不同中药炮制品组成的参苓白术散对肠道菌群影响对比研究

李卫先，李福元，李 达，王议忆，管 弦

（湖南中医药高等专科学校，湖南 株洲 412012）

不同中药炮制品组成的参苓白术散对肠道菌群影响对比研究

李卫先，李福元，李 达，王议忆，管 弦

（湖南中医药高等专科学校，湖南 株洲 412012）

目的：观察不同中药炮制品组成的参苓白术散对小鼠模型肠道菌群影响。方法：小鼠用100%大黄水浸液灌胃造脾虚证模型，然后用不同中药炮制品组成的参苓白术散煎液。结果：模型小鼠肠道双歧杆菌、乳杆菌及类杆菌等厌氧菌含量显著下降（P＜0.01），用土炒白术、土炒山药或麸炒白术、麸炒山药组成的参苓白术散灌胃后，3种厌氧菌含量均恢复正常，且双歧杆菌明显超过造模前水平（P＜0.05）。需氧菌菌群中，肠球菌含量造模前后无显著性差异，而用土炒白术、土炒山药或麸炒白术、麸炒山药组成的参苓白术散后则下降了1个数量级。大肠杆菌在造模完成时含量明显上升（P＜0.01），用土炒白术、土炒山药组成的参苓白术散后含量恢复造模前水平。造模后及用中药后葡萄球菌含量变化不明显。结论：土炒白术、土炒山药或麸炒白术、麸炒山药组成的参苓白术散能促进双歧杆菌并抑制肠球菌，并且可以用党参代替人参。党参、土炒白术、土炒山药等组成的参苓白术散抑制大肠杆菌效果较好。

不同炮制品；参苓白术散；小鼠；厌氧菌群；需氧菌群

参苓白术散来源于《太平惠民和剂局方》，由人参、炒白术、茯苓、甘草、炒山药、炒白扁豆、莲子肉、炒薏苡仁、砂仁、桔梗组成，枣汤调服。临床用其治疗脾虚泄泻时大多用党参代替人参。为观察中药炮制对其药效的影响，笔者用大黄脾虚造模［1］，然后选用不同中药炮制品组方的参苓白术散进行干预，探讨苦寒泻下药物对肠道菌群的影响，以及不同中药炮制品组方的参苓白术散的微生态调节作用，为完善脾虚证实质研究及中药复方微生态调整的药效机制提供实验依据。

1 材 料

大肠杆菌、双歧杆菌、葡萄球菌、乳酸杆菌、类杆菌、肠球菌的培养基，购自中国药品生物制品鉴定所。

实验动物：昆明种小鼠，清洁级，体质量18～22g，雌雄各半，由湖南省实验动物中心提供，动物合格证号SCXK（湘）2009-0012。SD大鼠，雌雄各半，由湖南省实验动物中心提供，动物合格证号SCXK（湘）2009-0012。动物养于湖南中医药高等专科学校动物实验中心，自由饮用滤过净化处理水。

药材：人参、茯苓、白术、山药、白扁豆、莲子、薏苡仁、砂仁、桔梗、甘草、党参、大黄等均由湖南中医药高等专科学校附属一医院提供，按《中国药典》（2010，一部）鉴定为合格药材。

样品分组：①A组：各组成成分均生品的参苓白术散的水煎液。人参100g，茯苓100g，白术100g，山药100g，白扁豆75g，莲子肉50g，薏苡仁150g，砂仁50g，桔梗50g，甘草100g，②B组：为参苓白术散中白术、山药的土炒品、薏苡仁麸炒、甘草蜜炙时参苓白术散水煎液、其他各药及用量同A组。③C组：为白术、山药、薏苡仁的麸炒品、甘草蜜炙时参苓白术散水煎液、其他各药及用量同A组。④D组：党参代人参且各组成成分均为生品、其他各药及用量同A组参苓白术散水煎液。⑤E组：党参代人参且白术、山药的土炒品、薏苡仁麸炒、甘草蜜炙、其他各药及用量同A组参苓白术散水煎液。⑥F组：党参代人参且白术、山药、薏苡仁的麸炒品、甘草蜜炙、其他各药及用量同A组参苓白术散水煎液。

样品提取：各组药按量称取各药后常温浸泡（25℃）0.5h，加蒸馏水2 000m L，煮沸后文火煎30min，过滤药液，药渣加蒸馏水再煎煮25min，合并两次滤液，浓缩至875mL，制成参苓白术散（g）与水煎液（m L）的比例为1︰1水煎液。100%生大黄制剂，将生大黄粉碎，用5倍量水浸泡30min后煎煮15min，过滤，静置，取上清液，用旋转蒸发仪在50℃下回收水，即得。

2 方 法

造模：将雌雄小白鼠随机分成造模组与治疗组共9组，每组雌雄各10只。灌胃大黄煎汁造模8天，获得脾虚证模型［1］。然后按成人单位体质量25倍量给各治疗组灌胃不同炮制品的各种参苓白术散煎液7天。造模组同期灌胃生理盐水，使其成为自然恢复组。

标本采集与培养：给药10天后每只小鼠被迫排便，接于事先称重带有玻璃珠的无菌小瓶内，再次称重，按标本质量，然后用无菌生理盐水（0.85%）作对数稀释，取10-6、10-7、10-8稀释液，用微量移液器取20μL滴于培养基表面。每个稀度滴3滴，同一培养皿上滴种3个稀释度。然后迅速置于厌养培养箱中培养72h。肠道需氧菌群检测时粪便标本依预试结果选取10-4、10-5、10-6（EC、SP）或10-5、10-6，10-7（EMB）稀释度，接种后在需氧条件下37℃培养24h之后计数典型菌落。计算出1g标本中的菌含量（CFU/g标本），CFU/g标本=50×稀释倍数×1/标本质量。结果均取常用对数值LgCFU/g。

3 结 果

一般体征：小鼠在给予大黄水煎剂灌胃第2d，出现便溏，以后逐渐出现腹泻、纳呆、体质量减轻、畏寒、四肢无力、活动减少、毛枯槁等脾虚症状。随着造模的进行，上述症状逐渐加重。造模1周后自然恢复鼠的脾虚证状基本保持不变。各治疗组随着治疗的进行，B、E组即由人参或党参代人参与白术、山药的土炒品组方的参苓白术散组脾虚证状明显改善，至服药完毕时一般体征恢复正常。

厌氧菌检测结果见表1。

表1 参苓白术散对小鼠脾虚模型肠道厌氧菌的影响 （±s）

表1 参苓白术散对小鼠脾虚模型肠道厌氧菌的影响 （±s）

注：与造模前比较，*P＜0.05、**P＜0.01；与造模后比较，△P＜0.05、△△P＜0.01。

菌种 检测时间 平均含量/（lgCFU/g）菌种检测时间 平均含量/（lgCFU/g）双歧杆菌菌种检测时间 平均含量/（lgCFU/g）12.45±0.63 11.11±0.50*11.26±0.48 11.31±0.73 12.40±0.69△△12.40±0.60△△11.30±0.58 12.68±0.63△△12.47±0.60△△造模前造模后自然恢复后A组治疗后B组治疗后C组治疗后D组治疗后E组治疗后F组治疗后12.31±0.61 11.16±0.53*11.20±0.49 11.30±0.53 12.86±0.60*△△12.81±0.68*△△11.32±0.59 12.98±0.37△△12.88±0.38*△△乳杆菌造模前造模后自然恢复后A组治疗后B组治疗后C组治疗后D组治疗后E组治疗后F组治后12.61±0.81 11.10±0.43*11.49±0.51 11.60±0.63 12.43±0.65△△12.39±0.68△△11.62±0.48 12.63±0.58△△12.58±0.63△△类杆菌造模前造模后自然恢复后A组治疗后B组治疗后C组治疗后D组治疗后E组治疗后F组治后

需氧菌检测结果见表2。

表2 参苓白术散对小鼠脾虚模型肠道厌氧菌的影响 （±s）

表2 参苓白术散对小鼠脾虚模型肠道厌氧菌的影响 （±s）

注：与造模前比较，*P＜0.05、**P＜0.01；与造模后比较，△P＜0.05、△△P＜0.01。

菌种检测时间平均含量/（lgCFU/g）菌种检测时间平均含量/（lgCFU/g）大肠杆菌菌种检测时间平均含量/（lgCFU/g）9.14±0.71 9.43±0.66 9.38±0.71 9.30±0.59 8.31±0.65 8.55±0.48 9.13±0.51 8.18±0.67*△△8.36±0.61造模前造模后自然恢复后A组治疗后B组治疗后C组治疗后D组治疗后E组治疗后F组治疗后10.35±0.71 11.84±0.63*11.75±0.57 11.66±0.63 11.05±0.70△11.46±0.78△11.54±0.56 10.31±0.67△△11.34±0.58△葡萄球菌造模前造模后自然恢复后A组治疗后B组治疗后C组治疗后D组治疗后E组治疗后F组治疗后9.52±0.81 9.61±0.67 9.65±0.75 9.43±0.71 9.41±0.70 9.45±0.73 9.50±0.56 9.37±0.64 9.51±0.67肠球菌造模前造模后自然恢复后A组治疗后B组治疗后C组治疗后D组治疗后E组治疗后F组治疗后

4 讨 论

研究显示，厌氧菌减少是肠道菌群失调的基本改变之一［2］。值得注意的是，由土炒白术、土炒山药，或麸炒白术及麸炒山药组方的参苓白术散对双歧杆菌这一重要的健康因子表现出明显的扶植作用。通过扶植益生菌而间接排斥病原菌或条件致病菌，达到扶正祛邪之功效，是微生态调节剂的基本作用途径之一。厌氧菌的显著减少，与大肠杆菌等需氧菌的明显增加，共同构成脾虚证肠道细菌菌群失调。大肠杆菌是一种典型的正常需氧菌群成员，但亦是引起菌群失调症的重要原因菌，其致病性与其数量的上升程度有关。研究发现，由土炒白术、土炒山药，或麸炒白术及麸炒山药组方的参苓白术散能促进双歧杆菌并抑制肠球菌的作用，并且可以用党参代替人参。使用参苓白术散抑制大肠杆菌时建议使用由党参代人参与土炒白术、土炒山药等药物组方的参苓白术散效果更好。

［1］张印，窦永起.白术不同炮制品对小鼠小肠运动的影响［J］.国医论坛，2005，20（5）：13-14.

［2］任光友，张贵林，卢素琳，等.四君子汤对动物肠菌失调及正常胃肠功能的药理研究［J］.中成药，2000，22（7）：504-506.

Objective: To observe the effect of different processed products of Shenlingbaizhu Powder on intestinal flora of mice models. Method: The mice models of spleen deficiency were induced with 100% liquid rhubarb water extract and taken the decoction of different processed products of Shenlingbaizhu Powder. Result: The content of anaerobic bacteria such as bifidobacterium, lactobacillus, bacteroides etc. in intestine of model mice decreased significantly（P<0.01）. After the mice were treated by intragastric administration with Shenlingbaizhu Powder composed of soil-baked atractylodes macrocephala koidz and soil-baked radix dioscoreae oppositae or composed of stir-baked atractylodes macrocephala koidz and stir-baked radix dioscoreae oppositae, the content of three types of anaerobic bacteria all returned to normal and the level of bifidobacterium was superior to that of pre-model mice（P<0.05）. Among the aerobic bacteria, there was no significant difference in the content of enterococcus between pre modeling and post modeling, but after the mice were treated by intragastric administration with Shenlingbaizhu Powder composed of soil-baked atractylodes macrocephala koidz and soil-baked radix dioscoreae oppositae or composed of stirbaked atractylodes macrocephala koidz and stir-baked radix dioscoreae oppositae, the content of enterococcus decreased 1order of magnitude. After the models were established, the content of escherichia coli increased obviously（P<0.01）. After the mice were treated by intragastric administration with Shenlingbaizhu Powder composed of soil-baked atractylodes macrocephala koidz and soil-baked radix dioscoreae oppositae, the content of scherichia coli returned to the level of pre modeling. The content of staphylococcus didn’t change obviously after the mice models were established or the mice were given Chinese herbs.Conclusion: Shenlingbaizhu Powder composed of soil-baked Atractylodes macrocephala koidz and soil-baked Radix Dioscoreae Oppositae or composed of stir-baked Atractylodes macrocephala koidz and stir-baked Radix Dioscoreae Oppositae could improve bifidobacterium and inhibit enterococci. Gingeng could be replaced by Codonopsis pilosula in Shenlingbaizhu Powder.Shenlingbaizhu Powder composed of Codonopsis pilosula, soil-baked Atractylodes macrocephala koidz and soil-baked Radix Dioscoreae Oppositae has good effect in inhibting escherichia coli.

different processed products；Shenlingbaizhu Powder；mouse; intestinal flora; aerobe flora

R283.1

B

1004-2814（2014）05-0381-03

2013-12-18

观察与研究