氧化应激检测在男性不育临床中的应用

陈 捷

（中山市博爱医院生殖中心，广东 中山 528403）

氧化应激检测在男性不育临床中的应用

陈 捷

（中山市博爱医院生殖中心，广东 中山 528403）

在当前，有大量研究认为氧化应激损伤是导致一系列男性生殖功能病变的重要影响因素。临床在检测男性不育时，主要可采用氧化应激检测来进行。为此，本研究旨在结合相关文献资料，对当前氧化应激检测在男性不育的临床应用情况进行综述。

氧化应激检测；男性不育；临床应用

在现阶段，我国发生不育症的概率在10.5%～15.7%，其中有接近一半的原因是由精子功能缺陷导致男性不育所造成的。但在目前，精子功能异常的机制并不是十分明确。有大量研究认为，这主要跟男性生殖道内活性氧（ROS）过高，给精子质量及其功能造成相当程度的毒害作用有关。临床在检测男性不育病因时，可通过氧化应激检测来进行，效果相对较好。

1 氧化应激与男性不育

氧化应激（OS）是在活性氧的生成远远高于机体抗氧化防御时所导致的一种对细胞有毒害作用的病理性生物化学反应。机体产生氧化应激主要跟反应性的氧化物和生物抗氧化剂之间的均衡受到破坏有关，使得活性氧的浓度提升明显，导致细胞质膜、蛋白质和DNA等遭到破坏，损害细胞结构，进而发生细胞死亡。在精液当中，活性氧一般是由超氧阴离子（O-2）、羟自由基（-OH）以及过氧化氢（H2O2）等几种组成的。男性不育的原因与活性氧的生成存在着很大关系。Venkatesh等[1]体外试验证实了浓度不高的H2O2和精子之间孵育可以对精子的获能、运动及其与卵子的结合能力等起到刺激效果。精子的顶体反应需要有正常浓度的H2O2参与，但在H2O2浓度＞50 μmol/L条件下，往往会氧化位于精子质膜、线粒体膜等的蛋白巯基，使膜结构受损，进而大大降低了精子功能，严重时甚至导致其功能丧失，使得男性出现不育状况。一般认为，机体在受到外部或内部有害因素的刺激下，ROS的生成会趋于明显，导致男性不育。其中，外部有害因素包括生殖道感染、非特异性炎症、雌激素、精索静脉曲张，以及环境污染及烟酒史等；而内部（精子）有害因素主要包括线粒体呼吸链自氧化、NADPH氧化酶与其底物发生反应、未成熟或畸形精子受G6PD介导等几种。

2 活性氧的毒性作用

在每次射精时，精液通常会受到氧化物酶阳性白细胞、异常精子等潜在性OS的污染，部分精子在受氧化后，还会出现功能降低或丧失的现象。为此，可以说OS给男性的生育能力造成的影响只是程度大小问题。细胞中的脂类成分、蛋白质成分，以及核糖核酸等成分均能够充当活性氧的靶分子，精子氧化损害的程度除了与活性氧的性质及数量有关之外，还受到活性氧的接触时刻、持续时间、温度，以及氧浓度等多种因素有关。

3 氧化应激检测在男性不育临床中的应用

3.1 化学发光检测法的临床应用

在精液标本中，可以观察到ROS能够发出微弱的光。当在精液中加入冷光剂鲁米诺之后，ROS自身的能量便会向鲁米诺移动。此时可将处于激发状态的鲁米诺进行基态回复，让鲁米诺发出425 nm左右的化学光。临床通过采用该化学发光检测法，能够用于对O-2、H2O2以及-OH等几种氧自由基进行检测。不过从某种程度上来说，这也造成了测定选择性差的情况。相比较之下，刘居理等[3]采用光泽精对精液中的ROS进行测定，仅仅在O-2存在的情况下才有化学光现象出现，选择性效果较好。光泽精是吖啶类中少数能够发出化学光的化学物，在附因子的诱导下，存在功能性障碍的男性精子会被检测出有化学发光信号。

3.2 精浆SOD活性检测法的临床应用

在黄嘌呤氧化酶反应系统下，会有一定量的O-2产生，并经O-2氧化羟胺，从而形成亚硝酸盐。临床精浆SOD活性检测法正是借助这种原理来实现的，并在显色剂的作用下，让精液标本中的亚硝酸盐显示成紫红色，最后经可见光分光光度计检测吸光度。在谭雪莲等[4]的研究中，通过黄嘌呤化酶法测定精浆SOD活性，男性不育组ROS要明显高于有生育力的男性健康组，提示采用该OS检测法能够有效用于检测男性不育。而姜全心[5]对91例男性不育患者行精浆SOD活性检测，发现在精子活动力上，男性不育患者的精浆SOD含量大概在（461.4± 121.4）mmol/L，正常男性为（643.5±125.4）mmol/L。SOD等酶类抗氧化剂的减少，使其在中和ROS的毒性作用的能力上出现下降，无法很好地清楚氧自由基，影响了男性的生育能力。

3.3 精浆丙二醛含量检测法的临床应用

硫代巴比妥酸（TBA）比色法、精浆丙二醛（MDA）均属于不饱和脂肪酸过氧化的终产物，临床可通过检测其含量来对精子膜发生脂类过氧化的具体情况进行反映。一般在酸性情况下，TBA和MDA经加热后会有粉红色产物生成，不过受到TBA专一性较差的影响，除了能够与MDA发生反应之外，TBA还能够与部分脂质过氧化物衍生物的分解产物产生反应，因此认为TBA不具备特异性。不过近些年来，有研究表明，高效液相色谱检测法能够对MDA和TBA二者间的反应复合物进行分离，同时还可进行定量检测，其特异效果相对较好，而且还具有较高的灵敏度。在毛毳等[6]的研究中，采用高效液相色谱法对93例不育男性的MDA进行检测，证实不育男性的精浆DNA含量相对较高，而阻塞性无精子男性由于其精液源于含有重要抗氧化物质的前列腺，无精子可发生MDA现象，其精浆MDA的含量与正常男性均比较低。

4 氧化应激检测的临床应用展望

在当前，大约有75%的男性不育是由少精子症、弱精子症所造成的。而出现这种情况往往跟男性精液中的ROS过量导致OS有关，使得男性精液中精子的密度及活力均出现明显降低，给精子的获能与顶体反应带来抑制作用，使精子DNA出现氧化损伤，从而发生男性不育情况。临床在治疗男性不育患者时，大多数研究认为可给予维生素C、维生素E等抗氧化药物治疗。而通过给予男性不育患者化学发光检测法、精浆SOD活性检测法以及精浆丙二醛含量检测法等氧化应激检测，则可以为其治疗提供重要的数据参考。

总的来说，活性氧是造成男性不育的重要因素之一，临床给予氧化应激检测，具有重要的诊断价值，值得推广应用。

[1] Venkatesh S,Deecaraman M,Kumar R,et a1.Role of reactiVe oxygen species in the pathogenesis of mitochondrial DNA(mtDNA)mutatiom in maleinfertility[J].1ndian J Med Res,2009,129(2):127-137.

[2] 邱玉玲.活性氧对男性不育的影响及精液氧化应激的检测方法[J].应用预防医学,2009,15(2):126-128.

[3] 刘居理,罗明.活性氧检测在男性不育中的应用价值[J].现代诊断与治疗,2009,20(4):223-225.

[4] 谭雪莲,黄永汉,李颖嫦,等.男性不育患者精液活性氧和精浆超氧化物歧化酶活性测定的临床价值研究[J].实验与检验医学,2012,26(5):13-15.

[5] 姜全心.男性不育患者精浆SOD和MDA含量的观察[J].临床和实验医学杂志,2005,4(4):132-134.

[6] 毛毳,张丹,王成芳,等.氧化应激性损伤对不育男性精子功能的影响[J].四川大学学报(医学版),2010,7(15):421-422.

R698.2

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1671-8194（2014）22-0383-02