微乳毛细管电色谱电动进样场放大堆积法检测化妆品中糖皮质激素

李娟等

1引言

糖皮质激素是一类疏水性较强的中性化合物，具有抗炎、抗过敏、抑制纤维细胞增生、减少5羟色胺形成等作用，加入化妆品中可达到快速美白效果。但是，长期使用含有糖皮质激素的化妆品会产生毛囊萎缩、面部血管扩张、高血压、免疫功能下降等副作用[1]，对人体造成严重伤害。我国卫生部颁发的《化妆品卫生规范》（2007版）中明确规定糖皮质激素为化妆品中的禁用组分。

为了解化妆品中糖皮质激素利用现状，有必要对其进行适当的监测。目前糖皮质激素分析方法主要有高效液相色谱法[2～4]、 液相色谱质谱联用法[5，6]、 固相萃取液相色谱法[7，8]和毛细管电泳法（CE）[9～11]等。采用液相色谱法，方法稳定，但是溶剂消耗大且检测灵敏度较低；液相色谱质谱联用法仪器价格昂贵；固相萃取液相色谱联用需要对样品进行净化前处理和离线预富集，操作繁琐且富集倍数较低；毛细管电泳分离方法因耗时少、分离效率高，在糖皮质激素分析中得到广泛应用，但灵敏度和检测限方面都较难达到微量或痕量检测的要求。因此，针对糖皮质激素，建立一种简单、准确、高灵敏度的检测方法，对于化妆品的质量监控有重要的意义。

微乳毛细管电色谱法（Microemulsion electrokinetic chromatography， MEEKC）对疏水中性物质具有良好的分离能力，但是MEEKC在线富集的方法报道较少[12～14]。场放大堆积（Fieldamplified sample stacking，FASS）是一种常用的富集技术，与MEEKC联用能兼顾分离选择性和富集效果。电动进样（Electric injection）不仅增加富集倍数，还增强了进样选择性，将富集作用扩展到进样阶段。但是，糖皮质激素中性不带电，通常采用流体力学进样，不能直接进行电动进样。本研究通过调节样品基质pH值，促使分析物发生电离，能够以电迁移模式进入毛细管。本研究建立了MEEKCFASS联用场放大进样同时检测化妆品中6种糖皮质激素的方法，与常规毛细管电泳法相比，方法灵敏度提高了2个数量级。本方法操作过程简单、样品用量少、经济快速，具有良好的分离度和灵敏度。

2实验部分

2.1仪器与试剂

TH3100型高效毛细管电泳仪（保定天惠分离科学研究所），熔融石英毛细管（河北永年瑞沣光导纤维厂，65 cm×50 μm，有效长度50 cm）。SK2200H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）； NW10VF0酸度计（郑州南北仪器设备有限公司）；TGL16G高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；旋转蒸发仪（巩义市英峪高科仪器厂）；Milli Q Refrence超纯水机（美国Millipore公司）。

泼尼松、氢化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松标准品（J&K公司）。十二烷基硫酸钠（SDS）、硼砂、HBO3、NaH2PO4、NaOH、正丁醇、正辛烷（分析纯，上海国药集团化学试剂有限公司）。实验用水均为超纯水。化妆品样品购于无锡某超市。

2.2实验方法

2.2.1标准溶液的配制

称取适量泼尼松、氢化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松分别加甲醇溶解，配制成 2 g/L的6种标准储备液，于4 ℃冰箱内避光保存，使用时根据需要稀释成不同浓度的标准液。

3结果与讨论

3.1样品基质pH值及浓度的影响

采用电动进样时中性分析物的解离度会显著影响FASS的富集效果。糖皮质激素在中性或酸性条件下难解离，而随着碱性的增强， 解离度增大，因此选择碱性样品基质有利于电动进样。由于背景缓冲液为强酸性，碱性过强可能会发生背景缓冲液区带与样品区带发生酸碱中和，使样品和样品区带均呈电中性，造成严重峰裂分和重叠或不出峰。实验考察了pH 7.5～9.5的硼砂缓冲液作为样品基质，发现在pH 8.5时峰形良好，富集效果最好。

硼砂缓冲液的浓度影响样品基质的离子强度和电导率，理论上，低浓度基质溶液在样品进口端形成低电场，能推动更多的样品离子进入毛细管。实验结果如图1所示，硼砂浓度在1～ 9 mmol/L范围内，1 mmol/L硼砂缓冲液富集效果最佳。若硼砂缓冲液浓度低于1 mmol/L，过低的离子强度和电导率会影响样品区带的电场强度，场强过低引起分析物迁移速度过慢，对富集不利，且过低浓度的基质在进样端口形成的电场过低，造成样品进样不完全，在进样阶段存在样品损失，降低富集效率，造成实验结果不稳定，甚至不出峰。因此，样品基质浓度选择为1 mmol/L。

3.2水柱长度的影响

1引言

糖皮质激素是一类疏水性较强的中性化合物，具有抗炎、抗过敏、抑制纤维细胞增生、减少5羟色胺形成等作用，加入化妆品中可达到快速美白效果。但是，长期使用含有糖皮质激素的化妆品会产生毛囊萎缩、面部血管扩张、高血压、免疫功能下降等副作用[1]，对人体造成严重伤害。我国卫生部颁发的《化妆品卫生规范》（2007版）中明确规定糖皮质激素为化妆品中的禁用组分。

为了解化妆品中糖皮质激素利用现状，有必要对其进行适当的监测。目前糖皮质激素分析方法主要有高效液相色谱法[2～4]、 液相色谱质谱联用法[5，6]、 固相萃取液相色谱法[7，8]和毛细管电泳法（CE）[9～11]等。采用液相色谱法，方法稳定，但是溶剂消耗大且检测灵敏度较低；液相色谱质谱联用法仪器价格昂贵；固相萃取液相色谱联用需要对样品进行净化前处理和离线预富集，操作繁琐且富集倍数较低；毛细管电泳分离方法因耗时少、分离效率高，在糖皮质激素分析中得到广泛应用，但灵敏度和检测限方面都较难达到微量或痕量检测的要求。因此，针对糖皮质激素，建立一种简单、准确、高灵敏度的检测方法，对于化妆品的质量监控有重要的意义。

微乳毛细管电色谱法（Microemulsion electrokinetic chromatography， MEEKC）对疏水中性物质具有良好的分离能力，但是MEEKC在线富集的方法报道较少[12～14]。场放大堆积（Fieldamplified sample stacking，FASS）是一种常用的富集技术，与MEEKC联用能兼顾分离选择性和富集效果。电动进样（Electric injection）不仅增加富集倍数，还增强了进样选择性，将富集作用扩展到进样阶段。但是，糖皮质激素中性不带电，通常采用流体力学进样，不能直接进行电动进样。本研究通过调节样品基质pH值，促使分析物发生电离，能够以电迁移模式进入毛细管。本研究建立了MEEKCFASS联用场放大进样同时检测化妆品中6种糖皮质激素的方法，与常规毛细管电泳法相比，方法灵敏度提高了2个数量级。本方法操作过程简单、样品用量少、经济快速，具有良好的分离度和灵敏度。

2实验部分

2.1仪器与试剂

TH3100型高效毛细管电泳仪（保定天惠分离科学研究所），熔融石英毛细管（河北永年瑞沣光导纤维厂，65 cm×50 μm，有效长度50 cm）。SK2200H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）； NW10VF0酸度计（郑州南北仪器设备有限公司）；TGL16G高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；旋转蒸发仪（巩义市英峪高科仪器厂）；Milli Q Refrence超纯水机（美国Millipore公司）。

泼尼松、氢化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松标准品（J&K公司）。十二烷基硫酸钠（SDS）、硼砂、HBO3、NaH2PO4、NaOH、正丁醇、正辛烷（分析纯，上海国药集团化学试剂有限公司）。实验用水均为超纯水。化妆品样品购于无锡某超市。

2.2实验方法

2.2.1标准溶液的配制

称取适量泼尼松、氢化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松分别加甲醇溶解，配制成 2 g/L的6种标准储备液，于4 ℃冰箱内避光保存，使用时根据需要稀释成不同浓度的标准液。

3结果与讨论

3.1样品基质pH值及浓度的影响

采用电动进样时中性分析物的解离度会显著影响FASS的富集效果。糖皮质激素在中性或酸性条件下难解离，而随着碱性的增强， 解离度增大，因此选择碱性样品基质有利于电动进样。由于背景缓冲液为强酸性，碱性过强可能会发生背景缓冲液区带与样品区带发生酸碱中和，使样品和样品区带均呈电中性，造成严重峰裂分和重叠或不出峰。实验考察了pH 7.5～9.5的硼砂缓冲液作为样品基质，发现在pH 8.5时峰形良好，富集效果最好。

硼砂缓冲液的浓度影响样品基质的离子强度和电导率，理论上，低浓度基质溶液在样品进口端形成低电场，能推动更多的样品离子进入毛细管。实验结果如图1所示，硼砂浓度在1～ 9 mmol/L范围内，1 mmol/L硼砂缓冲液富集效果最佳。若硼砂缓冲液浓度低于1 mmol/L，过低的离子强度和电导率会影响样品区带的电场强度，场强过低引起分析物迁移速度过慢，对富集不利，且过低浓度的基质在进样端口形成的电场过低，造成样品进样不完全，在进样阶段存在样品损失，降低富集效率，造成实验结果不稳定，甚至不出峰。因此，样品基质浓度选择为1 mmol/L。

3.2水柱长度的影响

1引言

糖皮质激素是一类疏水性较强的中性化合物，具有抗炎、抗过敏、抑制纤维细胞增生、减少5羟色胺形成等作用，加入化妆品中可达到快速美白效果。但是，长期使用含有糖皮质激素的化妆品会产生毛囊萎缩、面部血管扩张、高血压、免疫功能下降等副作用[1]，对人体造成严重伤害。我国卫生部颁发的《化妆品卫生规范》（2007版）中明确规定糖皮质激素为化妆品中的禁用组分。

为了解化妆品中糖皮质激素利用现状，有必要对其进行适当的监测。目前糖皮质激素分析方法主要有高效液相色谱法[2～4]、 液相色谱质谱联用法[5，6]、 固相萃取液相色谱法[7，8]和毛细管电泳法（CE）[9～11]等。采用液相色谱法，方法稳定，但是溶剂消耗大且检测灵敏度较低；液相色谱质谱联用法仪器价格昂贵；固相萃取液相色谱联用需要对样品进行净化前处理和离线预富集，操作繁琐且富集倍数较低；毛细管电泳分离方法因耗时少、分离效率高，在糖皮质激素分析中得到广泛应用，但灵敏度和检测限方面都较难达到微量或痕量检测的要求。因此，针对糖皮质激素，建立一种简单、准确、高灵敏度的检测方法，对于化妆品的质量监控有重要的意义。

微乳毛细管电色谱法（Microemulsion electrokinetic chromatography， MEEKC）对疏水中性物质具有良好的分离能力，但是MEEKC在线富集的方法报道较少[12～14]。场放大堆积（Fieldamplified sample stacking，FASS）是一种常用的富集技术，与MEEKC联用能兼顾分离选择性和富集效果。电动进样（Electric injection）不仅增加富集倍数，还增强了进样选择性，将富集作用扩展到进样阶段。但是，糖皮质激素中性不带电，通常采用流体力学进样，不能直接进行电动进样。本研究通过调节样品基质pH值，促使分析物发生电离，能够以电迁移模式进入毛细管。本研究建立了MEEKCFASS联用场放大进样同时检测化妆品中6种糖皮质激素的方法，与常规毛细管电泳法相比，方法灵敏度提高了2个数量级。本方法操作过程简单、样品用量少、经济快速，具有良好的分离度和灵敏度。

2实验部分

2.1仪器与试剂

TH3100型高效毛细管电泳仪（保定天惠分离科学研究所），熔融石英毛细管（河北永年瑞沣光导纤维厂，65 cm×50 μm，有效长度50 cm）。SK2200H超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）； NW10VF0酸度计（郑州南北仪器设备有限公司）；TGL16G高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；旋转蒸发仪（巩义市英峪高科仪器厂）；Milli Q Refrence超纯水机（美国Millipore公司）。

泼尼松、氢化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松标准品（J&K公司）。十二烷基硫酸钠（SDS）、硼砂、HBO3、NaH2PO4、NaOH、正丁醇、正辛烷（分析纯，上海国药集团化学试剂有限公司）。实验用水均为超纯水。化妆品样品购于无锡某超市。

2.2实验方法

2.2.1标准溶液的配制

称取适量泼尼松、氢化可的松、醋酸可的松、丙酸氟替卡松、曲安奈德、地塞米松分别加甲醇溶解，配制成 2 g/L的6种标准储备液，于4 ℃冰箱内避光保存，使用时根据需要稀释成不同浓度的标准液。

3结果与讨论

3.1样品基质pH值及浓度的影响

采用电动进样时中性分析物的解离度会显著影响FASS的富集效果。糖皮质激素在中性或酸性条件下难解离，而随着碱性的增强， 解离度增大，因此选择碱性样品基质有利于电动进样。由于背景缓冲液为强酸性，碱性过强可能会发生背景缓冲液区带与样品区带发生酸碱中和，使样品和样品区带均呈电中性，造成严重峰裂分和重叠或不出峰。实验考察了pH 7.5～9.5的硼砂缓冲液作为样品基质，发现在pH 8.5时峰形良好，富集效果最好。

硼砂缓冲液的浓度影响样品基质的离子强度和电导率，理论上，低浓度基质溶液在样品进口端形成低电场，能推动更多的样品离子进入毛细管。实验结果如图1所示，硼砂浓度在1～ 9 mmol/L范围内，1 mmol/L硼砂缓冲液富集效果最佳。若硼砂缓冲液浓度低于1 mmol/L，过低的离子强度和电导率会影响样品区带的电场强度，场强过低引起分析物迁移速度过慢，对富集不利，且过低浓度的基质在进样端口形成的电场过低，造成样品进样不完全，在进样阶段存在样品损失，降低富集效率，造成实验结果不稳定，甚至不出峰。因此，样品基质浓度选择为1 mmol/L。

3.2水柱长度的影响