高效液相色谱法测定盐酸法舒地尔的含量

樊春艳，张 沂，刘秀芳，杨峥维

盐酸法舒地尔作为一种新型、高效的血管扩张药，具有抑制平滑肌收缩最终阶段的肌球蛋白轻链磷酸化，使血管扩张。临床上用于改善和预防蛛网膜下腔出血术后的脑血管痉挛及引起的脑缺血症状。笔者采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography，HPLC)测定盐酸法舒地尔含量，结果表明HPLC法方法简单，专属性强、灵敏度高。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 高效液相色谱仪及检测器为美国LAB ALLIANCE，色谱工作站ANASTAR。盐酸法舒地尔(批号 20081001、20081002、20081003，自制)，盐酸法舒地尔对照品(批号080920自行精制)。

1.2 色谱条件 色谱柱:phecda C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以1.0%三乙胺水溶液(用磷酸调节pH值至7.0)-甲醇(50∶50)为流动相;检测波长275 nm，流速1.0 ml/min，进样量20 μl，柱温25℃;理论板数按盐酸法舒地尔峰计算应不低于6 600。

1.3 溶液的制备 (1)对照品溶液配制:称取盐酸法舒地尔对照品30.0 mg，置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。再精密量取25 ml置50 ml量瓶中，加流动相至刻度摇匀，作为对照品溶液。(2)供试品溶液配制:称取盐酸法舒地尔样品29.3 mg，置100 ml量瓶中，加流动相溶解配成稀释至刻度，摇匀。再精密量取25 ml置50 ml量瓶中，加流动相至刻度摇匀，作为供试品溶液。

1.4 方法 采用HPLC法(中国药典)测定［1］。

1.4.1 线性关系考察 精密称取法舒地尔对照品60.5 mg，置 100 ml量瓶中，加流动相溶解配成0.605 g/L的溶液，再精密量取2、4、6、8、10 ml，分别置25 ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，得到系列浓度样品，分别量取20 μl，注入高效液相色谱仪，得到各浓度的峰面积，以峰面积(A)为纵坐标、样品浓度(C)为横坐标做回归计算。

1.4.2 重复性试验 取线性范围内的一种浓度(145.2 mg/L)，连续进样5次，测定5次的峰面积。

1.4.3 重现性试验 精密量取同一样品 (批号081001)6份，按“供试品溶液配制”方法制成供试品溶液，按上述色谱条件分别测定其含量。

1.4.4 溶液稳定性 取“线性试验”项下的样品(浓度为145.2 mg/L)，分别在0、4、8、12、24 h测定1次，共测定5次。

1.4.5 回收率试验 按规格2 ml:30 mg盐酸法舒地尔注射液的处方，称取盐酸法舒地尔(100.03%)低、中、高量样品各3份，分别置100 ml量瓶中，加入对应的辅料，再加水至刻度，摇匀，配制成9份样品。分别量取样品5 ml，置50 ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，制成低(120%)、中(150%)、高(180%)3种浓度样品各3份，作为供试品溶液，另精密称取盐酸法舒地尔对照品适量(100.03%)，加流动相稀释制成约150 mg/L的溶液作为对照品溶液，取供试品和对照品溶液分别注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算回收率。

2 结果

2.1 色谱图 盐酸法舒地尔对照品、供试品溶液和空白样品色谱见图1。

图1 法舒地尔对照品、供试品和空白样品溶液色谱图

2.2 线性关系 回归计算得标准曲线方程为A=1 604.619+15 608.345C(r=0.999 4，n=5)。

2.3 重复性试验 计算其相对标准偏差为0.71%。

2.4 重现性试验 平均含量为99.8%，RSD为0.75%。

2.5 溶液稳定性 RSD为0.72%。

2.6 回收率试验 按外标法以峰面积计算回收率，测得低、中、高浓度盐酸法舒地尔的平均回收率为99.4%，RSD为0.47%。

2.7 含量测定 按HPLC法测定，结果见表1。

表1 盐酸法舒地尔含量HPLC法测定结果

3 讨论

3.1 流动相的选择合理 用phecda C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，柱温25℃。以1.0%三乙胺水溶液(用磷酸调节pH值至7.0)与甲醇比例50∶50为流动相，所得峰形对称，保留时间满意，主峰与溶剂峰以及杂质峰分离完全。

3.2 现行盐酸法舒地尔标准采用国家食品药品监督管理局新药转正标准［2］采用高氯酸滴定法测定其含量，专属性差，且醋酸汞试液污染环境［3］。HPLC法在专属性、灵敏性等方面也优于高氯酸滴定法［3］，可以作为盐酸法舒地尔的含量测定方法。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录29.

［2］郭旭光，郭兴辉.HPLC法测定盐酸法舒地尔的含量及有关物质［J］.中国药事，2012，26(12):1380-1383.

［3］李金涛，干伟，邓媛媛，等.HPLC法测定盐酸法舒地尔的含量［J］.中国药师，2010，13(11):1609-1611.

(本文编辑:甘辉亮)