IL-10基因多态性与幽门螺杆菌相关胃癌易感性的关系*

吴绍燕，任 磊△，王永红，罗 蓉，向 瑜

(重庆医科大学附属第一医院:1.健康体检部;2.检验科 400016)

幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。自澳大利亚学者巴里·马歇尔和罗宾·沃伦发现并证明幽门螺杆菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡和胃淋巴瘤甚至胃癌以来,幽门螺杆菌掀起了全世界的研究热潮。1994年WHO将幽门螺杆菌列为第1类高危致恶变因子，幽门螺杆菌具有极强的传染性，人是幽门螺杆菌的惟一传染源[1]。大量研究表明，超过90%的十二指肠溃疡和80%左右的胃溃疡，都是由幽门螺杆菌感染导致的，在我国胃癌的死亡率占所有恶性肿瘤的23.02%[2]。绝大多数幽门螺杆菌感染者不会发展成为消化性溃疡和胃癌，这与感染菌株的型别、宿主基因型的差异及所暴露的环境因素有关。IL-10是重要的抗炎细胞因子，在胃癌患者中IL-10的表达量减少[3]。在人群中，IL-10基因型等遗传因素会影响幽门螺杆菌感染者发展成为胃癌的危险性。

IL-10基因在启动子区-1082 G/A、-819 C/T和-592 C/A存在基因多态性[4]。本研究从宿主的角度讨论幽门螺杆菌感染后IL-10基因型与胃癌易感性的关系,旨在寻找胃癌发生的易感基因型，为胃癌的预防及治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院2010～2013年住院患者中胃癌且伴有幽门螺杆菌感染者作为胃癌组(n=100)，同时选取本院2010～2013年体检者中的幽门螺杆菌感染者作为相应的对照组(n=140)，与志愿者签署知情同意书，同时取得本院伦理委员会同意。胃癌组：男39例，女61例，年龄(47.02±14.48)岁；所有患者均行胃镜检查，胃癌的诊断均通过组织病理学确诊。对照组：男68例，女72例，年龄(45.69±16.19)岁，无胃溃疡及胃癌的病史。所有研究对象均为汉族，相互间无血缘关系。

1.2材料 胃幽门螺杆菌抗体检测试剂盒(广州健伦生物科技有限公司)；快速检测试纸(北京北瑞达医药科技有限公司)；DNA片段长度标准DL2000和限制性内切酶RsaⅠ(大连宝生物公司)；IL-10-592引物(上海英骏生物技术有限公司)。

1.3方法

1.3.1幽门螺杆菌感染的检测 胃癌组采取快速检测试纸(尿素酶试纸片)法，对照组采取C13呼气试验进行检测；上述两组研究者均提取血清，并采用胶体金技术定性检测。

1.3.2细胞因子基因多态性检测

1.3.2.1DNA模板的制备 取所有受试者静脉血3 mL，EDTA-Na2抗凝，用改良碘化钠法[5]提取白细胞DNA，在-20 ℃条件下保存。

1.3.2.2引物的设计 设计检测IL-10-592的引物,正向引物:5′-CCT AGG TCA CAG TGA CGT GG-3′,反向引物:5′-GGT GAG CAC TAC CTG ACT AGC-3′。

1.3.2.3限制性片段长度多态性PCR(PCR-RFLP)的反应条件 PCR反应体系中包括10 μL Premix Taq (dNTP，Taq DNA聚合酶，Mg2+)，4 μL DNA模板，引物5 pmol，加去离子水至20 μL[6]。检测IL-10-592基因的PCR条件:94 ℃ 2 min；94 ℃ 30 s,60 ℃ 45 s,72 ℃ 1 min,35 个循环。

1.3.2.4酶切产物检测及分析 PCR扩增产物由限制性内切酶在37 ℃水浴箱进行酶切，酶切产物在3%琼脂糖凝胶电泳分离，Goldview染色后用凝胶成像仪进行观察，同时分析DNA条带[6]。

1.4统计学处理 采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。各基因型以及等位基因频率用频数计算，然后通过H-W遗传平衡定律进行检验。胃癌组与对照组之间的比较用χ2检验。各基因型发生胃癌和胃溃疡的危险性用优势比(OR)以及95%CI来表示，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1基因多态性的检测结果IL-10-592 PCR产物通过限制性内切酶RsaⅠ酶切后进行电泳分型，其基因型分别为：A/A型 236 bp 和176 bp,C/C型412 bp,A/C型412、236、176 bp,见图1。

1、4:IL-10-592A/A型；2、5:IL-10-592C/C型；3、6:IL-10-592A/C型；Marker：DNA分子标记物。

图1IL-10-592基因多态性的检测结果

2.2各基因型分布频率χ2检验表明，3种基因型以及等位基因频率均符合H-W遗传平衡，且具有群代表性。在胃癌组中IL-10-592的各基因型的频率(A/A型26%，A/C型40%,C/C型34%)与对照组(A/A型10%，A/C型33%,C/C型 57%)比较，分布差异有统计学意义(χ2=16.36,P<0.01)。见表1。

表1 各基因型分布频率[n(%)]

2.3IL-10-592各基因型胃癌发生的危险性分析 本研究中，应变量Y表示是否患病以及患何种疾病：对照以Y=0 表示，胃癌用Y=1来表示；IL-10-592的基因型以自变量X1表示：C/C型用X1=1表示，A/C型用X1=2表示，A/A型用X1=3表示；建立Logistic回归模型，分析IL-10-592 各基因型发生胃癌的危险性。与携带IL-10-592C/C者比较，携带IL-10-592A/A者发生胃癌的危险性为OR=4.37(95%CI:2.04～9.38),差异有统计学意义(P<0.01)。携带IL-10-592A/C者发生胃癌的危险性为OR=2.05 (95%CI:1.14～3.67),差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

幽门螺杆菌能够促使胃黏膜上的炎性细胞产生多种细胞因子，从而导致胃、十二指肠的炎症加重，引起黏膜损伤，胃酸分泌异常。目前胃癌的发病机制并未完全阐明，Toller等[7]发现幽门螺杆菌使胃黏膜细胞发生致死性损伤(即DNA双链断链)，与胃癌的发生相关。目前研究表明在幽门螺杆菌引起的胃癌中，幽门螺杆菌感染、遗传因素、环境因素在这个过程中均起到了相关的作用。宿主遗传因素，包括基因多态性、HLA基因型等可能影响到幽门螺杆菌相关性胃、十二指肠疾病的易感性。随着基因组学的进步，基因组不稳定性在胃癌中的作用日益显现，包括基因的缺失、癌基因的激活和抑癌基因功能的丧失等[8]。近年来细胞因子的基因多态性对幽门螺杆菌感染的影响已成为研究的热点。IL-10是参与抗炎重要的细胞因子，它的表达量减少会促使IL-1、TNF-α等促炎因子的表达增加，IL-1、TNF-α等促炎因子能够抑制胃酸的分泌，有利于幽门螺杆菌在胃黏膜内定植，从而导致胃、十二指肠疾病的发生[9]。

基因多态性可表现为单核苷酸多态性(SNP)，不同物种、个体基因组DNA序列同一位置上的单个核苷酸存在差别的现象。有这种差别的基因座、DNA序列等可作为基因组作图的标志，其中有些SNP可能与疾病有关，寻找这些特定的SNP是发现相关疾病易感基因的重要途径[10]。IL-10的基因多态性与幽门螺杆菌感染导致胃癌的关系还未完全明确。El-Omar等[11]对贲门癌和非贲门癌患者进行IL-10等细胞因子基因多态性的研究中发现，IL-10的低表达，最终导致了胃癌的发生。与携带IL-10-592C/C者比较，携带IL-10-592A/A者发生胃癌的危险性为OR=4.37(95%CI:2.04～9.38)，在胃癌组中A等位基因频率高于对照组，提示IL-10基因多态性与幽门螺杆菌相关的胃癌相关[12]，IL-10-592是幽门螺杆菌相关的胃癌的易感基因。携带IL-10-592A/A基因型患者表达IL-10减少，IL-10的抗炎作用减弱，IL-1等促炎因子表达增加，加重了胃黏膜的炎性反应，也利于幽门螺杆菌在胃内的定植，从而为胃癌的发生提供了有利条件[13]。Lee等[14]对胃癌、消化性溃疡患者进行研究，研究中发现IL-10-1082、-592两个位点基因型在胃癌、消化性溃疡、对照组之间并无显著性差异，与幽门螺杆菌感染程度、胃癌发生的部位、胃癌家族史之间无相关性，认为IL-10-1082、-592基因多态性与韩国人群发生胃癌无关。本研究的结果与其他研究结果之间的差异，原因可能是研究对象的遗传背景不同。

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