老年乳腺癌患者癌组织活化型基质金属蛋白酶-2的表达

郭玉芳 苏兴利 霍 健 王 湘 王 爽

(西安医学院病理生理学教研室，陕西 西安 710021)

基质金属蛋白酶(MMP)-2是MMP家族(MMPs)中的一种，属于明胶酶类〔1〕，能够特异性地降解基底膜中的Ⅳ型胶原，在恶性肿瘤侵袭和转移中具有重要作用〔2〕。MMP-2以酶原形式分泌，在细胞外被活化，只有活化型的MMP-2才能发挥其降解细胞外基质成分的作用〔3〕。本研究分析的方法分析老年及非老年乳腺癌患者癌组织中活化型MMP-2的分布。

1 材料和方法

1.1标本来源 正常乳腺组织11例；乳腺癌标本54例，未分型，分为老年组(≥65岁)21例，非老年组(<65岁)33例。标本均来自西安医学院第二附属医院病理科。

1.2备样 取组织50 mg匀浆，加入0.2 ml提取缓冲液(1% Triton X-100，50 mmol/L Tris-HCl pH7.6,200 mmol/L NaCl，10 mmol/L CaCl2)，4℃过夜，离心10 000 r/min，10 min；取上清10 μl与上样缓冲液5 μl混合备用。

1.3DQ明胶原位酶谱(美国Sigma公司)分析 新鲜乳腺癌标本，切6 μm厚冰冻切片，空气干燥30 min，在切片上加入含50 μg/ml的DQ明胶〔明胶带有异硫氰酸荧光素(FITC)标记，当明胶被降解时发出绿色荧光〕，4℃孵育过夜，甘油封片，荧光显微镜下观察。观察后再将此切片做HE染色，用图像分析仪扫描同一部位。荧光的强弱通过明胶酶分析试剂盒中提供的胶原酶进行对比，分别用0.02 U/ml和2 U/ml的胶原酶及1×反应缓冲液与50 μg/ml的DQ明胶混合，2 h后，在荧光显微镜下观察到不同的荧光强度。以此为标准，加入1×反应缓冲液不出现绿色荧光作为-，加入0.02 U/ml胶原酶的不完全降解DQ明胶出现较弱的荧光为+，加入2 U/ml胶原酶的完全降解DQ明胶出现较强的荧光为。

1.4统计学分析 采用SPSS12.0软件进行χ2检验。

2 结 果

绿色荧光出现在肿瘤细胞，在乳腺癌癌组织中，癌巢部位均有较强的绿色荧光出现，在肿瘤边缘癌组织中，也均有绿色荧光的表达，但是荧光表达的强弱不同。正常乳腺组织中2例荧光表达为+，9例为-；非老年组乳腺癌组织中29例荧光表达为，4例为+，与正常乳腺组比较显著升高(P<0.001)；老年组乳腺癌组织中1例荧光表达为，5例为+，15例为-，与正常乳腺组比较无统计学意义(P=0.69)。

3 讨 论

MMP-2蛋白被认为在肿瘤细胞侵袭穿过基底膜的过程中起关键作用。最近研究证明MMP-2的激活机制是由于酶原型的MMP-2(分子量72 kD)与无活性的MMP抑制因子(TIMP)-2、膜型MMP(MT-MMP)后形成MTl-MMP/TIMP-2/MMP-2三聚体复合物，通过细胞表面的MT-MMP对MMP-2进行活化，它为癌瘤周围基底膜的降解提供关键而有效的条件〔4，5〕。尽管大多数肿瘤细胞并非持续表达MMP-2的酶原，但可以利用宿主的间质组织合成分泌的MMP-2酶原。MMP-2的活化与癌细胞的浸润、转移相关，并在肿瘤细胞表面导致其活化〔6〕。其次，与青年人乳腺癌相比，老年人乳腺癌肿瘤的侵袭性较低,疾病发展较慢。从检测肿瘤的生物学指标看，雌激素受体(ER)阳性率较高，组织学分级和细胞周期中S-时相比值较低，人类表皮生长因子受体2(HER2/neu)表达下降。肿瘤的组织学类型中，黏液腺癌、乳头状癌的比例相对较高。老年人乳腺癌发展较年轻人缓慢，区域淋巴结转移也较晚。这些都反映了老年人乳腺癌的生物学特性，恶性程度较青年人乳腺癌低，疾病发展较慢，侵袭性较低，肿瘤属惰性的多。这对于临床治疗老年组乳腺癌有很强的指导意义。

4 参考文献

1Kleiner DE，Stetler-Stevenson WG.Matrix metalloproteinases and metastasis〔J〕.Cancer Chemother Pharmacol，1999；43：S42-51.

2Chambers AF，Matrisian LM.Changing views of the role of matrix metalloproteinases in metastasis〔J〕.J Natl Cancer Inst，1997；89：1260-70.

3Kaori K，Taketoshi S，Takashi S，etal.Activation of pro-MMP-2 mediated by MT1-MMP in human salivary gland carcinomas：possible regulation of pro-MMP-2 activation by TIMP-2〔J〕.J Pathol，2004；202：403-11.

4Mook ORF，Van Overbeek C，Ackema EG，etal. In situ localization of gelatinolytic activity in the extracellular matrix of metastases of colon cancer in rat liver using quenched fluorogenic DQ-gelatin〔J〕.Histochemi Cytochem，2003；51(6)：821-9.

5Annette L，Claudia M-A，Clarissa A，etal.Cellular protein and mRNA expression patterns of matrix metalloproteinases-2，-3 and -9 in human breast cancer：correlation with tumour growth〔J〕.J Mol Histol，2004；35：443-55.

6Yoshifumi L，Akiko T，Noriko L，etal.Homophilic complex formation of MT1-MMP facilitates proMMP-2 activation on the cell surface and promotes tumor cell invasion〔J〕.EMBO J，2001；20(17)：4782-93.