肉用绵羊超数排卵技术研究

韩丽娟

（山东省青州市畜牧局，青州 262500）

肉用绵羊超数排卵技术研究

韩丽娟

（山东省青州市畜牧局，青州 262500）

目前，绵羊超数排卵及胚胎移植技术因各种因素的影响，应用效果还不是很稳定。试验通过对4个品种的供体羊全部采用国产的FSH进行超数排卵处理并进行胚胎移植，探讨在低成本情况下适合生产实践应用的超数排卵技术。对供体羊进行3项试验，所有供体羊均埋植CⅠDR 13 d进行同期发情处理。试验1，用总剂量为210ⅠU的FSH对无角陶赛特羊、白头萨福克羊和特克塞尔羊3个品种的育成羊进行超排处理。超排程序：在撤栓前48 h开始按递减剂量肌肉注射FSH，12 h/次，共连续注射6次，在注射第4针FSH的同时肌肉注射氯前列烯醇0.1 mg。撤栓24 h后开始定时试情，连续试情3 d。供体在第一次出现发情的同时肌肉注射HCG 500ⅠU并采用本交或人工输精的方式配种。供体发情开始后的第6天（发情当天记为第0天）进行手术法子宫角冲卵，冲出的胚胎在1 h内移植入受体体内。试验2，用总剂量为240ⅠU的FSH对东弗里生羊、无角陶赛特羊、白头萨福克羊和特克塞尔羊4个品种的成母羊进行超数排卵处理。其余各处理程序与试验1相同。试验3，对无角陶赛特羊，根据其体重不同分别给予总剂量为210、225、240、255ⅠU的FSH超排处理。其余各处理程序与试验1、2相同。结果表明：①210ⅠU FSH处理育成羊的超数排卵结果在无角陶赛特羊、白头萨福克羊和特克塞尔羊间无显著差异（P＞0.05）。②240ⅠU FSH处理成母羊的超数排卵效果差异较大：东弗里生供体羊的胚胎可用率、卵回收率及卵受精率显著高于无角陶赛特羊、白头萨福克羊和特克塞尔羊（P＜0.05）。③FSH总剂量与体重比（ⅠU/kg）在3.4～4.6范围内3组间差异不显著（P＞0.05），在3组间以3.4～4.0组的超排效果较好，差异不显著（P＞0.05）。

绵羊；超数排卵；胚胎移植

超数排卵（superovulation）是指在母畜发情周期的适当时间，施以外源促性腺激素，提高血液中促性腺激素的浓度，使卵巢中在自然情况下闭锁的卵泡数减少，从而使较多的卵泡发育并排卵，简称“超排”。是快速繁育优质种羊的有效途径。

1 材料

1.1 试验动物及时间

供体羊共70只：育成羊18只，其中无角陶赛特羊6只、白头萨福克羊7只、特克塞尔羊5只；成母羊52只，其中东弗里生羊5只、无角陶赛特羊31只、白头萨福克羊10只、特克塞尔羊6只。这些母羊均膘情良好、发情正常、健康无繁殖疾病。

饲养方式：为全年半放牧半舍饲的方式，试验期间以舍饲为主。精料组成：豆饼10%+玉米25%+食盐0.3%+预混料2.7%。

本试验在2008年10—11月份进行。

1.2 药品

释放型阴道海绵栓：自制；CIDR：新西兰哈密尔顿生物公司；孕马血清促性腺激素（PMSG）：1 000 IU/支，宁波市激素制品有限公司；垂体促卵泡素（FSH）：100IU/支，宁波市激素制品有限公司；氯前列烯醇（cloporostenol）：0.2 mg/支，宁波市激素制品有限公司；促排卵素3号（LHRH-A3）：20 IU/支，宁波市激素制品有限公司；绒毛膜促性腺激素（HCG）：100 IU/支，宁波市激素制品有限公司；冲卵液：1 000 mL/袋，ICPbio Limited，Auckland，NewZealand；酒精、碘酒、生理盐水、双蒸水、新洁尔灭、青霉素、链霉素等。

1.3 仪器与设备

Motic SMZ-140体视显微镜、Motic SMZ-140体视显微镜：麦克奥迪实业集团有限公司制造；手术移植活动保定车8台：自制；MICROLIGHT150型双穿刺腹腔镜：澳大利亚产；移植针：澳大利亚Castell公司提供；常用手术等器械：国产；二通式冲胚导管：澳大利亚Castell公司提供。

2 方法

2.1 供体羊超排处理及配种

2.1.1 超排用促性腺激素及超排处理方法 超数排卵处理方法：供体均采用新西兰CIDR阴道分叉栓一次性埋植13 d同期发情，撤栓前48 h根据个体体重分别给予总剂量为255 IU（体重71 kg以上）、240 IU（体重61～70 kg）、225 IU（体重51～60 kg）、210 IU（体重45～50 kg）的FSH进行超数排卵处理，每间隔12 h肌肉注射一次，连续6次递减注射，在注射第4次FSH的同时肌肉注射氯前列烯醇0.10 mg/只，发情同时肌肉注射HCG500 IU/只。

2.1.2 供体羊发情鉴定及配种 所有供体羊均于CIDR栓撤出后24 h开始用性欲旺盛的试情公羊进行早晚试情，每次试情时间不少于60 min，连续试情3 d。供体羊发情后立即用种公羊直接本交或结合人工输精，之后每12小时人工输精一次，直至发情结束。

2.2 冲卵

以发情开始的第1天记为0 d，所有供体均于发情后第7天用手术法经子宫回收胚胎。术前24 h将供体单独圈养，停饲，空腹。手术器械等用0.15%的新洁尔灭溶液浸泡30 min进行常规消毒。

术前将供体羊保定于手术移植车上，对供体进行全身麻醉，术部剪毛消毒。手术时取头低仰卧体位45～60°斜倒立保定法。手术部位于乳房下3～4 cm腹中线处，以常规方法消毒、切口打开腹腔，借助腹腔镜与子宫钳翻动卵巢系膜，观察卵巢反应及黄体情况并做记录。对卵巢有反应的供体用子宫钳轻轻缓慢地将子宫角牵引到腹腔外，在一侧子宫角基部用钝钳刺透子宫壁，插入冲卵导管，向冲卵管中打适量气体，直到冲卵管的气囊膨胀到适宜的程度可以保证冲卵液顺利回流，在宫管结合部插入套管针，抽出针芯，并由此向子宫腔内缓慢注入冲卵液。方法：先缓慢注入冲卵液20～25 mL，再补注入空气5～10 mL，保证胚胎全部回收。用培养皿接收回流冲卵液，最后用手指轻轻压挤子宫角，使冲卵液尽量回收完全，然后将冲卵管气囊放气，子宫角创口缝合。相同方法冲另一侧子宫角，之后将子宫送回腹腔，用生理盐水冲洗子宫。对手术部位进行常规手术缝合、消毒。术后注射青霉素160万IU，链霉素100万IU，同时肌肉注射氯前列烯醇0.1 mg，以消除供体的黄体，保证供体在下一情期提早发情。

所回收的冲卵液立即送入21～26℃的无菌室，并在实体镜下检查吸取合格的胚胎，评定质量，此时的受精卵在正常发育时应处于桑椹胚至囊胚阶段。对形态正常的胚胎在1 h内移入卵巢上黄体发育较好的受体羊子宫角内。将胚胎分为A、B、C、D四个等级进行鉴定，其标准是：

A级胚胎：胚胎的形态正常，发育速度与胚胎日龄一致，卵裂球排列紧密适度，大小、色泽均匀，透明带完整。

B级胚胎：发育速度与胚胎日龄基本一致，卵裂球排列不太紧密轮廓清晰，个别分裂球大，透明带完整。

C级胚胎：分裂球排列松散轮廓不清晰，色泽过暗，有的破裂呈沙粒样，有碎片；透明带不完整等。

D级胚胎：变性胚、退化胚。

A、B级胚胎为可移植胚胎，C级胚胎常用于与A、B级胚胎搭配移植或直接舍弃，D级胚胎直接舍弃。分别将每只羊左右两侧卵巢上的黄体数、胚胎的发育阶段、采胚数、可用胚数、变性胚数等作详细记录。

2.3 数据处理

本试验数据采用SAS软件进行统计分析。

3 结果与分析

3.1 所有供体超数排卵结果

本试验共超数排卵处理70只供体。其中有1只成母羊没有发情表现，另有4只供体羊卵巢上没有黄体只有卵泡，这5只供体羊没有手术冲胚，其余65只均进行手术冲卵，超排反应率为92.86%（65/70）。所得平均黄体数8.65个（562/65），只均获卵数4.88（317/65）枚，获卵率为56.41%（317/562），只均获可用胚数3.49（227/65）枚，卵可用率为71.61%（227/317），回收卵受精率为77.29%（245/317）。

3.2 不同药物剂量超排结果

3.2.1 育成羊用210 IUFSH处理结果 试验1，用总剂量为210 IU宁波产的FSH对无角陶赛特羊（6）、白头萨福克羊（7）、特克塞尔羊（5）共18只育成供体羊进行超数排卵处理。18只供体羊全部发情，但手术观察时发现有3只供体（Do、Su和Tx各1只）卵巢上没有一级黄体只有未排卵卵泡，因此未冲卵，其余15只供体都进行了手术冲卵。冲卵结果如下表1所示。

由表1及图1可以看出，用210 IU宁波产FSH处理的3个品种间仅在卵回收率上Do显著低于Su（P＜0.05），极显著低于Tx（P＜0.01），而Su与Tx之间没有显著性差异（P＞0.05）。卵巢上平均黄体数、可用胚数、受精卵率在三者之间均没有差异（P＞0.05）；但Do的平均黄体数高于Su及Tx（6.25）；Tx在卵受精率、平均可用胚数、平均卵回收数均高于Su和Do；Do的胚胎存活率则高于Su和Tx。

表1 用210 IU FSH对不同品种育成绵羊超数排卵处理结果

图1 210 IU FSH的卵回收率、受精率及胚胎可用率的比较

3.2.2 成母羊用240 IUFSH处理结果 试验2，用总剂量为240 IU宁波产FSH对东弗里生羊（5）、无角陶赛特羊（13）、白头萨福克羊（10）、特克塞尔羊（6）共34只成母羊进行超数排卵处理。34只供体羊全部发情，但手术观察时发现有2只供体（Su和Tx各1只）卵巢上没有黄体或只有少数退化黄体及未排卵卵泡，因此未继续冲卵，其余32只供体都进行了手术冲卵。冲卵结果如下表2所示。

表2 用240 IU FSH对不同品种供体羊超数排卵处理结果

由表2及图2可见，在胚胎可利用率方面，Os与Do、Tx间差异显著（P＜0.05），而与Su（54.67%）间差异极显著（P＜0.01）；Do、Su、Tx三者之间没有显著性差异（P＞0.05）。在卵回收率方面：Su与Do、Tx间差异极显著（P＜0.01）；Su与Os间差异显著（P＜0.05）；Do与Os、Tx间没有显著性差异（P＞0.05）。在卵受精率方面：Os（93.48%）与Do（65.08%）、Su（66.67%）、Tx（66.67%）间均差异极显著（P＜0.01）；Do、Su、Tx三者之间没有显著性差异（P＞0.05）。

图2 240 IU FSH的卵回收率、受精率及胚胎可用率的比较

3.3 药物剂量与体重比对超排效果的影响

试验3，对18只无角陶赛特供体羊（Do）根据体重分别给予不同剂量的FSH药物进行超数排卵处理。给药方法：在撤栓前48h根据个体体重分别给予总剂量为255IU（体重71 kg以上）、240 IU（体重61～70 kg）、225 IU（体重51～60 kg）、210 IU(体重45～50 kg)的FSH进行超数排卵处理，然后依据FSH剂量与体重的比值（IU/kg）分为3.4～4.0（第1组）、4.0～4.3（第2组）和4.3～4.6（第3组）3个组别。处理结果如表3。

从表3的数据可见，体重与FSH的比值（IU/kg）从3.4～4.6的范围内对供体超排处理后的平均黄体数、卵泡数、卵回收率及可用胚数3方面均无显著性差异（P＞0.05），FSH剂量与体重比值在3.4～4.0范围内（第1组）时的平均卵回收数、平均可用胚数、平均受精卵数都高于4.0～4.3组（第2组）和4.3～4.6（第3组）组，但差异均不显著（P＞0.05）。

表3 无角陶赛特供体羊FSH剂量与体重比值对超排效果的影响

4 讨论

4.1 促性腺激素剂量对超排效果的影响

促性腺激素的使用剂量、种类、生产厂家及批号的不同都会影响到超数排卵的效果。常用的有澳大利亚、新西兰及加拿大等国生产的激素制品及国内宁波和中科院等单位的产品。据研究者报道，进口激素的超数排卵效果要好于国产激素。如亓美玉［1］用新西兰产FSH与宁波产的FSH对72只德国肉用美利奴羊进行超排处理，试验表明，回收卵受精率及可用胚率两者间差异极显著（P＜0.01）。

不同地区不同研究者用宁波产的FSH因所用剂量差异较大而超排结果也有一定的波动。余文莉等［2］在内蒙古地区用宁波产FSH对绵羊进行超排时发现，各品种FSH总剂量均在150 IU上下浮动，适宜范围为120～180IU。张居农等［3］用宁波产FSH 300 IU取得了较好的效果。张锁林等［4］认为，FSH剂量为240 IU时的超排效果最好,可用胚平均数为26.2枚。宋庆伟等［5］用宁波产FSH128～145 IU对不同品种的肉用绵羊进行超排处理，获得平均可用胚6.23枚（691/111），可用胚率62.03%（691/1114）。王峰等［6］用宁波产FSH 120 IU处理供体波尔山羊获得可用胚数13.00枚±1.08枚。白喜云等［7］报道，宁波FSH剂量在280 IU以上时则卵巢上的卵泡数与黄体数在一定程度上呈正比例增加，但退化及未受精胚胎比率高达29.7%。剂量过小则起不到超数排卵的作用。其原因可能是每个超排处理的个体都有自身的生理环境，不同超排方案中各种措施及药物间的综合作用以及超排处理过程中各地区的气候、光照等环境条件所引起的供体羊生殖内分泌的不同及其对外源激素的敏感度不同。

在本试验中用不同剂量的FSH对供体羊进行超排处理结果变异较大，成母羊的平均卵回收数要高于育成羊，说明成母羊更适宜进行超数排卵处理，育成羊最好不用于超数排卵。

4.2 供体品种对超排效果的影响

不同品种的个体其繁殖能力不同。Fernie等［8］的试验结果表明，萨福克羊与特克塞尔羊超排时的平均黄体数分别为9.5个±0.63个和8.4个±0.65个，二者间差异不显著（P＞0.05）。张秀陶等［9］对相同时间不同品种绵羊的超排结果进行比较，得出黄体数和只均可用胚数依次为白头萨福克羊（10.8个、7.5枚）、东弗里生羊（10.8个、3.6枚）、陶赛特羊（9.2个、4.3枚）、特克塞尔羊（8.8个、3.5枚）。说明不同品种的供体对激素的反应变化不明显。

4.3 体重对超数排卵的影响

有研究表明，动物体重范围与所需药物的剂量范围有一定的相关性。对体重较小的供体，使用激素剂量过大时其卵巢反应强烈,发育的卵泡以及未排卵卵泡显著增多;对体重较大的供体,卵巢发育的卵泡较少,激素剂量过小则排卵卵泡明显减少。因此,一般体重大的动物应适当增加激素的剂量。高志英等［10］用120 IU宁波产FSH对德国肉用美利奴羊、无角陶赛特羊、特克塞尔羊3个品种的羊进行超排处理，得出不同体重之间黄体数、回收胚胎数差异不显著（P＞0.05），但可用胚胎数以41～50 kg组和51～60 kg组为好，71～80 kg组为最差，差异显著（P＜0.05）；胚胎可用率41～50 kg组显著高于其他各组（P＜0.01），51～60 kg组和61～70 kg组胚胎可用率显著高于71～80 kg组（P＜0.01），61～70 kg组胚胎可用率与71～80 kg组差异显著（P＜0.05）。张锁林等［4］的研究结果表明，在35～70 kg之间的不同体重羊进行超排的效果差异不显著（P＜0.05）。

本试验根据不同超排个体体重的高低给予不同剂量的FSH，结果显示3组间的平均黄体数、卵泡数、卵回收数及可用胚数间均无显著差异（P＞0.05），但第1组的平均黄体数、卵回收数、可用胚数、可用胚率及卵回收率均高于其他两组。本试验结果表明，在供体羊的选择与用药剂量上，体重似乎不是很重要的参数，这可能是因为本试验羊只的体重比较集中，所以都选择了相似的剂量。但为了获得较好的超排效果及减少对供体的刺激应以小剂量FSH处理为宜。但从具体超排工作来看，常因不同超排个体体重差异较大应根据不同体重的个体给予不同剂量的FSH以达到较好的超排效果。

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S826.3

A

2095-3887（2014）06-0023-04

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.06.006

2014-08-11

韩丽娟（1979-），女，畜牧师，研究生学历。研究方向：动物遗传育种与繁殖。