子宫肌瘤患者外周血胰岛素样生长因子水平的变化及其与子宫肌瘤组织中雌激素受体和孕激素受体的关系研究

李元成，崔志丹，沈 伶

子宫肌瘤是女性生殖系统最常见的良性肿瘤，是影响妇女生殖健康的常见病及多发病。据报道，育龄妇女中其发病率高达25%～40%，年龄>40岁的妇女约有50%患有子宫肌瘤[1-2]。子宫肌瘤的发生、发展是多步骤、多因素的复杂过程，其病因尚未十分明确[3]。目前,普遍认为是雌激素和孕激素相互作用引起的，为激素依赖性肿瘤，与基因、细胞增殖与凋亡、细胞信号传导途径异常及细胞因子等多种因素有关[4]。胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor，IGF)家族由配体IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ、受体IGF-ⅠR和IGF-ⅡR 以及6种结合蛋白构成。IGF具有促进细胞分裂、增殖、分化、调节代谢以及血管形成的作用，当其过度高表达时与肿瘤的发生发展密切相关[5]。本研究通过对子宫肌瘤患者IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ、雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progestrone receptor，PR)的检测，探讨子宫肌瘤的发病机制，为子宫肌瘤的药物治疗提供理论基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1—9月在汕头大学医学院第一附属医院妇产科住院手术治疗临床诊断为子宫肌瘤的患者56例为研究组，年龄36～52岁，平均(43.5±6.7)岁。所有患者行子宫肌瘤切除术(包括子宫全切术或子宫肌瘤剔除术)，术后切除标本送病理学检查确诊为子宫肌瘤。另选择同期在本院进行健康体检的健康女性45例为对照组，年龄38～51岁，平均(44.1±5.2)岁。所有受检者近3个月内未使用任何激素类药物，并且排除糖尿病、甲状腺功能亢进或减低、卵巢肿瘤等合并症。

1.2 方法

1.2.1 外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平的检测 抽取肘静脉血5 ml，标本室温静置待血液完全凝固后，3 000 r/min离心10 min(离心半径13.5 cm)，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清中IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平，样本由专人负责检测，操作严格按说明书进行。ELISA试剂盒由美国R&B公司提供。

1.2.2 标本的采集及固定 子宫肌瘤标本取自子宫肌瘤患者子宫肌瘤结节中心部位组织，置于10%中性甲醛溶液中固定24 h，常规石蜡包埋切片。

1.2.3 子宫肌瘤组织ER、PR的检测 石蜡切片用二甲苯脱蜡至去离子化，乙二胺四乙酸(EDTA)修复缓冲液进行抗原高压热修复，打孔剂洗涤后采用3%过氧化氢室温孵育10 min，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后滴加特异性ER和PR单克隆抗体，4 ℃孵育过夜，PBS洗涤加入二抗37 ℃孵育30 min，PBS洗涤，加入三抗37 ℃ 孵育30 min，PBS洗涤；二氨基联苯胺(DAB)显色，冲洗，苏木素复染，脱水、透明、封片。各个受体细胞核内或细胞质内有棕黄色颗粒染色者为阳性染色细胞，阳性判断采用Sinicrope改良法。根据切片中染色细胞计数和染色强度进行评分，表达评分=染色细胞计数评分×染色强度评分，表达评分<1分为阴性结果，2～3分为弱阳性，4～5分为中度阳性，>5分为强阳性。

2 结果

2.1 研究组与对照组外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平比较 研究组外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05，见表1)。

2.2 子宫肌瘤患者ER(-)组与ER(+)组、PR(-)组与PR(+)组外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平比较 子宫肌瘤患者ER(-)22例(39.3%),ER(+)34例(60.7%)；PR(-)18例(32.1%),PR(+)38例(67.9%)。子宫肌瘤患者ER(+)组外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均高于ER(-)组，差异有统计学意义(P<0.05，见表2)；子宫肌瘤患者PR(+)组外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平均高于PR(-)组，差异有统计学意义(P<0.05，见表3)。

Table1 Comparison of IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels in the peripheral blood between study group and control group

组别例数IGF-ⅠIGF-Ⅱ对照组45 425±54234±44研究组561343±78739±18t值 4 17 2 13P值<0 05<0 05

注：IGF-Ⅰ=胰岛素样生长因子Ⅰ，IGF-Ⅱ=胰岛素样生长因子Ⅱ

Table2 Comparison of IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels between patients with ER (-) and ER (+)

组别例数IGF-ⅠIGF-ⅡER(-)组221125±69578±17ER(+)组341483±73843±18t值 2 35 2 51P值<0 05<0 05

注：ER=雌激素受体

2.3 子宫肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平与子宫肌瘤组织中ER、PR表达的相关性分析 相关性分析结果显示，子宫肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平与子宫肌瘤组织中ER、PR表达评分均呈正相关(P<0.05，见表4)。

Table3 Comparison of IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels between patients with PR (-) and PR (+)

组别例数IGF-ⅠIGF-ⅡPR(-)组181243±70678±18PR(+)组381552±75859±18t值 2 29 2 48P值<0 05<0 05

注：PR=孕激素受体

表4 子宫肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ水平与子宫肌瘤组织中ER、PR表达的相关性分析

Table4 Correlation analysis on IGF-Ⅰ and IGF-Ⅱ levels in the peripheral blood and the expression of ER and PR in uterine leiomyoma tissue

指标ERr值 P值PRr值 P值IGF-Ⅰ0 5740 0000 5980 000IGF-Ⅱ0 6650 0000 6260 000

3 讨论

子宫肌瘤是女性生殖器官中最常见的良性肿瘤，是影响妇女生殖健康的常见病及多发病，并且是导致不孕、月经失调及子宫切除的主要原因。虽然绝大多数子宫肌瘤呈现良性，但也有少数产生恶变。子宫肌瘤发病机制尚未十分明确，其发生可能与女性体内雌、孕激素分泌过高或长期雌激素刺激有关。雌激素有诱发并促进子宫肌瘤生长的作用，使子宫肌瘤细胞增生肥大，肌层变厚，是诱发子宫肌瘤的一个重要内分泌因素。近来研究表明孕激素对子宫肌瘤更有促生长作用[6]。雌激素、孕激素分别通过ER、PR发挥生物学作用。ER、PR与雌、孕激素有较高的亲和力，选择性保留较高浓度的雌、孕激素，从而使其生物学效应加强[7]。

胰岛素样生长因子轴(IGFs)是人体内具有多种重要功能的细胞因子。IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ为胰岛素样生长因子家族的成员，参与胚胎发育、创伤愈合过程，并且与其他生长因子一起协同促进多种细胞的分化成熟。IGF-Ⅰ是一种在多种细胞和组织中发挥促有丝分裂和细胞分化作用的多肽类生长因子，在肿瘤生长分化方面起着重要的调控作用[8]。血清及组织中IGF-Ⅰ过度表达时引起正常细胞活性改变，出现增殖失控、分化缺失及凋亡减少，导致恶性肿瘤的发生、发展[9]。多种类型的肿瘤如肺癌、乳腺癌、肝癌、大肠癌组织中均可异常表达IGF-Ⅰ[10-11]。IGF-Ⅱ是由IGF-Ⅰ编码产生的单链弱酸性多肽，是肿瘤自分泌生长因子，在体内外都有很强的促进细胞分裂、增殖能力，IGF-Ⅱ过表达与肿瘤的侵袭、转移显著相关，此外IGF-Ⅱ还具有较强的促血管内皮细胞分裂、增加内皮细胞的化学趋向性等作用[12-14]。子宫肌瘤的发生发展在与ER、PR相关的同时，IGF-Ⅰ及IGF-Ⅱ等细胞因子可能也扮演着重要角色，并可能与ER、PR相关联[7]。

本研究结果显示，子宫肌瘤组织ER和PR的阳性表达率分别为60.7%和67.9%，与文献报道基本一致[7]。与健康体检人群比较，子宫肌瘤患者外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平显著升高，提示IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ在子宫肌瘤的发生和发展中可能发挥重要作用。本研究对ER(+)、ER(-)以及PR(+)、PR(-)患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平进行比较，结果显示子宫肌瘤ER(+)患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平高于ER(-)患者，子宫肌瘤PR(+)患者IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平高于PR(-)患者；相关性分析结果显示，IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平与子宫肌瘤组织中ER、PR表达评分均呈正相关。因此认为，IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ与ER、PR具有关联性，子宫肌瘤的生长与患者外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平升高有关，并且与子宫肌瘤ER、PR的表达呈正相关。但是因本研究为临床横断面研究，尚难确定二者间的因果关系，仍需设计合理的大样本研究来进行进一步论证。

综上所述，女性外周血IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ水平的变化可能会导致子宫间叶组织的异常改变，与子宫肌瘤发病密切相关，为从分子水平研究子宫肌瘤药物治疗开辟新途径。

1 Sosna O，Kolesor L，slavcev A，et al.Thl/Th2 cytokine gene poly morphisms in patients with uterine fibroid[J].Folia Biol(Praha)，2010，56(5)：206-207.

2 李岩，翟淑娜，姜腾轩，等.体力活动水平与子宫肌瘤发生关系的研究[J].中国全科医学，2012，15(9)：2905

3 李春红.绝经后子宫肌瘤16例临床分析[J].实用心脑肺血管病杂志，2010，18(3)：325.

4 张华，王纪元，王悦冰，等.TNF-α、MMP-2及NF-κB在人子宫肌瘤组织中的表达研究[J].天津医科大学学报，2013，19(3):209-213.

5 Novosyadlyy R,LeRoith D.Insulin-like growth factors and insulin:at the crossroad between tumor development and longevity[J].J Gerontol A Biol Sci Med Sci,2012,67(6):640-651.

6 Hoekstra AV，Sefton EC，Berry E，et al.Progestins activate the AKT pathway in leiomyoma cells and promote survival[J].J Clin Endocrind Metab，2009，94(5)：1768-1774.

7 王敏，李青，史春雪.SULT1A1和雌、孕激素受体蛋白在子宫肌瘤中的表达及其临床意义[J].中国医科大学学报，2010，39(8)：658-662.

8 Bartella V,De Marco P,Malaguarnera R,et al.New advances on the functional cross-talk between insulin-like growth factor-Ⅰ and estrogen signaling in cancer[J].Cellular Signalling,2012,24(8):1515-1521.

9 Gallagher EJ,LeRoith D.The proliferating role of insulin and insulin-like growth factors in cancer[J].Trends in Endocrinology and Metabolism,2010,21(10):610-618.

10 Rinaldi S，Cleveland R，Norat T，et al.Serum levels of IGF-Ⅰ，IGFBP-3 and colorectal cancer risk：results from the EPIC cohort，plus a meta-analysis of prospective studies[J].Int J Cancer，2010，126(7)：1702-1715.

11 陈博艺.IGF-Ⅱ、VEGF和IL-2、IFN-γ在原发性肝癌根治术前、后的变化及意义[J].海南医学院学报，2009，15(6)：576.

12 崔书中，巴明臣，吕嘉春，等.IGF-Ⅱ、IGFBP-2在肝癌病人血清的表达及其对评价经皮肝动脉化疗栓塞治疗效果的意义[J].中华肝胆外科杂志，2010，16(4)：245-238.

13 彭珊璐，冯国祝，王国香，等.新生儿缺氧缺血性脑病血清胰岛素样生长因子-1测定的意义[J].实用心脑肺血管病杂志，2012，20(4)：601.

14 刘润萍,孙丽莎,陈秋.胰岛素样生长因子-1与糖尿病合并骨质疏松的关系研究进展[J].中国全科医学,2013,16(1)：237.