非酒精性脂肪性肝病患者血清增食欲素A水平变化及其与胰岛素抵抗的关系

高建峰 谢中华 章海华 汪铁军 郑元秀 杭州市余杭区第二人民医院 杭州 311121

非酒精性脂肪性肝病患者血清增食欲素A水平变化及其与胰岛素抵抗的关系

高建峰 谢中华 章海华 汪铁军 郑元秀 杭州市余杭区第二人民医院 杭州 311121

目的 观察非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）患者血清增食欲素A（Orexin A）水平变化及其与胰岛素抵抗的关系。方法 测定103例非酒精性脂肪性肝病患者及99名健康体检者的体质指数（BMI）及腰臀比（WHR），采用酶联免疫吸附试验法检测其血清增食欲素A、血脂、空腹胰岛素及空腹血糖值，计算胰岛素抵抗指数，分析血清增食欲素A水平与胰岛素抵抗的关系。结果 与健康对照组比较，NAFLD患者BMI、WHR、HOMA-IR及血清TC、TG、FFA水平均明显增高（P＜0.05，P＜0.01）；血清HDL-C及Orexin A水平则显著降低（P＜0.05）；Orexin A与BMI、WHR、TG、FFA、HOMAIR均呈明显负相关（r分别为-0.689、-0.741、-0.438、-0.377、-0.611，P＜0.01）；与TC无明显相关性；Orexin A与HDL-C呈明显正相关（r＝0.832，P＜0.01）。结论 非酒精性脂肪性肝病患者存在脂代谢异常及胰岛素抵抗，Orexin A可能通过调控胰岛素抵抗参与NAFLD的发生发展。

非酒精性脂肪性肝病；增食欲素A；胰岛素抵抗

近年来，随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，肥胖、糖脂代谢紊乱相关的非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）发病率不断升高，且有年轻化的趋势[1]。NAFLD与胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）、肥胖、脂代谢紊乱、糖尿病等代谢综合征（metabolic syndrome，MS）密切相关，被认为是MS在肝脏的表现[2]，其发生发展的分子机制尚不完全清楚，IR是其形成的核心环节[3]。增食欲素A（Orexin A）是由下丘脑组织中合成并分泌的一种神经肽，通过其受体调节摄食、应激等多种生理过程。近年来，越来越多的基础与临床研究[4-6]发现，Orexin A可通过促进IR参与肥胖、2型糖尿病等形成，而其在NAFLD中的作用尚不清楚。本研究通过检测NAFLD患者外周Orexin A水平，分析其与IR的关系，初步探讨其在NAFLD中的作用，以期为NAFLD的防治提供新思路。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2010年4月—2012年2月本院门诊和住院患者103例为观察组，男56例，女47例，平均年龄（43.17±10.23）岁，均符合：①中华医学会肝病分会脂肪肝酒精肝学组制定的NAFLD诊断标准[7]；②年龄18～70岁，就诊前1个月未用过氧化物酶增殖体激活受体（PPAR）-γ激动剂、降脂药。③排除病毒性肝炎、药物性肝炎、自身免疫性肝病、糖尿病、营养不良、甲状腺功能异常、肿瘤及自身免疫性疾病、妊娠哺乳期妇女、患有精神系统疾病，无法与医生进行正常交流的患者。对照组选自我院99名健康体检者（体质指数均在正常范围），男53例，女46例，平均年龄（42.66±13.12）岁，均无严重心脑肾疾病、病毒性肝炎、脂肪肝及其他肝脏疾病、肿瘤、精神疾病、糖尿病和长期服药史等。两组性别、年龄分布差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 观察指标及方法 所有受试者均禁食8h以上，于次日清晨空腹采肘静脉血，用于相关指标的测定。

1.2.1 体质指数（BMI）及腰臀比（WHR） 要求全部入选对象脱鞋、免冠、仅穿内衣，由专人测量身高、体质量、腰围、臀围，分别以kg、cm为单位记录，精确到0.1cm、0.1kg，BMI＝体质量（kg）/身高（m）2，WHR＝腰围/臀围。

1.2.2 血清Orexin A水平测定 采用酶联免疫吸附试验法（enzyme linked immuno-sorbent assay，ELISA）进行。试剂盒由美国DSL公司提供，批号：M64608。用Bio-Tek酶标仪在450nm波长下读取各孔吸光度（A）值，并根据绘制的标准曲线计算出相对应的浓度。

1.2.3 胰岛素抵抗指数（HOMA-IR） 采用HITACHI 7600-110大型生化分析仪检测空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）水平，放射免疫法检测空腹胰岛素（fasting blood insulin，FBIn）水平，根据空腹血糖、胰岛素值计算胰岛素抵抗程度（采用稳态模型评价法（homeostatic model assessment，HOMA），公式如下：胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）＝（FBG×FBIn）/22.5。空腹胰岛素放射免疫分析药盒为潍坊三维生物工程集团有限公司提供，批号：3V-20120102。

1.2.4 游离脂肪酸（free fatty acids，FFA）测定 采用改良比色法测定，试剂盒由北京普利莱基因技术有限公司提供，批号：20120116。

1.2.5 血脂指标测定 采用HITACHI7600-110大型生化分析仪检测。

1.3 统计学方法 应用SPSS11.5统计软件，性别比采用χ2检验，其余数据行描述性分析﹑正态性检验及方差齐性检验，在描述性分析中,对于正态分布的数据，以均数±标准差（±s）表示，正态分布数据经方差齐性检验后采用独立样本的t检验，相关性分析采用sperman检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组BMI及WHR比较 观察组BMI及WHR均较健康对照组明显升高（P＜0.05），见表1。

表1 两组BMI及WHR比较（±s）

表1 两组BMI及WHR比较（±s）

注：与健康对照组比较，*P＜0.05

组别健康对照组观察组n/例99 103 BMI/（kg/m2）22.15±2.56 27.26±2.23* WHR 0.68±0.03 0.88±0.11*

2.2 两组生化指标比较 观察组血清TC、TG、FFA水平及HOMA-IR均明显高于健康对照组（P＜0.05），血清HDL-C及Orexin A水平则显著低于健康对照组（P＜0.01，P＜0.05），见表2。

表2 两组生化指标比较（±s）

表2 两组生化指标比较（±s）

注：与健康对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

组别健康对照组观察组n/例99 103 TC/（mmol/L）4.04±0.38 5.75±0.77* TG/（mmol/L）1.18±0.38 2.42±1.47* HDL-C/（mmol/L）1.52±0.32 1.04±0.27* FFA/（umol/L）440.69±95.31 756.63±101.38** Orexin A/（ng/mL）0.69±0.11 0.31±0.07* HOMA-IR 2.69±0.79 7.63±1.38*

2.3 相关性分析 sperman相关性分析表明，Orexin A与BMI、WHR、TG、FFA、HOMA-IR均呈明显负相关（r分别为-0.689、-0.741、-0.438、-0.377、-0.611，P＜0.01）；与TC无明显相关性；Orexin A与HDL-C呈明显正相关（r＝0.832，P＜0.01）。

3 讨论

NAFLD的发病机制是近些年学术界研究热点之一，尽管其发病机制尚不完全清楚，但目前广泛接受的是Day和James在1998年提出的“二次打击”学说[3]，即指从单纯性脂肪肝进展至非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）甚至肝纤维化、肝硬化来源于二次打击。肝内脂质蓄积是NASH发生、发展过程中的第一次打击，而脂肪变性的肝细胞对损害因素非常敏感；第二次打击来自氧化应激及脂质过氧化、炎症、免疫攻击因素与防御因素不平衡。近年来对NAFLD发病机制的研究进展主要集中在IR，因为IR是大多数患者潜在的异常因素，IR是NAFLD形成的始动及核心环节，并可能贯穿于NAFLD的全过程[8]。因此，研究IR的分子机制对于NAFLD的防治具有重要意义。

导致IR形成的分子机制极其复杂，涉及多种生物因子及信号通路。近年来，越来越多的研究[4-6]发现，增食欲素A（Orexin A）可通过调节IR参与肥胖、脂代谢紊乱等代谢综合征的发生发展。Orexin是1998年发现的一种由大鼠下丘脑外侧区（lateral ypothalamic area，LHA）合成并分泌的小分子神经肽[9]，在中枢神经系统内外均广泛分布，除经典的调节摄食和睡眠/觉醒状态之外，还参与多种内分泌代谢的调控。Orexin系统包括Orexin A、Orexin B和Orexin 1/2受体（OX1R，OX2R），其中Orexin A可以剂量依赖方式增加摄食[10]，是机体能量平衡调节网络中的重要物质，因此受到了广泛关注。Switońska等[11]研究显示，Orexin A对胰岛素的刺激呈剂量依赖性，且Orexin A和胰岛素的作用存在时相上的差异。国内赵玉红等[6]发现在脂代谢异常状态下，Orexin A是IR及肥胖发生的重要标志。

目前，在NAFLD中，Orexin A是否与IR有关尚不清楚。已知Orexin A能自由扩散通过血脑屏障[12]，因此，血清Orexin A的水平至少部分反映了下丘脑Orexin A的产生情况。本研究结果显示，NAFLD患者血清Orexin A水平较健康体检者明显减少，NAFLD患者肥胖度的各项指标（BMI及WHR）及血脂指标TG、FFA、TC较健康体检者显著升高，HDL-C水平明显降低，且NAFLD患者较健康体检者有更为明显的胰岛素抵抗，提示NAFLD患者存在一定程度的肥胖、脂代谢异常及IR。相关性分析表明，血清Orexin A水平与BMI、WHR、TG、FFA、HOMA-IR均呈明显负相关，与HDL-C呈明显正相关，提示在NAFLD中，Orexin A水平的减少与脂代谢异常及IR密切相关。脂质代谢异常作为IR的一项重要标志是如何参与Orexin A的调控目前尚不清楚。Beck等[13]报道，Orexin的表达与TG负相关，本组结果也支持这一结论。高脂血症可通过诱导胰岛B细胞凋亡[14]等多种途径引起胰岛素介导的葡萄糖摄取和利用减少，以及肝脏葡萄糖输出增加，导致IR的形成。Orexin系统可能是参与调节脂肪-胰岛轴的重要因素。

［1］Fan JG，Farrell GC.Epidemiology of non-alcoholic fatty liver disease in China［J］.J Hepatol，2009，50（1）：204-210.

［2］Kotronen A，Yki-Jarvinen H.Fatty liver:a novel component of the metabolic syndrome［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2008，28（1）：27-38.

［3］Day CP，James O.Steatohepatitis:a tale of two“hits”［J］.Gastroenterology，1998，114（4）：842-845.

［4］赵玉岩，郭磊，都健，等.胰岛素抵抗大鼠Orexin/leptin系统变化及其影响因素的研究［J］.中国现代医生杂志，2004，14（9）：34-38.

［5］赵玉红，吴丽霞，关心，等.血清增食欲素A与脂代谢相关性分析［J］.中国公共卫生，2011，27（11）：1502-1503.

［6］赵玉红，吴丽霞，关心，等.营养性肥胖大鼠的脂代谢紊乱与下丘脑中增食欲素A的表达分析［J］.中国病理生理杂志，2011，27（5）：1000-1002.

［7］中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.非酒精性脂肪性肝病诊疗指南（2006年2月修订）［J］.肝脏，2006，11（1）：68-70.

［8］Qureshi K，Abrams GA.Metabolic liver disease ofobesity and role of adipose tissue in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease［J］.World J Gastroenterol，2007，13（26）：3540-3553.

［9］De Lecea L，Kilduff TS，Peyron C，et al.The hypocretins:hypothalamus-specific peptides with neuroexcitatory activity［J］.ProcNatlAcad Sci USA，1998，95（1）：322-327.

［1 0］Yi CX，Serlie MJ，Ackermans MT，et al．A major role for perifornical orexin neurons in the control of glucose metabolism in rats［J］.Diabetes，2009，58（9）：1998-2005．

［1 1］Switońska MM，Kaczmarek P，Malendowicz LK，et al．Orexins and adipoinsular axis function in the rat［J］.Regul Pept，2002，104（1－3）：69-73．

［1 2］Kastin AJ，Akerstrom V.Orexin A but not orexin B rapidly entersbrain from blood by simple diffusion［J］.J Pharmacol ExpTher，1999，289（1）：219-223.

［1 3］Beck B，Kozak R，Moar KM，et al．Hypothalamic orexigenic peptides are expressed in young Long-Evans rats after early life exposure to fat-rich diets［J］.Biochem BIOphys Res Commun，2006，342（2）：452-458.

［1 4］Miranda PJ，DeFronzo RA，Califf RM，et al．Metabolic syndrome：definition，pathophysiology，and mechanisms［J］.Am Heart J，2005，149（1）：33－45．

The Changes of Serum Orexin A in Nonalcoholic Fatty Liver Disease Patients and the Relationship between Orexin A and Insulin resistance

GAO Jianfeng，XIE Zhonghua，ZHANG Haihua，WANG Tiejun，ZHENG Yuanxiu.Yuhang District Second People's Hospital of Hangzhou,Hangzhou(311121),China

ObjectiveTo investigate the changes of the level of serum orexin A in nonalcoholic fatty liver disease（NAFLD）patients and the relationship between orexin A and insulin resistance.MethodsBody mass index（BMI）and waist-hip ratio（WHR）of 103 patients with NAFLD and of 99 individuals having general physical examination were measured.Fast blood glucose（FBG）and fast insulin（FINS）were determined for calculating the insulin resistance index（HOMA-IR）.The level of serum orexin A was detected by ELISA.The relationship of serum orexin A with insulin resistance was statistically analyzed.ResultsCompared with healthy control group,the BMI,WHR, HOMA-IR,and the levels of serum total cholesterol,triacylglycerol,free fatty acid were significantly higher（P＜0.05）,but the levels of serum high density lipoprotein cholesterol（HDL-C）and orexin A were significantly decreased（P＜0.01,P＜0.05）.The level of serum orexin A was negatively correlated with BMI,WHR,triacylglcerol,free fatty acid,and HOMA-IR（r＝-0.689,-0.741,-0.438,-0.377,-0.611;P＜0.01）,but the level of serum orexin A was posi tively correlated with HDL-C（r＝0.832,P＜0.01）.Conclusions Lipid metabolism disorder and insulin resistance were observed in NAFLD patients;orexin A may play an important role in occurrence and development of NAFLD by modulating insulin resistance.

nonalcoholic fatty liver disease；orexin A；insulin resistance

2013-06-20