龙胆泻肝丸的薄层色谱鉴别方法改进分析

吴海燕

（吉林省辽源市东辽县人民医院,吉林 辽源 136200）

龙胆泻肝丸的薄层色谱鉴别方法改进分析

吴海燕

（吉林省辽源市东辽县人民医院,吉林 辽源 136200）

目的对龙胆泻肝丸的薄层色谱鉴别方法的改进进行分析探讨，为今后的研究工作提供可靠的参考依据。方法采用醇提法对样品进行处理，经10%硫酸乙醇进行显色，在365nm波长下进行检视，同时对栀子、龙胆、地黄、甘草展开薄层色谱鉴别；采取出提法处理样品，在254nm波长下进行检视，对柴胡、当归进行薄层色谱鉴别。结果改进的方法具有操作简单、斑点完全分离、显示清晰等优势。结论上述改进方式相对于《中国药典（一部）》2010年版中所示方法更加适合龙胆泻肝丸的薄层色谱鉴别，值得关注并推广。

龙胆泻肝丸；薄层色谱鉴别；改进；《中国药典（一部）》2010年版

在中医古方《医方集解》中早有记载龙胆泻肝汤,其方剂组成为:龙胆、柴胡、栀子、黄岑、炙甘草等10味药材,对肝胆实火、三焦湿热具有良好的治疗效果,临床应用十分广泛,临床疗效显著,目前临床应用的剂型较多,以丸剂最为常见。在《中国药典（一部）》[1]2010年版中龙胆泻肝丸薄层鉴别的前处理相对复杂繁琐,在日常快速监督检验中不适合,本次研究中对龙胆泻肝丸的薄层色谱鉴别方法进行了改进,现汇报结果如下。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器

本次实验中所需仪器包括:Reprostar 3型薄层数码成像系统,940型TLC紫外灯箱,TLC pLate HeaterⅢ薄层加热板；F80 型高速万能粉碎机；XT型电子天平；KQ2200B型超声清洗仪器；HH-6型恒温水浴锅、GF254薄层板等。

1.2 实验试药

三个不同常见龙胆泻肝丸、龙胆苦苷对照品、栀子苷对照品、梓醇对照品、柴胡皂苷d、甘草对照药材、当归对照药材,均购自中国药品生物制品检定所；所需试剂和试药均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 龙胆、栀子、甘草、地黄的薄层鉴别

取3个不同常见的龙胆泻肝丸样品各10 g,研细后加入40 mL石油醚,在60～90 ℃条件下超声处理20 min,静置晾凉后过滤,在药渣中加入30 mL甲醇超声处理30 min,静置晾凉后过滤,将滤液浓缩至1 mL作为供试品；按照同样方法自制阴性对照品溶液；取梓醇对照品精密称定后加入甲醇,制成每1 mL溶液含有0.5 mg的溶液作为对照品溶液；取栀子苷对照品精密称定,加甲醇制成每1 mL溶液含有0.5 mg的溶液作为对照品溶液；取龙胆苦苷对照品精密称定,加入甲醇制成每1 mL溶液含有0.5 mg的溶液作为对照品溶液；取甘草对照药材粉末0.5 g,加入5 mL的甲醇后超声处理10 min,取滤液作为对照药材溶液,以薄层色谱法[2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB][2]试验为依据,吸取上述所制溶液各10 μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,展开剂为乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶1∶0.3）为展开剂,展开,取出,晾干,以10%硫酸乙醇作为显色剂,在105 ℃加热至斑点显色清晰,在紫外光灯（365 nm）下观察。结果发现,上述所制的供试品溶液色谱中,在栀子苷对照品、梓醇对照品、甘草对照药材、龙胆苦苷对照品色谱相应位置出现相同颜色的斑点。

2.2 柴胡、当归的薄层色谱鉴别

取3个常见的龙胆泻肝丸样品,研细后精密称定5 g,加入30 mL甲醇后超声处理30 min,静置晾凉后过滤,滤液浓缩至1 mL后作为供试品溶液,按照同样方法自制阴性对照品溶液；取柴胡皂苷d对照品,精密称定后加入甲醇,制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液；取当归对照药材粉末,精密称定0.5 g,加入5 mL甲醇超声处理10 min后静置晾凉后过滤,取滤液作为对照药材溶液。以薄层色谱法[2010年版《中国药典（一部）》附录ⅥB]试验为依据,吸取上述所制溶液各10 μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,展开剂为氯仿-甲醇（8.5∶1.5）,展开,取出,晾干,在紫外光灯（254 nm）下观察。结果观察到:供试品溶液色谱中,与柴胡皂苷d对照品溶液色谱和当归对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点。

3 讨 论

近几年中医药领域的发展十分迅速,使得中药现代研究逐渐热门化。目前对中药有效成分的研究不断深入,紫外分光光度法、高效液相色谱法、薄层色谱法等技术在中药研究工作中发挥了重要作用,得到了广泛的应用[3]。由于受到高效液相色谱法的启示,通过对已有文献报道薄层色谱法的筛选,对同时分离、鉴别多种中药有效成分的薄层色谱法进行寻找可谓一次新型和有意义的常识,使得薄层色谱法对相似化合物同时进行鉴别的研究更加深入。本次实验中是对全信息薄层鉴别理论付诸实践的一种新的常识,全信息薄层鉴别理论期望可以使薄层板的多层次、多成分分离检出性能得以充分发挥[4]。在对硅胶GF254薄层板进行展开后,首先在365 nm紫外光灯下对具荧光的成分进行观察,而后放置在254 nm紫外光灯下对荧光熄灭作用的成分进行观察,最后放置在日光下对各种带颜色的成分进行观察,通过增荧光处理后,再次放置在365 nm紫外光灯下对增荧光的成分或者是254 nm紫外光灯下的荧光熄灭成分进行观察,最后与显色剂反应显色后,再次在365 nm紫外光灯下观察反应后呈现荧光的成分,日光下对反应显色后的各种颜色成分进行观察[6]。该方法可以采用1块薄层板展开1次,尽管性质不同的化学成分会存在重叠现象,但是其在各自的检视条件下可以互不干扰,能够表现出各自的斑点特征,同时收集了多个 层次的不同信息量[7]。本次实验中在同一展开条件下可对龙胆、栀子、甘草、地黄以及各样品的对照品进行展开分层处理,1块薄层板上承载的信息量增加,这对于今后的检验、监督等工作均具有重要意义。相对于《中国药典（一部）》2010年版中龙胆泻肝丸薄层鉴别方法而言,该方法操作简单、结果清晰等优势十分突出。通过本次研究我们体会到,薄层色谱法在鉴别方面相对于纤维鉴别更加容易掌握,且人才培养的周期较短,可以适应目前药学检验、监督工作人力资源短缺的现状,满足了研究需求,同时使薄层色谱鉴别技术的发展得到了一定的推动作用,值得对其给予关注并推广[8-9]。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社,2010:636-637.

[2] 孙国祥,张静娴.系统指纹定量法鉴别龙胆泻肝丸质量[J].分析化学,2009,37(8):1183-1187.

[3] 严红.HPLC法同时测定中药多种有效成分含量的应用[J].天津药学,2010,22(1):67-70.

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R286；R284.1

B

1671-8194（2014）25-0093-02