桃仁、苦杏仁及其混伪品质量控制研究进展

2014-01-24黄丽丹

中国药业 2014年8期

崔田，黄丽丹

（1.安徽省蚌埠市食品药品检验所，安徽蚌埠 233000； 2.安徽中医学院药学院，安徽合肥 230031；3.安徽省食品药品检验所，安徽合肥 230051）

桃仁来源于蔷薇科桃 Prunus persica（L.）Batsch.或山桃Prunus davidiana（Carr.）Franch.的干燥成熟种子，味苦、甘、平，归心、肝、大肠经，功效为活血祛瘀、润肠通便、止咳平喘，用于经闭痛经、瘕痞块、肺痈肠痈、跌扑损伤、肠燥便秘、咳嗽气喘[1]。苦杏仁来源于蔷薇科植物山杏 Prunus armeniaca L.var.ansu Maxim.、西伯利亚杏 Prunus sibirica L.、东北杏 Prunus mandshurica（Maxim.）Koehne或杏 Prunus armeniaca L.的干燥成熟种子，味苦、微温，有小毒，归肺、大肠经，功效为降气止咳平喘、润肠通便，用于咳嗽气喘、胸满痰多、肠燥便秘[1]。桃仁、苦杏仁为同科同属植物的种子，外形相似，使用时易混淆，若没有丰富的药材鉴别经验，很难迅速将两者加以区别。现对桃仁、苦杏仁及其混伪品的鉴别研究进展进行综述，为准确区分桃仁、苦杏仁提供参考，以确保用药安全。

1 性状

历版《中国药典》收载的桃仁来源均为蔷薇科植物桃 Prunus persica（ L.）Batsch.或山桃 Prunus persica davidiana（Carr.） Franch.的干燥成熟种子[1]。桃仁外观呈扁长卵形，长 1.2 ～1.8 cm，宽0.8～1.2 cm，厚 0.2 ～0.4 cm；表面黄棕色至红棕色，密布颗粒状突起；一端尖，中部膨大，另端钝圆稍偏斜，边缘较薄；尖端一侧有短线形种脐，圆端有颜色略深不甚明显的合点，自合点处散出多数纵向维管束；种皮薄，双子叶，类白色，富油性；气微，味微苦。山桃仁外观呈类卵圆形，较小而肥厚，长约 0.9 cm，宽约0.7 cm，厚约 0.5 cm[1]。

易骏[2]对福建、安徽、新疆所产桃仁的性状进行了比较，发现福建产形体较扁而瘦瘪、表面凹纹最明显，安徽产形扁而体饱满、表面凹纹最不明显，新疆产形体饱满、表面凹纹明显；口味上安徽产最苦，福建、新疆产次之；百粒重新疆产 31.8 g，安徽产 30.9 g，福建产仅 25.3 g。

2010年版《中国药典（一部）》规定苦杏仁为蔷薇科植物山杏Prunus armeniaca L.var.ansu Maxim.、西伯利亚杏 Prunus sibirica L.、东北杏 Prunusmandshurica（Maxim.）Koehne.或杏 Prunusarmeniaca L.的干燥成熟种子。苦杏仁外观呈扁心形，长1～1.9 cm，宽0.8 ～1.5 cm，厚 0.5 ～0.8 cm；表面黄棕色至深棕色；一端尖，另端钝圆，肥厚，左右不对称，尖端一侧有短线形种脐，圆端合点处向上具多数深棕色的脉纹；种皮薄，子叶2片，乳白色，富油性；气微，味苦[1]。

杨琪琴[3]比较了桃仁和苦杏仁的性状，指出桃仁外形为扁长形，颜色呈黄棕色至红棕色，顶端尖，中部膨大，基部钝圆而偏斜，边缘薄；苦杏仁外形扁心型，颜色呈黄棕色至深棕色，顶端略尖，基部钝圆，左右不对称，肥厚。于林林[4]指出，桃仁外观呈扁椭圆形，扁平，较杏仁大而扁；种皮有细小颗粒状突起。

李盈蕾等[5]认为，苦杏仁与桃仁的形状与大小均相似，均略呈扁长卵形，然苦杏仁顶端略尖而桃仁稍钝，且较桃仁略为肥厚；表面均呈黄棕色至深棕色或红棕色，但苦杏仁表面有微细纵皱，而桃仁表面密布颗粒状突起；均具类白色富油性，子叶2片，气微，味苦，而苦杏仁还有特殊香气。

高娅芝等[6]报道，提出鉴别桃仁与杏仁，可通过看大小、观形状、视色泽、摸质感、尝味道等方式细心观察体会。杏仁较桃仁略小，但比桃仁稍厚。杏仁正面呈偏心脏形，似扑克牌之“红桃”样，上端尖锐，基部钝圆而凹陷，左右部对称，侧面上尖，底部膨大；桃仁则呈长卵圆形，扁平，上端钝圆、不尖，基部钝圆无凹陷，且略有偏斜，侧面较扁平，边缘薄，中部略有鼓起。杏仁皮呈棕色至暗棕色，桃仁呈黄棕色至红棕色。杏仁皮较桃仁厚，表面皱纹粗糙，摸之为粗涩感；桃仁皮较薄，皮脆易碎，皱纹细腻，摸之感觉光滑。杏仁较桃仁味苦，且有特殊杏仁味。该文献对杏仁基部左右部对称及桃仁皱纹细腻、摸之感觉光滑的描述与药典等文献记载不同。

叶会洲等[7]报道，苦杏仁呈心脏形，顶端略尖，基部钝圆，左右不对称，种皮不易脱离；色棕至暗棕；桃仁呈长卵型，顶端尖，中部膨大，基部钝圆而偏斜，边缘薄，种皮易剥去，色黄棕至红棕。

王甫成等[8]认为，苦杏仁、甜杏仁、桃仁、山桃仁的性状可从外形、口尝、大小、脉纹等方面鉴别比较。苦杏仁呈扁心形、味苦、体最小、脉纹布满种皮；甜杏仁呈扁心脏形、味微甜、体较大、脉纹多数；桃仁呈长卵圆形、味苦微酸、体最大、脉纹少数；山桃仁呈类卵圆形、味微苦、体较小、脉纹多数。

2 显微鉴别

2010年版《中国药典（一部）》桃仁项下收载有种皮粉末（或解离）片的显微特征：桃仁为石细胞黄色或黄棕色，侧面观贝壳形、盔帽形、弓形或椭圆形，高 54～153 μm，底部宽约至 180 μm，壁一边较厚，层纹细密；表面观类圆形、圆多角形或类方形，底部壁上纹孔大而较密；山桃仁为石细胞淡黄色、橙黄色或橙红色，侧面观贝壳形、矩圆形、椭圆形或长条形，高 81～198（279）μm，宽约至 128（198）μm；表面观类圆形、类六角形、长多角形或类方形，底部壁厚薄不匀，纹孔较小[1]。

徐国均[9]描述了山杏的粉末特征：石细胞单个散在或2～5个或数个连接成行或聚集成群，淡黄色、鲜黄色或黄棕色；种皮外表皮细胞黄棕色或棕色，常与种皮石细胞相连，相连处有时可见较大的类三角形细胞间隙；子叶细胞较大，含糊粉粒，直径5～7 μm，较大的糊粉粒中有一细小簇晶，并含脂肪油滴；草酸钙簇晶细小，存在于子叶细胞的糊粉粒中或单个散在，直径2～6 μm；内胚乳呈多角形、类多角形，直径 14 ～29 μm，壁厚至 5 μm，含脂肪油滴。西伯利亚杏粉末特征为石细胞单个散在数个相连，草酸钙簇晶直径 4～7 μm，内胚乳细胞直径 11～27 μm。

李盈蕾等[5]指出，苦杏仁种皮粉末中石细胞橙黄色近圆形；而桃仁种皮粉末中石细胞为黄色或黄棕色，侧面观为贝壳形、盔帽形、弓形、椭圆形，表面观为类圆形、圆多角形或类方形，底部壁上纹孔大而较密。

高娅芝等[6]指出，杏仁皮多为薄壁细胞，表层可散见橙黄色圆形石细胞；桃仁皮多为单个或数个相聚的黄色至棕黄色的类圆形、贝壳形或椭圆形石细胞。

叶会洲等[7]指出，苦杏仁石细胞类圆形，胞壁增厚基本一致；桃仁石细胞类圆形、贝壳形或椭圆形，壁常一边增厚。

王甫成等[8]分别观察了苦杏仁、甜杏仁、桃仁、山桃仁显微组织结构，指出除甜杏仁中有簇晶，另外3种均无。四者从种皮的脉纹进行鉴别，既准确又易于操作。杏仁种皮具有叶的特征，脉纹清晰。两种杏仁主脉多条，均从基部平行出发，侧脉的分枝特点不同，苦杏仁既有二叉状分支侧脉，又有呈羽状分枝侧脉，甜杏仁仅具有二叉状分支侧脉，而且具二叉状分枝的主脉仅1～2条。桃仁的种皮也具有叶的特征，但脉纹欠清晰。两种桃仁主脉多条，排列无序，分枝较多，不规则。山桃仁的叶脉凹陷，且各侧脉在种皮中间位置相互联合呈波浪状，桃仁的叶脉凸起明显。

易骏[2]观察了福建、安徽、新疆桃仁的组织横切面和粉末特征，均观察到种皮外表皮中成束的小型螺纹导管，福建产桃仁中还可观察到非腺毛状石细胞。

常琳等[10]观察了桃仁的组织横切面和粉末特征，认为组织横切时，桃仁种皮外表皮细胞石细胞化，而种皮内表皮细胞界限不很清楚；山桃仁子叶细胞中糊粉粒较多，且含有较多细小砂晶。粉末鉴别中，各种细胞的显微特征与横切面组织相比较，其外、内种皮表皮细胞界限较清楚；石细胞形状多样，层纹孔沟较易观察，种皮外表皮薄壁细胞中有成束的小型螺纹导管。同时提出，桃仁和苦杏仁可以通过粉末中螺纹导管的有无进行鉴别。

3 理化鉴别

李盈蕾等[5]总结认为，苦杏仁数粒与水共研，即产生苯甲醛的特殊香气，而桃仁则无；分别将苦杏仁与桃仁用沸水浸泡，剥下种皮，用25%K2CO3水溶液与2%漂白粉水溶液等量混合，取上清液，对种皮脱色、水洗，再用2%甲基绿水溶液染色后观察，二者从基部合点发出的细纹（维管束）均沿种皮纵行，但苦杏仁的分枝较多，而桃仁的分枝较少。

有人报道[6]，取苦杏仁、甜杏仁、山桃仁、桃仁数粒，捣碎后分别取约0.5g，置带塞试管中，加5%硫酸溶液3 mL充分摇匀，在试管中悬挂1条三硝基苯酚钠溶液湿润的滤纸条，用软木塞塞紧，试管置45℃温水浴中10 min，结果苦杏仁试管的滤纸条由黄色变为砖红色，其他3种均未变色（氰苷的特性）。

4 薄层鉴别

2010年版《中国药典（一部）》桃仁及苦杏仁项下均收载了以苦杏仁苷为对照的薄层鉴别，但因供试液的制备方法不同，无法比较两者的区别。

王甫成等[8]取苦杏仁、甜杏仁、桃仁、山桃仁粉末各1g，分别用石油醚脱脂，80%甲醇30 mL超声波提取30 min，滤液作为供试品溶液；另取苦杏仁苷对照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg溶液，作为对照品溶液；以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水（15∶40∶22∶10）5～10℃放置12 h的下层为展开剂，磷钼酸硫酸溶液显色，结果苦杏仁比其他样品多2个斑点。

易骏[2]通过7种不同展开剂进行薄层分析发现，福建、安徽、新疆产桃仁的化学成分存在差异。在以环己烷－乙酸乙酯（7∶3）为展开剂的薄层色谱图中，安徽产桃仁95%乙醇提取液点样展开后有3个显亮蓝色荧光的斑点，而新疆产桃仁95%乙醇提取液则无此斑点出现；安徽产桃仁水提取液点样展开后在比移值为0.12处出现亮蓝色荧光的斑点，而新疆产桃仁水提液则无此斑点。

5 蛋白质电泳鉴别

李桂兰[11]通过可溶性蛋白质电泳发现，苦杏仁与桃仁的蛋白质谱带区别明显，具有3个特征性谱带；桃仁和山桃仁之间相似性较大，但亦有明显的区别，显示了它们之间较近的亲缘关系。

叶会洲等[7]分别对苦杏仁4个基源、桃仁2个基源样品进行了蛋白质电泳分析，结果显示，苦杏仁与桃仁的蛋白电泳谱有较明显区别，在A区两者均有2条谱带，B区苦杏仁有3条谱带而桃仁有4～5条谱带。

6 含量测定

桃仁中主要含有脂肪油类、苷类、氨基酸和蛋白质、挥发油、甾体和黄酮及其糖苷类化合物[12]。用高效液相色谱（HPLC）法测定桃仁中苦杏仁苷具有简便快捷、准确灵敏、重复性好的优点[13－14]，2010年版《中国药典（一部）》桃仁项下采用HPLC法测定苦杏仁苷的含量，限度为不少于2.0%[1]。另外，苦杏仁苷的含量测定方法还有二阶导数光谱法、薄层扫描法等。

颜永刚等[13]以苦杏仁苷为指标成分，采用HPLC法测定了采自四川、陕西、甘肃、山西以及购自安徽亳州、河北安国、成都荷花池等全国各大药材市场的不同产地和不同品种的35份桃仁样品中苦杏仁苷的量。结果表明，山桃仁较桃仁的苦杏仁苷量高，20份山桃仁样品质量分数为 0.67% ～2.81%，平均 1.39%；15份桃仁样品质量分数为0.63% ～1.63%，平均0.95%。产地不同的桃仁药材中苦杏仁苷量差异较大，如山桃仁采自新疆乌鲁木齐的量最高（2.29% ），而四川北川的量最低（0.67% ）；桃仁采自陕西延安的量最高（1.38% ），山西汾阳的量最低（0.67% ），但采于陕西同一省区的3份样品量则差异较小。

叶晶晶[14]采用HPLC法对不同产地桃仁药材中苦杏仁苷的含量进行测定，发现不同产地桃仁药材中苦杏仁苷的含量具有一定差异，陕西产桃仁普遍较高，为山东产桃仁的2倍多，而同一产地的药材可能由于生长环境和栽培技术等因素而含量差异较小。用HPLC法测定不同产地桃仁中苦杏仁苷含量，可为开发利用桃仁、苦杏仁苷及评价桃仁质量、临床合理用药提供科学依据，为筛选优质桃仁种质资源提供参考。

桃仁中苦杏仁苷的紫外吸收光谱背景干扰较大，不能直接采用紫外吸收光谱或一阶导数光谱扫描测试。易骏[15]用二阶导数光谱法对3种不同产地桃仁的甲醇提取液进行分析发现，不同产地桃仁的苦杏仁苷含量差异较大，福建产较高（2.37%），新疆次之（2.06% ），安徽最低（1.38% ）。桃仁中苦杏仁苷含量（均低于2.5%）与苦杏仁中苦杏仁苷含量（一般大于5%）相差悬殊，因此临床使用时应注意不能混用。

李吉来等[16]用薄层扫描法测定苦杏仁和桃仁中苦杏仁苷的含量。苦杏仁和桃仁分别以甲醇提取后，点于GF254薄层板上，以含水氯仿－甲醇（2 ∶1）为展开剂，扫描波长 λS＝210 nm，λR＝235 nm，直接扫描测定苦杏仁苷的含量。此方法稳定性较好，在展开后24 h内测定均稳定。

梁颖等[17]采用索氏提取法和热榨法提取，以用气相色谱－质谱（GC－MS）法分析桃仁、山桃仁、光桃仁的脂溶性成分，并对不同品种不同产地的桃仁进行相似度和聚类分析，共鉴定出21种化合物，峰面积百分率达90%以上。相似度分析结果表明，不同品种、不同产地桃仁的脂溶性成分具有明显的种间差异。桃仁为人工选育栽培品种，山桃仁和光桃仁均为野生品种。聚类分析也表明，家桃仁与山桃仁、光桃仁差异明显，3种桃仁的脂溶性成分存在明显种间差异。

颜永刚等[18]对桃仁和山桃仁中所含氨基酸的种类和质量分数进行了分析，结果表明，桃仁与山桃仁中均富含17种氨基酸，其中尤以谷氨酸质量分数最高，天门冬氨酸、精氨酸和亮氨酸质量分数也很高；桃仁中各种氨基酸的总质量分数达到23.77%，其中必需氨基酸质量分数为6.76%，山桃仁中氨基酸的总质量分数为26.85%，其中必需氨基酸质量分数为7.87%，均高于桃仁。

裴瑾等[19]采用GC法测定了34批桃仁样品中棕榈酸、油酸、亚麻酸的含量，建立了评价桃仁的GC方法。

苦杏仁中主要成分为苦杏仁苷、苦杏仁油等[20]。2010年版《中国药典（一部）》苦杏仁项下采用HPLC法测定苦杏仁苷的含量，限度为不少于3.0%[1]。对苦杏仁中苦杏仁苷的含量测定研究报道主要是HPLC法。杨书斌等[21]以少量正己烷为分散溶剂，用甲醇超声提取法提取苦杏仁苷，建立了适用于测定苦杏仁、杏苦仁和炒苦杏仁中炒苦杏仁苷含量的HPLC法，并与银量法进行比较，结果HPLC法测得的苦杏仁苷含量高于银量法，且重复性好。

董海荣等[22]采用HPLC法定量分析23个不同产地的苦杏仁中苦杏仁苷的含量，并对水浸出物含量、脂肪油含量进行了分析，结合系统聚类分析法对其进行化学模式识别研究。方法学考察结果表明，所建立的苦杏仁苷分析方法有较好的重现性，不同产地苦杏仁中含量存在较大差异。利用系统聚类分析法对其指标成分含量进行聚类，结果表明，23个产地的苦杏仁样品按其质量等级划分为两类，河北和内蒙古部分地区的苦杏仁质量较好。

7 指纹图谱研究

中药发挥药效作用的成分复杂，研究的立足点是其整体性，仅以1个或多个指标成分作为质控指标，不能很好诠释中医用药的特点。针对这一问题，沈旭等[23]采用超高效液相色谱（UPLC）法首次对桃仁UPLC特征性指纹图谱研究方法的构建进行了初步研究，从整体药材色谱图入手，相对以往以仅苦杏仁苷单一化学成分作为鉴别指标要全面得多，为桃仁药材质量的分析与控制提供了更可靠的方法和依据。

裴瑾等[24]以34批不同品种、不同产地的桃仁药材为研究对象，在明确桃仁脂肪酸成分的基础上，建立了桃仁脂肪酸GCMS指纹图谱，通过对其分别进行系统聚类分析和相似度分析，从而实现对桃仁质量的分类评价。

魏惠珍等[25]对10批来源不同的炒苦杏仁饮片指纹图谱进行测定，采用夹角余弦法对10批样品图谱进行相似度计算，发现除产地为辽宁、吉林、内蒙的3批样品相似度差异较大外，产地为河北的6批样品相似度均在0.84以上，说明不同产地以及炮制、储存过程对炒苦杏仁饮片的质量影响较大，这为炒苦杏仁饮片的质量控制提供了更全面的信息；对不同来源10批样品的相对保留时间比较，发现其符合程度较好，说明不同来源的药材主要成分具有一致性，但峰面积差异较大，则说明不同来源的药材成分含量差异较大。

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