高效液相色谱法测定亚油酸甲酯含量

冯文娟，刘圣鹏，徐泽平，马杰

（黄河三角洲京博化工研究院有限公司，山东滨州256500）

高效液相色谱法测定亚油酸甲酯含量

冯文娟，刘圣鹏，徐泽平，马杰

（黄河三角洲京博化工研究院有限公司，山东滨州256500）

建立一种高效液相色谱测定亚油酸甲酯含量的方法。采用Intertsil ODS-SP柱，紫外检测器，检测波长为243 nm，流动相为甲醇-水（体积比为95∶5）混合液，流速为0.8 mL/min，进样体积为20 μL，柱温为30℃。结果可知，亚油酸甲酯质量浓度和峰面积的线性回归方程是y=（2E+06）x-43 628，R2=0.999 9，线性范围是0～4.16 g/L，平均加样回收率为99.92%。

高效液相色谱；亚油酸甲酯；紫外检测器

亚油酸甲酯是动植物油脂与甲醇经酯交换反应制得的脂肪酸甲酯中的一种产物，可作为一种替代化工柴油的可再生的环保能源而广受关注[1-4]，而目前对其的检测方法还存在着很多的问题和不足，用于检测脂肪酸甲酯的方法大多采用气相色谱法[5-6]，气相色谱法虽然灵敏度高，但是对于测定相对分子质量较大、沸点较高、不易挥发的物质存在一定的局限性[7-10]。现有的报道中一般都是采用高效液相色谱法测定脂肪酸[11]，采用高效液相色谱法测定脂肪酸甲酯的研究较少。李一哲等[12]采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）-蒸发光散射检测器（evaporative light-scattering detector，ELSD）和C18色谱柱测定生物柴油中常见的脂肪酸及脂肪酸甲酯含量。刘涛等[13]利用HPLC-蒸发光检测器及C18反相色谱柱，以乙腈和二氯甲烷的混合液为流动相，测定了混合样中脂肪酸甘油酯的含量，没有涉及脂肪酸甲酯的测定。本研究建立了一种HPLC-紫外检测器（ultraviolet detector，UVD）测定亚油酸甲酯的方法，以甲醇和水的混合液为流动相，毒性较小，同时能够弥补气相色谱法的不足，能有效快速地对亚油酸甲酯进行定性定量分析。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

亚油酸甲酯（C19H34O2，纯度≥99%）标准品：长沙晶康新材料科技有限公司；甲醇（色谱级）：天津市科密欧化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

LC-20AT高效液相色谱：日本岛津公司。

1.3 试验方法

1.3.1 标准曲线的绘制

准确称取0.50 g亚油酸甲酯标准品，用甲醇溶解，配制成质量浓度为5.00 g/L的亚油酸甲酯标准液。然后用甲醇稀释为0、0.83 g/L、1.67 g/L、2.50 g/L、3.33 g/L、4.16 g/L质量浓度梯度的溶液，按照下述色谱条件进行液相色谱分析，以亚油酸甲酯质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并计算获得线性回归方程。

1.3.2 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（体积比为95∶5）混合液，二元高压梯度洗脱；流速：0.8 mL/min；进样体积：20 μL；柱温：30℃；紫外检测器：SPD-20A；检测波长：243 nm。

1.3.3 精密度试验

配制质量浓度为3.33 g/L的亚油酸甲酯标准液按照上述色谱条件重复测定5次。

1.3.4稳定性试验

质量浓度为3.33 g/L的亚油酸甲酯标准液在室温条件下储存1 h、2 h、3 h、4 h、5 h后按照上述色谱条件测定亚油酸甲酯的含量。

1.3.5 准确性试验

质量浓度为3.33 g/L的亚油酸甲酯标准液分别配制5次，按照上述色谱条件测定亚油酸甲酯的含量。

1.3.6 加样回收率试验

准确称取0.333 0 g亚油酸甲酯标准品于50 mL容量瓶中，以甲醇定容制得样品溶液。以质量浓度为3.33g/L的亚油酸甲酯标准液为对照品。取0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL的样品溶液分别与2.0 mL、1.5 mL、1.0 mL、0.5 mL、0 mL的亚油酸甲酯标准液混合均匀，243 nm处测定峰面积，计算亚油酸甲酯的质量浓度。

2 结果与分析

2.1 亚油酸甲酯标准曲线

分别以亚油酸甲酯质量浓度（x）和峰面积（y）为横坐标和纵坐标绘制标准曲线（如图1所示），得到的回归方程为y=（2E+06）x-43 628，R2=0.999 9。结果表明，在亚油酸甲酯质量浓度为0～4.16 g/L范围内，亚油酸甲酯质量浓度与峰面积有良好的线性关系，亚油酸甲酯标准液的色谱图见图2。

图1 亚油酸甲酯的标准曲线Fig.1 Standard curve of methyl linoleate

图2 亚油酸甲酯标准液的色谱图Fig.2 Chromatogram of standard methyl linoleate

2.2 精密度试验

对质量浓度为3.33g/L的亚油酸甲酯溶液按色谱条件测定亚油酸甲酯的含量，由以下公式计算标准偏差（standard deviation，SD）和相对标准偏差（relative standard deviation，RSD），结果见表1。

式中：Sqr代表平方根，∑代表总和，xi代表每个亚油酸甲酯峰面积值，xˉ代表x的算术平均值，n代表测定次数。

表1 精密度试验结果Table 1 Results of precision experiment

表1结果表明，溶液重复测定5次得到的结果的RSD值为0.17%，说明了此测定方法的精密度较高。

2.3 稳定性试验

质量浓度为3.33 g/L的亚油酸甲酯在室温条件下储存1 h、2 h、3 h、4 h、5 h后按上述色谱条件测定其含量。表2结果表明，5组样之间的RSD值为0.23%，说明亚油酸甲酯在室温条件下5 h内基本稳定。

表2 稳定性试验结果Table 2 Results of stability experiment

2.4 准确性试验

表3 准确性试验结果Table 3 Results of repeated experiment

分别配制5组质量浓度为3.33 g/L的亚油酸甲酯溶液，并按照上述色谱条件测定其含量。表3结果表明，5组样品之间的RSD值＜1%，说明了此测定方法准确性较高。

2.5 平均加样回收率试验

表4 平均加样回收率结果Table 4 Results of average adding recovery experiment

测定不同浓度的亚油酸甲酯样品的平均加样回收率，测定结果见表4。5个样品的平均加样回收率为99.92%，RSD值为0.49%，说明了此测定方法准确度高。

3 结论

建立了一种高效液相色谱测定亚油酸甲酯含量的方法，该方法能够检测相对分子质量较大、沸点较高、不易挥发的物质，不需要昂贵的质谱仪及内标物，分析迅速，弥补了气相色谱的不足[14-15]。以甲醇和水的混合液为流动相，对人体的毒性较小。通过方法学验证结果表明，高效液相色谱法测定亚油酸甲酯含量的方法精密度和准确性较高，其RSD都在1%以内。加样回收率良好，为99.92%，RSD为0.49%，说明了HPLC-UVD法能有效快速地对亚油酸甲酯进行定性定量分析。

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Determination of methyl linoleate by HPLC

FENG Wenjuan,LIU Shengpeng,XU Zeping,MA Jie
(Chambroad Chemical Industry Research Institute Co.,Ltd.,Binzhou 256500,China)

A method for methyl linoleate determination was established by HPLC.The chromatographic condition was as follows:Inertsil ODS-SP column,ultraviolet detection wavelength 243 nm,mixed solution of methanol and water(volume ratio 95∶5)as mobile phase,flow rate 0.8 ml/min,injection volume 20 μl,column temperature 30℃.Results showed that the regression equation of methyl linoleate content wasy=（2E+06）x-43 628, R2=0.999 9.The liner range was 0-4.16 g/L and the average recovery was 99.92%.

HPLC;methyl linoleate;ultraviolet detector

O657.7

A

0254-5071（2014）11-0155-03

10.11882/j.issn.0254-5071.2014.11.036

2014-10-16

山东省科技发展计划项目（2013YD21001）

冯文娟（1986-），女，助理工程师，硕士，研究方向为食品工程。