水蛭的研究进展*

2014-02-10周军

天津药学 2014年4期

关键词：蚂蟥水蛭脑缺血

周军

(天津市药品检验所,天津 300070)

水蛭的研究进展*

周军

(天津市药品检验所,天津 300070)

水蛭为《中国药典》2010年版收载的动物药，其为水蛭科动物蚂蟥(WhitmaniapigraWhitman)、水蛭(HinudenipponicaWhitman)或柳叶蚂蟥(WhitmaniaacranulataWhitman)的干燥体[1]。水蛭为活血消癥药，具有破血通经，逐瘀消瘕的功效；用于血瘀经闭，癥瘕痞块，中风偏瘫，跌扑损伤。中医在治疗因瘀血所致的疾病中广泛使用水蛭，近年发现水蛭在治疗脑缺血性疾病和癌症方面疗效确切。同时，随着科学水平的提高，对水蛭的质量控制研究逐步深入，建立了包括水蛭中蝶啶类活性成分、总多糖、可溶性蛋白质、磷脂、次黄嘌呤等成分的含量测定方法；此外，为从DNA分子水平对水蛭和蚂蟥进行区分，建立和优化水蛭ISSR-PCR反应体系。本文对近年水蛭药材的药理作用及质量研究状况进行总结，为水蛭的开发利用提供参考。

水蛭，药理作用，含量测定，质量控制

水蛭俗名蚂蟥、马鳖，属环节动物门，蛭纲，颚蛭目，水蛭科，在陆地淡水环境生长繁殖，是我国传统的中药。《中国药典》2010年版一部收载水蛭药材的基源共有3种，分别为水蛭科动物蚂蟥WhitmaniapigraWhitman、水蛭HinudenipponicaWhitman或柳叶蚂蟥WhitmaniaacranulataWhitman的干燥体[1]。中医认为，水蛭具有破血通经，逐瘀消瘕的作用；在临床用于血瘀经闭，癥瘕痞块，中风偏瘫，跌扑损伤等病症。水蛭的药用始载于《神农本草经》，中医临床应用具有悠久的历史，尤其在治疗因瘀血所致的疾病中被广泛使用。近年发现，水蛭在治疗脑缺血性疾病和癌症方面疗效确切。本文对近年水蛭药材的药理作用及质量研究状况进行总结，为水蛭的开发利用提供参考。

1 药理作用研究的进展

1.1对脑缺血的影响水蛭功效为破血逐瘀消癥，是中医治疗脑缺血病要药，临床疗效确切。研究表明[2],微粉水蛭能够降低脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能评分，降低丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平，降低细胞间黏附分子(ICAM)水平，提高超氧化物歧化酶(SOD)活力，水蛭微粉高、中组的神经功能评分明显低于粗粉组。水蛭微粉高组大鼠脑组织中的MDA、血清中的ICAM水平明显低于粗粉组，说明水蛭能够明显改善脑缺血再灌注损伤。

1.2对S180肿瘤及血管新生的影响水蛭中特有的水蛭素活性因子具有极强的抗凝血作用，利于药物进入肌体病变组织内抑制和杀死肿瘤细胞。实验表明，水蛭素活性因子可以延长荷瘤鼠的生存时间，提高细胞免疫，诱导肿瘤细胞凋亡[3]。

1.3水蛭抑制肿瘤血管生成的作用及其机制实验表明，水蛭能通过改善肿瘤缺氧微环境抑制肿瘤血管生成来发挥抗肿瘤作用，其机制可能是通过降低HIF-1α蛋白水平和mRNA的表达，以及降低由低氧诱导因子-1(HIF-1)α所介导的靶基因血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达来实现的[4]。

1.4水蛭可抑制肾小球系膜细胞增生研究发现，水蛭可抑制肾小球系膜细胞的增生，其机制为：①水蛭单药及其与黄芪组合均可降低血清生长转移因子-β1(TGF-β1)、Ⅳ型胶原(Col-IV)和纤维连接蛋白(FN)的含量；试验证明，水蛭可以剂量依赖地抑制大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM Cs)产生Col-Ⅳ，且作用效果明显好于黄芪；②水蛭可通过阻止大鼠系膜细胞(HBZY-1)由Go/G期向s期进展，抑制系膜细胞的增殖[5]。

2 质量控制研究的进展

2.1RP-HPLC测定水蛭中3种蝶啶类活性成分采用RP-HPLC测定水蛭中3种活性成分水蛭甲素、水蛭乙素、水蛭丙素的含量。以甲醇-0.05%三氟乙酸水溶液(20∶80)为流动相，检测波长为354 nm。测定结果显示，不同来源的水蛭药材中上述3种成分的含量差异较大[6]。

2.2分光光度法测定水蛭中可溶性蛋白质的含量水蛭是动物类药材，而蛋白质为动物药材中的有效物质基础，其可溶性蛋白的含量可以在一定程度上反应药材的质量。本实验以牛血清蛋白为对照物，考马斯亮蓝G-250显色，采用分光光度法，测定水蛭药材中可溶性蛋白质含量[7]。

2.3分光光度法测定水蛭药材中总多糖的含量本实验以葡萄糖为对照物，苯酚-硫酸试剂显色，采用分光光度法，对水蛭药材中总多糖含量进行测定，从一定程度上可以评价水蛭药材的质量[8]。

2.4水蛭抗凝血活性成分的研究本研究采用血浆复钙时间为指标，对从水蛭中分得3个抗凝血活性多肽进行结构和分子量测定，结果表明，上述3个成分相对分子质量均在1万以下，都属于糖蛋白类[9]。

2.5中药水蛭经炮制后的成分变化研究实验研究了水蛭经炮制后，氨基酸和甾体类成分组成的变化情况，以求为水蛭的炮制方法提供一定的化学依据。实验中采用HPLC-柱后衍生化法测定了水蛭炮制后氨基酸组成的变化[10]。

2.6水蛭简单序列重复区间扩增多态性分子标记(ISSR-PCR)反应体系的建立及优化水蛭种类较多，分布较广，不同种之间的药用效果具有明显差异。因此，从分子水平上对水蛭进行研究，为水蛭的开发和利用提供科学指导。经实验确定了水蛭ISSR-PCR反应的最佳体系，同时用10份水蛭个体对最佳体系进行了稳定性验证[11]。

2．7HPLC测定水蛭仿生酶解有效部位中次黄嘌呤及尿苷本实验模拟人体消化过程，对水蛭药材先以胃蛋白酶酶解、再以胰蛋白酶酶解的仿生酶解方法；最后以甲醇为流动相A，水为流动相B，进行梯度洗脱，采用HPLC同时测定水蛭中次黄嘌呤及尿苷的含量[12]。

2．8蚂蟥和水蛭种间遗传变异和系统关系的ITS序列分析运用ITS 测序分析我国不同地区蚂蟥W pigra、水蛭H nipponia核糖体ITS碱基序列差异，用MEGA 4.0软件中的MP法构建的分子进化树。通过对蚂蟥、水蛭ITS基因片段遗传特征的研究发现其种内变异很小，在14个群体中有45个位点发生转换。MP系统树将14个种群蚂蟥和水蛭分为两大类群[13]。

2．9水蛭药材中总磷脂含量测定实验以磷酸二氢钾为对照物，钼蓝试剂显色，采用分光光度法测定水蛭药材中总磷脂的含量[14]。

2．10柱前衍生HPLC法测定水蛭中氨基酸的含量实验用异硫氰酸苯酯衍生化法，使水蛭的氨基酸与异硫氰酸苯酯反应，生成苯氨基硫甲酰衍生物，采用HPLC法测定水蛭中水解及游离的6种氨基酸：L-谷氨酸、甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸的含量[15]。

中医临床使用的药物中，水蛭在治疗中风、高血压、血瘀、闭经、跌打损伤等方面具有显著的疗效。随着对水蛭研究的不断深入，其在治疗严重威胁人类健康的心脑血管疾病和癌症等疾病方面，显示出巨大的优越性和广阔的前景。

1 中国药典[S]．一部.2010:77

2 李克明，武继彪，隋在云.微粉水蛭对脑缺血再灌注损伤大鼠的影响[J].中药药理与临床，2011，27(4):56-57

3 牟忠祥，任青华，张博.水蛭素活性因子对S180肿瘤及血管新生的影响[J].医学研究杂志，2011，40(2):40-42

4 李小菊，卢宏达，陈卫群.水蛭抑制肿瘤血管生成的作用及其机制[J].肿瘤防治研究，2013，40(1):46-50

5 郭会敏，翟文生.黄芪、水蛭、雷公藤多甙对系膜增生性肾小球肾炎作用机理的现代研究[J].河南中医，2010，30(6):611-612

6 郑云枫，程建明，彭国平.RP-HPLC测定水蛭中3种蝶啶类活性成分的含量[J].南京中医药大学学报，2011，27(6):573-574

7 丁冠华，李峰，康廷国.水蛭地龙药材商品中可溶性蛋白质的含量测定[J].辽宁中医杂志，2010，37(6):1100-1101

8 丁冠华，李峰，康廷国.水蛭地龙药材商品中总多糖含量测定[J].中华中医药学刊，2010，28(5):986-987

9 钟山，杨得坡，崔征.水蛭抗凝血活性成分的研究[J].中国中药杂志，2008，33(23):2781-2784