Fascin在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义＊

孟淑娟，陈小君，尹 丰，王 勇，于永利

（唐山钢铁集团有限公司医院1．病理科，2．泌尿科；3．曹妃甸区工人医院，河北 唐山063000）

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，90%以上为膀胱尿路上皮癌，其生物学行为表现为易发、多发和浸润转移。复发和浸润转移是膀胱癌治疗失败的主要原因。肿瘤细胞运动能力的增高是实现浸润和转移的前提。侵袭的肿瘤细胞常表现出特殊的形态特征［1］。Fascin蛋白是细胞骨架蛋白的一种，能与F－肌动蛋白紧密结合，与细胞运动能力和细胞间的相互作用密切相关，其作为结合细胞突起作用的结合蛋白，来辅助完成细胞附着、细胞之间相互作用和细胞移动的功能［2］。

1 对象与方法

1．1 研究对象 收集2009年9月～2012年10月在唐钢医院泌尿外科手术切除并保存完好的石蜡标本：膀胱尿路上皮癌109例，均为初发病例，术前均未接受放、化疗；年龄55～85岁，中位年龄68岁，其中男性78例，女性31例。腺性膀胱炎20例，年龄38～74岁，中位年龄58岁，其中男性15例，女性5例。对照组为10例癌旁膀胱粘膜组织，均取自开放性手术断端，距肿瘤边缘大于5cm，经病理确诊无癌组织浸润。所有病例的临床病理资料完整，经高年资病理医师复查H．E切片，证实病理诊断，并确定每例膀胱尿路上皮癌的组织学分级及临床分期。根据1973年WHO公布的膀胱恶性肿瘤病理分级方法：G1：28例，G2：45例，G3：36例。临床分期根据UICC－TNM标准：浅表型（Tis～T1）：63例，浸润型（T2～T4）：46例。肿瘤单发35例，多发74例。术后证实18例伴有淋巴结转移，91例无淋巴结转移。

1．2 实验试剂 鼠抗人Fascin单克隆抗体（工作液，克隆号FCN01），S－P通用二抗试剂盒，DAB显色剂均购自上海太阳生物科技有限公司。

1．3 试验方法

1．3．1 采用免疫组化S－P法染色 组织经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，切成厚度4μm组织切片；将组织切片贴附于经多聚赖氨酸处理的载玻片上，并经60℃烤2小时。实验步骤严格按试剂说明书进行。阳性对照用脾组织切片，BPS代替一抗作阴性对照。

1．3．2 免疫组化结果判定 所有组织切片的评分由两名病理医师在不知情的前提下各自独立进行，遇到结果不一致时，两名医师讨论，得出综合分析意见。

Fascin表达阳性信号为棕黄色至棕褐色颗粒，定位于细胞胞浆和（或）胞膜，依据染色强度和阳性细胞计数得分相乘评分。①染色强度计分标准：用以确定为阳性的乳腺癌标本的反应强度作为对照，无色为0分、表达强度弱于它为1分、与其相同为2分、比之强为3分。②阳性细胞计数：普通光镜相同放大倍数下计数阳性细胞数，少于25%为1分、25%～50%为2分、51%～75%为3分、75%以上为4分。两项得分相乘分为4个级别：0分（－）、1～4分（＋，弱阳性）、5～8分（＋＋，中度阳性）、9～12分（＋＋＋，强阳性）。统计学分析时，（＋）以上视为阳性。

1．4 统计学分析 运用SPSS 11．5统计软件，数据处理采用χ2检验和Spearman相关性检验，小样本资料采用Fisher精确概率检验法，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

Fascin在膀胱癌旁粘膜中无表达，20例腺性膀胱炎中2例（10%）表达弱阳性，其余表达阴性；109例膀胱尿路上皮癌中18例（16．5%）表达阴性，91例（83．5%）表达阳性：其中39例（35．8%）为弱阳性，35例（32．1%）为中度阳性，17例（15．6%）为强阳性。膀胱癌旁粘膜组与腺性膀胱炎组表达差异无显著性（P＞0．05），膀胱癌旁粘膜组与膀胱尿路上皮癌组、腺性膀胱炎组与膀胱尿路上皮癌组比较，差异有显著性（P＜0．05），见表1，图1。

表1 Fascin在膀胱癌旁粘膜、腺性膀胱炎及膀胱尿路上皮癌中的表达Table 1 The expression of fascin in bladder cancer adjacent mucosa，cystitis glandular and bladder urothelial carcinoma

图1 Fascin在膀胱尿路上皮癌中的表达（IHC×200）Fig．1 Negative expression of fascin in bladder urothelial carcinoma（IHC×200）

Fascin在不同组织学分级的膀胱尿路上皮癌中的表达阳性率分别为：G1：71．4%（20／28），G2：80．0%（36／45），G3：97．2%（35／36），Fascin的表达阳性率在不同的组织学分级中，总体有显著性差异（P＜0．05）。不同临床分期Fascin表达的阳性率为浅表型（Tis～T1）74．6%（47／63），浸润型（T2～T4）95．7%（44／46），Fascin在膀胱尿路上皮癌浅表型（Tis～T1）及浸润型（T2～T4）分组间阳性率的差异显著（P＜0．05）。Fascin有淋巴结转移组阳性率为100%（18／18）、无淋巴结转移组为80．2%（73／91），其阳性率有显著性差异（P＜0．05），见表2。

表2结果显示，在膀胱尿路上皮癌的患者中，Fascin的表达与性别、肿瘤数目等临床病理特征无关，而与肿瘤临床分期和组织学分级则呈正相关。随着膀胱尿路上皮癌的临床分期和组织学分级的增高，肿瘤细胞中Fascin表达增强，有淋巴结转移的Fascin的表达明显高于无淋巴结转移的。

表2 膀胱尿路上皮癌中Fascin的表达与临床病理特征的关系Table 2 The relationship between expression of Fascin in bladder urothelial carcinoma and clinical pathological parameters

3 讨论

Fascin蛋白是细胞骨架蛋白的一种，分子量为55kD，由Bryan等［3］首先在海胆卵母细胞胞质中发现，其结构独特、进化保守，广泛存在于无脊椎动物与脊椎动物之中。Fascin在正常上皮细胞中不表达或较低，而在骨骼肌和平滑肌细胞、树突细胞、神经元和神经胶质细胞、血管内皮细胞等一些特殊的细胞中高表达［4］。研究发现在人体多种上皮来源的肿瘤细胞中出现Fascin的表达上调，并与这些肿瘤的高病理分级和临床分期及侵袭转移等相关［5～8］。因此，在上皮恶性肿瘤中Fascin的表达上调是一种普遍现象，与肿瘤的恶性生物学行为存在一定的关系。mi－133a和miR－145存在FSCN1mRNA 的靶序列，可直接与FSCN1mRNA结合，从而抑制FSCN1mRNA和蛋白的表 达［9］。 实 验 发 现 转 染 miR－133a、mi－145 和 si－FSCN1的膀胱癌细胞活动力明显被抑制，同时Fascin在侵袭性膀胱癌中的表达明显高于非侵袭性膀胱癌。有研究表明Fascin蛋白在正常膀胱黏膜中不表达，在膀胱良性病变如膀胱炎（腺性、囊性）、经典的外生性乳头状瘤、内翻性乳头状瘤中表达无增加；但在表浅乳头状膀胱癌中42%呈片状或弱弥漫表达、浸润性膀胱癌95%呈强弥漫分布；并且Fascin表达增强常常出现在微浸润前沿肿瘤细胞中；这些均提示Fascin表达增强与膀胱癌侵袭力增加具有一致性［10，11］。Fascin在膀胱癌的浸润中发挥着重要作用，Fascin在浸润性尿路上皮癌中的表达明显高于非浸润性尿路上皮癌，但对于肿瘤的组织学分级的关系还需要进一步研究。

本实验说明Fascin的表达可能对膀胱癌的侵袭和淋巴结转移具有一定的促进作用，Fascin的高表达使患者更易出现淋巴结的转移，膀胱癌分级越高，患者预后越差。这与以往Fascin蛋白在上皮性肿瘤组织中的研究结果一致。

研究证实Fascin的过表达会导致肿瘤细胞增殖周期变短，细胞膜突起增多，细胞间连接消失，粘附力下降，细胞运动能力增强［12］。综合分析Fascin在膀胱尿路上皮癌中表达情况，发现在组织学分级较高的肿瘤中以及肿瘤浸润边缘细胞Fascin蛋白染色较强，肿瘤分化越低其染色强度越强。同时可见伪足样突起的细胞，淋巴结转移组中该肿瘤细胞数较多。分析其原因，可能为Fascin表达使肿瘤细胞的细胞骨架重排，细胞膜突起增多，使其具有较强的侵袭、转移能力，与高级别肿瘤更具有侵袭性，更易发生转移相关。在试验中，在乳头状尿路上皮癌中，分化好的乳头中央轴心血管染色阳性，而紧邻其膀胱癌细胞染色阳性，但是乳头边缘的细胞却染色阴性，形成明显的对比。分析原因，可能与靠近乳头轴心的肿瘤细胞侵袭性较强有关，具体机制和原因有待进一步研究。

在上皮性来源的肿瘤中Fascin表达上调具有普遍性，但阳性表达率有明显差异，在乳腺癌中阳性率只有16%［12］，而在非小细胞肺癌中阳性率为98%［13］。Fascin的高表达与肿瘤的恶性程度和患者预后有一定的联系，但其调节通路还在进一步研究中。有观点认为不同组织来源的肿瘤在发生机制上可能存在差异，同一肿瘤也可能受多种途径调节，但Fascin表达与各肿瘤不同的发生机制存在或多或少的联系。

4 结论

Fascin蛋白在不同临床分期和组织学分级及有无淋巴结转移的膀胱癌中的阳性率存在差异，本研究结果提示可将其作为预测膀胱癌恶性程度及患者预后的一种指标。

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