mouse for color-coded imaging of the tumor m icroenvironment[J]. J Cell Biochem, 2009, 106(2):279-284.

[4] 施新猷, 王四旺, 顾为望, 等. 比较医学 [M]. 西安: 陕西科学技术出版社, 2003:104-105.

[5] 张立波, 刘彪, 田小芸, 等. 绿色荧光裸小鼠的选育初报[J].实验动物与比较医学, 2013, 33: 306-309.

[6] 恽时锋, 朱虹 . 在生命科学中影响动物实验结果的多因素分析[J].医学研究生学报, 2003, 16:372-375, 378.

[7] 许文静, 郭建光, 吴艳秋, 等. SPF级SCID.BG小鼠与BALB/c裸小鼠、SCID小鼠部分免疫指标的测定与比较[J]. 实验动物与比较医学, 2013, 33:153-156.

[8] 田小芸, 恽时锋, 胡玉红, 等. 转基因EGFP小鼠的主要脏器重量及脏器系数[J]. 中国比较医学杂志, 2008, 18: 32-33,36.

[9] 王俊风, 施美莲, 赵立虎, 等. 无菌级C3H/OrlSlac小鼠生长繁殖、主要脏器参数以及血液生理生化指标的测定分析[J]. 中国实验动物学报, 2011, 19:124-128.

Q95-33

B

1674-5817(2014)01-0062-03

10.3969/j.issn.1674-5817.2014.01.014

2013-07-16

南京军区南京总医院院管课题(2012052)

尤金炜(1983-), 男, 本科, 南京军区南京总医院比较医学科技师

恽时锋(1965-), 男, 主任技师, 教授, 博士, 研究生导师, 从事医学实验动物学工作