果蔬汁中含氯杀菌剂的气相色谱分析

史龙梅 牛志远 付艳芳 李欢 周建科

（河北大学化学与环境科学学院，河北保定071002）

果蔬汁中含氯杀菌剂的气相色谱分析

史龙梅*牛志远 付艳芳 李欢 周建科**

（河北大学化学与环境科学学院，河北保定071002）

以甲苯为萃取剂，甲醇为分散剂，分散液液微萃取果蔬汁中2，4，6-三氯酚、五氯苯甲醚、五氯硝基苯3种含氯杀菌剂，毛细管气相色谱分离/电子捕获检测器测定。试验主要考察了分散剂、萃取剂、盐效应及酸度对目标化合物萃取的影响情况。结果表明，在5.0 μg/mL～100.0 μg/mL范围内3种组分有良好线性，相关系数大于0.999 3，平均回收率分别为95.3%、96.5%、81.5%，相对标准偏差为5.53%、6.37%、5.94%。

分散液液微萃取；气相色谱；有机氯杀菌剂；果蔬汁

水果蔬菜中农药残留问题十分严峻，已引起人们广泛关注与重视，同时，果蔬汁饮料的质量和安全势必受到威胁。五氯硝基苯属有机氮保护性杀菌剂，主要用于土壤和种子处理，对多种蔬菜的苗期病害及土壤传染的病害有较好的防治效果，其化学性质稳定，难以降解，残留期长，具有高毒性和生物蓄积性，对生物体内分泌系统有干扰。国家标准GB 2673-2012规定果蔬中五氯硝基苯最大残留限量≤0.1 mg/kg。2，4，6-三氯酚作为一种防腐剂、杀菌剂，被众多国家定为环境中优先控制污染物，氯酚类化合物对人类健康和环境产生危害。文献报道含氯杀菌剂的检测通常采用气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用、液质联用法，同时检测2，4，6-三氯酚、五氯苯甲醚和五氯硝基苯的方法尚未见报道。

本文采用分散液液微萃取样品处理方法，气相色谱/电子捕获检测器测定果蔬汁中有机氯杀菌剂，结果令人满意。

1 试验部分

1.1 仪器和试剂

Varian3400气相色谱仪；ECD检测器；N-2000型双通道色谱工作站，浙江大学智能信息工程研究所；SZ-93自动双重纯净水蒸馏器，上海亚荣生化仪器厂；80-2型离心机；XW-80A旋涡混合器。

2，4，6-三氯酚，瑞典Acros Organics公司；五氯苯甲醚和五氯硝基苯，Sigma-Aldrich公司；除甲醇为色谱纯外，其余试剂均为分析纯；混合果蔬饮料样品，当地超市。

标准储备溶液：分别准确称取适量3种标准品，甲醇作溶剂，配制成2.0 mg/mL的标准储备液，4℃条件下贮藏备用。标准工作溶液：用甲醇逐级稀释储备液。

1.2 色谱条件

色谱柱：ATTM-PESTICIDE，内径0.25 μm，30 m×0.25 mm，Alltech；柱温130℃；1075分流/不分流注样器，不分流进样，分流阀关闭时间为0.5 min；进样量1 μL；进样器温度300℃；ECD检测器，检测器温度300℃；载气为高纯氮气；柱前压0.21 MPa，流量1.5 mL/min。

1.3 样品处理

将混合果蔬汁样品过孔径0.45 μm微孔滤膜，取5 mL置于具塞尖底离心试管中，注入1.5 mL混合萃取剂（甲醇与甲苯体积比为4∶1），样品与萃取剂混合形成乳浊液，静置2 min，在2 500 r/min转速下离心2 min。用10 mL注射器将下层样品吸出弃去，上层甲苯相析出量为260 μL，取1 μL进样分析。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件优化

考察了程序升温及各种恒温条件下2，4，6-三氯酚、五氯苯甲醚和五氯硝基苯的分离情况，发现柱温恒温130℃时3组分的分离和响应值情况最好，最终确定柱温为恒温130℃。标准溶液色谱图如图1所示。

图1 标准溶液色谱图

2.2 萃取条件优化

2.2.1 萃取剂的选择

对萃取剂要求是：密度最好比水大，便于操作；在水中溶解度很小；对分析物有良好的萃取能力；与所用检测器相适应，杂峰干扰小。

首先，常见的密度比水大的二氯甲烷、三氯甲烷等溶剂不能用于电子捕获检测器。考察了二硫化碳、甲苯和二甲苯作为萃取剂的情况。结果表明，二硫化碳作为萃取剂时，萃取不出2，4，6-三氯酚，萃取效率低；二甲苯作萃取剂萃取效率高但对组分有干扰；甲苯作萃取剂时无杂质峰干扰，萃取效率高，故选择甲苯作萃取剂。

2.2.2 分散剂

考察了甲醇、丙酮、乙腈3种有机溶剂作分散剂的分散萃取情况，试验结果表明，丙酮和乙腈作为分散剂萃取效率低；甲醇无杂质峰干扰，萃取效率高，所以用甲醇作为分散剂。

2.2.3 萃取剂体积

试验考察了100 μL～600 μL的萃取剂对回收率的影响，结果如图2所示。保持甲醇体积为1.2 mL，甲苯的体积为300 μL时，3种组分的萃取效果最佳。

图2 萃取剂体积对萃取效率的影响

2.2.4 样品pH值

在一定pH范围内，调节样品酸度有利于提高萃取效率。考察了样品pH对回收率的影响。试验结果表明，当pH＜3时，回收率会降低；当pH＞3时，随着pH的增加，回收率基本不变，而实际样品pH值为3.6，故无需再调节酸度。

2.2.5 盐析效应

试验考察了600 mg～1 000 mg的氯化钠含量对萃取率的影响。结果表明，加盐与否对萃取效率影响甚微，所以试验选择不加盐。

2.3 线性方程和检出限

用甲醇对标准储备混合液分级稀释，配成系列质量浓度的工作溶液后，在所选的色谱条件下，以y（峰面积）对x（质量浓度）绘制工作曲线，3种组分在5.0 mg/L～100.0 mg/L范围内线性良好，其线性方程与相关系数及方法检出限见表1。

表1 线性方程及检出限

2.4 样品加标回收及RSD测定

取适量混标加入5 mL混合果蔬汁样品中，在最佳萃取条件和色谱条件下，测定加标后3种组分的含量，平行测定6次，计算相应的加标回收率和RSD，结果见表2。样品加标色谱图见图3。

表2 平均回收率和精密度（n=6）

2.5 实际样品测定

取5 mL混合果蔬汁实际样品，平行测定3次，3种组分均未检出，样品色谱图如图4所示。

图3 样品加标色谱图

图4 实际样品色谱图

3 结论

采用分散液液微萃取-气相色谱法测定果蔬汁中的含氯杀菌剂，样品处理方法操作简便，快速高效，所用试剂少，是一种对环境友好，操作简便的分析方法，适合果蔬汁饮料中该类化合物的测定。

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表4 牛蒡保健型鲜啤酒理化指标

5.3 牛蒡保健型鲜啤酒的卫生指标符合GB2758-2012规定。

6 结论

牛蒡原汁的最佳添加时间是在原料糖化时，牛蒡原汁最佳添加量为4%，啤酒发酵最佳时间为13 d，最终的牛蒡啤酒风味口感最佳，啤酒综合评分最高。

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Gas chromatography analysis ofchlorine bactericide in fruit juices

SHI Long-mei*NIUZhi-yuan FUYan-fang LI Huan ZHOUJian-ke**
（College ofchemistryand environmental science，Hebei university，Hebei Baoding071002，China）

With methylbenzene as extractant and methanol as dispersant，three kinds of chlorine bactericide in fruit juice were extracted by dispersive liquid-liquid microextraction（DLLME）method.The 2，4，6-trichlorophenol, pentachloroanisole and pentachloronitrobenzene were determined bycapillarygas chromatographywith ECD.The influences ofdispersant,extractant,salt effect and pH on extraction efficiencyoftarget compounds were investigated.The linearityofregressionequationsweregood in therangeof5.0 μg/mL～100.0 μg/mL,with correlation coefficientsweregreater than 0.999 3.The average recoveries were 95.18%,96.42%and 81.37%,respectively.The relative standard deviations werelessthan6.37%.

dispersive liquid-liquid microextraction；gas chromatography；organochlorine fungicides；fruit juice

TS225.7

A

1673-6044（2014）01-0051-04

10.3969/j.issn.1673-6044.2014.01.017

*史龙梅，女，1988年出生，河北大学分析化学专业研究生在读。

**周建科，通讯作者，E-mail:zhoujianke@aliyun.com.

2013-12-30

修回日期：2014-01-06